失代偿性肝硬化患者血清VEGF、TGF-β1、TNF-α检测及临床意义
发表时间：2010-07-08 浏览次数：415次
作者：章幼奕， 邹美银， 吴月平， 施旦华， 陶 虎， 高金华 作者单位：(南通大学附属南通第三医院感染科，南通 226006)
【摘要】 目的： 检测失代偿性肝硬化(DLC)患者血清内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，探讨血清VEGF、TGF-β1、TNF-α对DLC预后判断的意义。方法： 选择DLC患者86例，同步测定血清VEGF、TGF-β1、TNF-α，分析三者水平变化与肝脏损伤程度的关系。结果：DLC患者血清VEGF、TGF-β1、TNF-α均明显高于健康组，随着肝硬化、肝癌发展，TGF-β1、TNF-α水平逐渐下降(P<0.05，P<0.01);发生慢加亚急性肝衰竭(SACLF)患者VEGF、TNF-α水平高于慢性肝衰竭(CLF)患者(P<0.05);中晚期SACLF患者VEGF、TNF-α高于早期，早中期患者TGF-β1水平低于晚期(P<0.05);死亡患者血清VEGF、TGF-β1水平明显高于病情好转者(P<0.01)，TNF-α低于病情好转者(P<0.05)。结论：DLC患者血清VEGF、TGF-β1、TNF-α的水平与疾病的严重程度及预后密切相关，它们在DLC发生发展过程中可能起重要作用。
【关键词】 肝硬化;失代偿;内皮生长因子;转化生长因子β1;肿瘤坏死因子-α
Detection and significance of serum VEGF, TGF-β1,TNF-α in patients
with decompensated liver cirrhosis
ZHANG Youyi, ZOU Meiyin, WU Yueping, et al (Department of Infectious Diseases,the Third People's Hospital of Nantong, Nantong226006)
[Abstract] Objective: To evaluate the significance of serum vascular endothelial growth factor(VEGF)，transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and tumor necrosis factor-α(TNF-α) in predicting prognosis of patients with decompensated liver cirrhosis (DLC). Methods: Serum VEGF, TGF-β1, and TNF-αwere detected in 86 patients with DLC. The correlations between the changes of serum VEGF , TGF-β1 and TNF-αand the degree of liver injury were analyzed. Results: The serum levels of VEGF, TGF-β1 and TNF-αwere all higher than those of healthy controls.With the development from liver cirrhosis to hepatic carcinoma, the levels of serum TGF-β1 and TNF-α became lower and lower(P<0.05, P<0.01).The levels of serum TGF-β1 and TNF-α were higher in SACLF patients than those in CLF patients(P<0.05).The serum of VEGF and TNF-α levels were higher in the medium-term or later stage cases than those in the early stage cases, but the serum TGF-β1 levels were lower in the early or medium-term stage cases than those in the later stage cases(P<0.05).The levels of serum VEGF and TGF-β1 were higher in the died patients than those in the survivals(P<0.01), but the level of serum TNF-α was converse(P<0.05). Conclusion:The serum levels of VEGF, TGF-β1 and TNF-αin patients with DLC are closely associated with the severity and prognosis of the disease.They may play important roles in the pathogenesis of DLC.
[Key words] Liver cirrhosis; Decompensated;Vascular endothelial growth factor; Transforming growth factor-β1;Tumor necrosis factor-α
