肝脏疾病患者血清细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10的检测
发表时间：2010-02-26 浏览次数：533次
作者：王崇，姜艳芳，金清龙，鲍万国，王峰，牛俊奇* 作者单位：130021，吉林长春 吉林大学第一医院感染科 【摘要】 目的 分析细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10在肝病患者血中的浓度改变及临床意义。方法 应用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒体外检测不同类型肝病患者血清细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10的浓度。结果 IL-4、TNF-α、IFN-γ在急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化及重型肝炎组患者外周血的浓度，较正常对照组，均显著升高(P<0.001～P<0.05)，而IL-10的肝病组与正常组之间、肝病组之间相比，均未有显著差别(P>0.05);IFN-γ在乙型肝炎肝硬化组中的浓度显著高于慢性乙型肝炎组(P<0.01)和重型肝炎组(P<0.05);IL-4在重型肝炎组中的浓度显著高于急性(P<0.05)、慢性乙型肝炎组(P<0.05)。结论 细胞因子IL-4、IFN-γ、TNF-α在乙型肝炎病毒感染中起重要作用;细胞因子IL-4、TNF-α，IFN-γ分别参与乙型肝炎病毒感染中的促纤维化作用和抗纤维化作用;促炎因子IFN-γ、TNF-α和抗炎因子IL-4共同参与重型肝炎的发病过程。
【关键词】 细胞因子 肝病
The detection of cytokines IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10 in the serum of patients of liver diseaseWANG Chong,JIANG Yan-fang,JIN Qing-long,et al. Department of Infectious Disease, First Hospital, Jilin University, Changchun 130021 China
Abstract: Objective This study was designed to detect the concentration of cytokines TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10 and assess its clinical significance in different liver diseases.Methods A blood sample was collected from 165 patients of liver diseases which were admitted to First Hospital of Jilin University from Feb. 2006- Feb. 2007, among which 36 were severe hepatitis, 54 HBV related cirrhosis, 46 chronic HBV hepatitis, 15 acute HBV hepatitis patients. 14 healthy people were chosen as control group.the liver diseases were diagnosed on the basis of《prevention and cure of viral hepatitis》and 《Hepatic failure guideline》. Double sandwiches ELISA was used to detect serum cytokines concentration.Results IFN-γ, TNF– α, IL-4 concentrations in acute and chronic HBV hepatitis, HBV related cirrhosis and severe hepatitis groups were increased significantly than that of normal control group(P<0.05)，while IL-10 showed no difference between liver disease group and normal control group. Among liver cases, IFN-γ concentration in cirrhosis group was significantly higher than that of chronic HBV hepatitis and severe hepatitis group (P<0.05). IL-4 concentration in severe hepatitis group was significantly higher than that of acute and chronic hepatitis B (P<0.05).Conclusion Cytokines such as TNF–α, IFN-γ and IL-4 play an important role and involve in the fibrogenesis and anti-fibrogenesis in the HBV infection. Proinflammatory factors of TNF–α, IFN-γ and anti-inflammatory factor of IL-4 work together in the course of severe hepatitis.