近年来，细胞因子对肝脏疾病的作用越来越受到关注。多项研究表明，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)在各类肝病的发生发展中起着重要作用。但关于上述3种细胞因子在失代偿性肝硬化(decompensated liver cirrhosis，DLC)中的作用和意义报道在国内外均少见。为探讨VEGF、TGF-β1、TNF-α在DLC中的临床意义，我们进行了相关研究。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2005年3月～2008年4月我院住院DLC患者86例，其中男66例，女20例，年龄16~78岁，平均50.7±11.6岁。乙型肝炎病毒(HBV)感染72例，HBV、丙型肝炎病毒(HCV)感染2例，HBV重叠戊型肝炎病毒(HEV)感染8例，自身免疫性肝病2例，病因未明2例;DLC合并有原发性肝癌(HCC)33例。根据《病毒性肝炎防治指南》[1]和《肝衰竭诊治指南》的诊断和分期标准[2]，符合慢性肝衰竭(chronic liver failure，CLF)表现者 45例，慢加亚急性肝衰竭(subacute-on-chronic liver failure, SACLF) 表现者41例，其中SACLF早期患者22例，中期患者9例，晚期患者10例。在86例 DLC患者中，病情好转60例，死亡26例(包括因病情恶化自动出院后死亡)。所有患者均经各型肝炎病毒血清学标志物检测，B型超声、腹部CT或MRI检查。同时选取20例体检健康者为正常对照。
1.2 方法
1.2.1 标本收集 血液标本收集后及时分离血清，放置在-70 ℃低温冰箱内保存，集中检测血清VEGF、TGF-β1、TNF-α。
1.2.2 血清VEGF、TGF-β1、TNF-α的检测 血清VEGF、TGF-β1、TNF-α检测均采用酶联免疫(ELISA)法，按说明书进行操作。四甲基联苯胺(TMB)显色，Stat Fax2100型酶标比色仪测定各孔吸光度(A)，根据同步检测系列浓度-吸光度曲线计算出各标本的浓度。检测VEGF、TGF-β1、TNF-α的试剂盒分别由美国MARKET INC、北京生物晶美公司、深圳达科为生物技术有限公司提供。
1.2.3 统计学方法 应用SPSS11.5软件进行统计学处理，计量数据用■±s表示，多组资料用方差分析，两两比较用q检验，两组间比较用Student t检验;两组数据间相关关系的比较用直线相关分析，P<0.05表示有统计学意义。
2 结 果
2.1 不同基础疾病、临床类型、SACLF临床分期、预后患者血清VEGF、TGF-β1、TNF-α水平 见表1。SACLF患者血清VEGF、α比CLF患者明显升高，41例SACLF患者中晚期血清VEGF和TNF-α高于早期、晚期血清TGF-β1高于早期，DLC死亡患者血清VEGF、TGF-β1水平均比病情好转患者外高，TNF-α水平降低。
2.2 DLC血清VEGF、TGF-β1、TNF-α三者之间的相关性 DLC患者血清VEGF与TGF-β1相关系数r=0.044(P>0.05);VEGF与TNF-α相关系数r=-0.039(P>0.05);TGF-β1与TNF-α相关系数r=-0.1209(P>0.05)。
3 讨 论
VEGF在肝脏遭受损伤和切除后的肝细胞再生过程中起着重要作用[3]。在本研究中我们发现DLC患者血清VEGF含量较正常对照组明显增高，在由肝硬化、肝癌引起DLC患者中，血清VEGF的水平虽逐渐增高，但两者之间相比差异无统计学意义。考虑发生DLC时，肝细胞的坏死较多，肝细胞自分泌VEGF的含量占比重较小，而由树突状细胞等旁分泌的VEGF占优势[4]。DLC引起的SACLF患者VEGF水平比CLF升高，考虑可能与SACLF患者肝组织炎症坏死程度比CLF患者更严重。研究资料显示由DLC引起中晚期SACLF患者VEGF的水平较早期有明显的增高;死亡患者血清VEGF水平明显高于病情好转患者(P<0.01)，这与Poon等报道一致[5]，提示DLC患者血清VEGF水平能反映肝功能损害和肝脏病变的严重程度，并可作为DLC预后判断的指标。
TGF-β1对纤维原细胞有促进生长的作用，它主要由激活的Kupffer细胞、受损的肝细胞、血小板凝聚释放产生。本研究表明DLC患者的TGF-β1较健康者明显升高，并随着病情的加重TGF-β1进一步升高，死亡患者TGF-β1水平比病情好转者高，这些研究结果均表明TGF-β1能反映肝衰竭患者肝脏损伤程度，对肝衰竭预后的判断有重要的临床意义。本研究还表明随着肝硬化、肝癌的发展，TGF-β1有下降的趋势，这与先前多项研究结果[6]相反，可能为肝硬化后期患者肝细胞再生能力下降及肝细胞的炎症程度相对较轻有关[7]，是否存在血小板计数下降影响TGF-β1产生有待进一步研究。
TNF-α主要由活化的单核-吞噬细胞产生，其异常分泌可作为机体炎症、损伤和休克的重要的炎性介质，参与诱导细胞的凋亡过程[8]。近年研究显示TNF-α可诱导肝细胞凋亡并引发肝功能衰竭[9]。本研究表明DLC患者TNF-α水平较正常对照组明显升高，其原因有：(1)肝炎病毒在肝内的复制诱导;(2)肝细胞损伤造成肝清除内毒素能力下降，导致内毒素血症，诱导TNF-α升高[10];(3)肝衰竭时可继发自身免疫损伤，致TNF-α产生增加;(4)肝脏细胞损伤后对TNF-α清除能力下降。但本研究亦发现， SACLF比CLF高，SACLF早期比中晚期高，考虑可能为TNF-α在炎症反应和纤维化启动时起重要作用，随着病情的进展加重有下降的趋势，死亡患者比病情好转患者明显下降。
VEGF、TGF-β1、TNF-α均为DLC发生发展中的重要细胞因子，但三者之间无明显的相关性，考虑可能是三者的合成分泌机制和路径不尽相同。在DLC患者中，动态监测血清VEGF、TGF-β1、TNF-α变化对判断临床预后有重要的意义。
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