Keywords:cytokine；liver disease
乙型肝炎发病率高、治疗困难、对人类健康危害严重，乙肝引起的机体免疫反应主要由T细胞介导，T淋巴细胞分为杀伤性T淋巴细胞(CTL或Tc)和辅助T淋巴细胞(Th)，Th细胞可以分为Th1和Th2两个主要亚型，Th1分泌TNF、IFN-γ等细胞因子，介导细胞免疫，Th2细胞主要分泌IL-4、IL-10等细胞因子，介导体液免疫，上述细胞因子在机体乙型肝炎病毒感染的慢性化、肝脏纤维化、重型肝炎中均具有重要作用，我们将选用上述4种细胞因子来检测它们在不同肝病中浓度改变及临床意义。
1 材料与方法
1.1 病例选择及诊断标准 2006年2月～2007年2月入住吉林大学一院传染科的肝病患者165人，重型肝炎者36人，男性28人，女性8人，平均44.8岁;乙型肝炎肝硬化者54人，男性48人，女性6人，平均48.4岁;慢性乙型肝炎者46人，男性41人，女性5人，平均39.8岁;急性乙型肝炎者15人，男性10人，女性5人，平均37.1岁;正常对照组(体检中心体检的健康者)14人，男性5人，女性9人，平均36.0岁。上述患者入院后，采集静脉血(2～4)毫升，留取血清或血浆置于-20℃冷冻保存。诊断标准参照2000年9月西安学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》[1]及中华医学会感染病学分会肝衰竭与人工肝学组，中华医学会肝病学分会重型肝病与人工肝学组联合制定的《肝衰竭诊疗指南》[2]。
1.2 实验试剂、仪器及方法 IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10定量酶联检测试剂盒;Bio-Rad 550酶标仪(美国);应用ELISA方法检测血清中上述四种细胞因子。
1.3 统计学方法 采用SPSS11.5软件对数据进行分析，采用单因素分析
1.4 细胞因子标准曲线 用一系列不同浓度的参考标准品在相同条件下制作标准曲线。以检测物浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。(1)所有OD值都减除空白值后再行计算;(2)以标准品1000、500、250、125、62.5、31.25、15.62、0pg/ml之OD值作图，画出标准曲线，将浓度作为X轴，OD值作为Y轴;(3)根据样品的OD值及曲线的斜率计算出细胞因子的含量。
2 结果
各种肝病的细胞因子的浓度测定结果IL-4、TNF-α、IFN-γ在急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化及重型肝炎组患者外周血的浓度，较正常对照组相比，均是显著升高的(P<0.001～P<0.05)，而IL-10在肝病组与正常组之间、肝病组之间相比，均未有显著差别(P>0.05);其中IFN-γ在乙型肝炎肝硬化组中的浓度显著高于慢性乙型肝炎组(P<0.01)和重型肝炎组(P<0.05);IL-4在重型肝炎组中的浓度显著高于急性(P<0.05)、慢性乙型肝炎组(P<0.05)。具体数值见表1
3 讨论
在乙型肝炎病毒进入机体，机体对其进行的免疫应答中，T淋巴细胞及其分泌的TNF、IFN-γ、IL-4、IL-10等细胞因子起着重要的作用。李氏[3]研究示：TNF-α、IFN-γ在急性、慢性乙型肝炎中浓度均是明显高于正常组，急性乙型肝炎组的IFN-γ浓度显著高于慢性乙型肝炎组;唐氏[4]的研究中，IL-4在慢性乙型肝炎组的浓度明显高于正常对照组。我们研究中发现，TNF-α在急、慢性乙型肝炎及IL-4在慢性乙型肝炎中的改变和李氏、唐氏研究均有相似，提示IFN-γ、TNF-α、IL-4在急、慢性乙型肝炎患者体内浓度改变支持机体感染肝炎病毒后，免疫处于激活状态，在一个较高的细胞因子水平上重新建立平衡，参与机体的抗病毒过程。Th1分泌的细胞因子TNF-α、IFN-γ其作用活跃有利于病毒清除，急性乙型肝炎发作时，机体清除病毒机会大，两种细胞因子此时的浓度应该高于慢性乙型肝炎组，但研究中TNF-α、IFN-γ在急、慢性乙型肝炎中未见显著差异，认为这可能因为慢性乙型肝炎可进行性发展为肝硬化，该阶段其肝内纤维化活动活跃，TNF-α、IFN-γ在肝脏纤维化的形成及抗纤维化中有重要作用导致其在慢性乙型肝炎中浓度升高，甚至不低于急性乙型肝炎。大量资料表明：IFN-γ具有抗纤维化作用，TNF–α、IL-4具有促进纤维化作用[5～13]。在我们研究中，慢性乙型肝炎、肝硬化组TNF–α、IFN-γ、IL-4浓度明显高于正常组，提示上述三种因子共同参与机体纤维化过程，乙肝病毒感染慢性化后，机体内纤维化活动活跃，产生大量参与纤维化形成的细胞因子，如TNF–α，IL-4;同时机体的抗纤维化活动亦活跃，产生大量抗纤维化细胞因子，如IFN-γ，来对抗机体的纤维化作用，两者在高水平上达到动态平衡，平衡的左右平移决定着纤维化的逆转和进展。IFN-γ在肝硬化组与慢性乙型肝炎组比较，升高水平显著，考虑肝硬化患者肝内纤维化形成过程更为活跃，刺激机体抗纤维化机能增强。临床上有大量关于细胞因子在重型肝炎中作用的研究，唐氏[3]认为IL-4在重型肝炎组的浓度明显高于慢性乙型肝炎组;郑氏[14]研究示重型肝炎患者血清TNF-α水平明显升高，IL-10水平明显降低;黄氏[15]研究中IFN-γ在重型肝炎中的浓度明显高于正常对照组。我们研究中，促炎因子IFN-γ、TNF-α和抗炎因子IL-4在重型肝炎中的浓度改变和上述国内研究相符，证实了重型肝炎中促炎因子和抗炎因子作用不平衡[16]。
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