BFGF及TGF-β1与260例乙肝患者肝脏纤维化及炎症关系研究

作者：康海燕，董江龙，叶立红，王建彬，刘莲，殷树英    作者单位：河北石家庄 石家庄市第五医院肝病科，050021；董江龙，河北石家庄 河北医科大学第三附属医院，050000

【关键词】  乙型肝炎 碱性成纤维细胞生长因子 转化生长因子β1 肝纤维化 免疫组化

Relationship between the expression of BFGF/TGF-β1 in liver tissue and liver fibrosis/inflammation in 260 patients with chronic hepatitisKANG Hai-yan, DONG Jiang-long. YE Li-hong, et al. Department of Hepatology, the Fifth Hospital of Shijiazhuang, Shijiazhuang, Hebei 050021, China

Abstract:　　Objective To observe the immunolocation and expression of basic fibroblast growth factor (BFGF) and transforming growth factor β1(TGF-β1) in different stage on liver fibrosis induced by CHB (chronic hepatitis B), and to discuss their effects in the development of liver fibrosis and the correlation with hepatitis and fibrosis markers.Methods BFGF and TGF-β1 in the liver of 260 patients with CHB were evaluated with immunohistochemistry and quantitive measurements. The relationship between BFGF/TGF-β1 and staging of hepatic fibrosis/grading of inflammation was analyzed.Results Expression of BFGF and TGF-β1 increased in line with the elevation of fibrotic staging. The levels of BFGF and TGF-β1 in groups of S1-S4 were higher than those in control group S0. The differences were statistically significant (P<0.05). And there were significant differences between every two groups (P<0.05). But in inflammation grading, the surface density in groups G1-G4 were all higher than that in control group G0 (P<0.05). But there were no significant differences between every two groups (P<0.05). There is close positive correlation between BFGF and TGF-β1 in hepatic tissue, the coefficient was 0.895 (P<0.05).Conclusion There is a close positive correlation between BFGF/TGF-β1 and hepatic fibrosis, and no correlation with liver inflammation. BFGF and TGF-β1 can be used as the important indicators of the severity of hepatic fibrosis, and furthermore, the understanding of them may provide theoretica basis of anti-fibrosis therapy by antagonists of BFGF and TGF-β1. Keywords:hepatitis B; basic fibroblast growth factor; transforming growth factor β1; hepatic fibrosis; immunohistochemistry

　　肝星状细胞(HSC)激活分泌大量细胞外基质(ECM)沉积在肝内引起肝纤维化[1]。碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)可促进ECM合成，导致肝纤维化[2]。本实验以260例慢性乙型肝炎患者肝组织BFGF、TGF-β1为研究对象，观察其表达和定位特点，进而比较二者与肝脏纤维化及炎症的关系，现将结果报道如下。

      1 资料与方法

　　1.1　研究对象　260例来自2005年7月至2007年9月我院住院的慢性乙型肝炎患者，男158例，女102例，年龄16岁～70岁(37.8岁)。按照2000年中华医学会西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》诊断标准[3]，其中慢性肝炎轻度60例，中度78例，重度66例，肝炎肝硬化56例。正常对照肝标本30例，于肝血管瘤或单纯胆囊切除术术中取材。

　　1.2　检测方法　所有患者行肝组织穿刺活检，所取肝组织标本长度均在1.0cm-1.5cm之间，肝组织标本依次进行HE染色、MASSON染色、网状纤维染色及BFGF、TGF-β1免疫组化染色，免疫组化步骤采用SP方法，阳性细胞浆着色为棕黄色，由我院病理科专人操作。

　　1.3　定量分析　用HPIAS 1000高清晰度彩色病理图文分析系统对肝脏BFGF、TGF-β1进行图象定量分析，每张切片随机选取10个视野，测定每一视野中BFGF的含量(面密度)，以其阳性表达区域占全视野面积的百分比表示，取其平均值。

　　1.4　统计学分析　全过程采用SPSS13.0版统计软件。计量资料的各项指标均采用均数±标准差(x±s)表示，同一指标的组间比较采用方差分析，两指标间的相关性采用直线相关分析。

　　2　结果

　　2.1　肝组织BFGF免疫组化染色观察结果及定量分析结果BFGF染色阳性物质呈棕黄色。S0期，BFGF基本不表达或仅表达于个别散在的肝细胞浆内;S1、S2期，BFGF表达部位主要在肝细胞和血管内皮细胞、炎症坏死区等;S3、S4期，BFGF阳性表达部位主要集中在血管纤维化间隔及肝窦壁、肝窦内皮细胞、肝细胞等，并随病变的发展染色逐渐加深，且范围逐渐扩大。肝组织BFGF的S0与S1-S4组的定量分析比较(见表1);G0与G1-G4组的定量分析比较(见表2)。

　　2.2　肝组织TGF-β1免疫组化染色观察结果及定量分析结果　TGF-β1染色阳性物质呈棕黄色。S0期未见明显阳性物质，S1、S2期阳性物质主要分布在肝窦壁、窦周细胞、坏死灶等;S3期、S4期在纤维间隔和肝细胞中均有分布，S4期肝细胞内可见大量染色阳性物质，且范围逐渐增大，染色程度逐渐加深。详见表1及表2。

　　2.3　肝组织BFGF的表达程度与TGF-β1的表达程度呈高度正相关，r=0.895(P<0.05)。

　　3　讨论

　　BFGF首先由Gonpodarowioz等于1984年从牛脑垂体中分离纯化而来，肝窦内皮细胞、血管内皮和肝细胞等是BFGF分泌的主要细胞。本实验BFGF结果表明，S0期，BFGF基本不表达;S1-S4期，BFGF表达部位主要以肝细胞、炎症坏死区、血管纤维化间隔区、肝窦壁等，这与严家春等人研究BFGF-mRNA在慢性乙肝肝组织中的表达相一致[4]。本研究结果提示，在肝病的早期阶段，由于肝组织发生微循环障碍而合成BFGF增加，刺激内皮细胞增生;肝纤维化中晚期，主要是促进细胞外基质(ECM)的产生[5]，在慢性乙型肝炎病程中，肝实质和肝间质细胞的坏死、凋亡及再生并存;在血管纤维化中可见血管内皮、平滑肌细胞及肝细胞核固缩现象，推测其可能与细胞凋亡有关[6]。TGF-β1是目前研究最多的细胞因子，肝纤维化早期主要由肝星状细胞、枯否细胞等合成产生，到肝纤维化晚期时，肝细胞亦成为合成TGF-β1的来源。本实验观察了肝纤维化不同时期TGF-β1在肝组织内的分布情况，结果显示，S0期未见明显染色阳性物质，S1、S2期染色阳性物质主要分布于肝血窦壁、炎症坏死灶、汇管区等，而肝实质细胞内未出现，与李兵顺等研究报道的TGF-β1在慢性肝炎患者肝组织中的表达相一致[7];S3、S4期TGF-β1在纤维间隔及肝细胞内均有分布，与张愚等人在大鼠动物模型中TGF-β1的免疫组化研究相一致[5]。HSC的激活是肝纤维化发生的中心环节，而TGF-β1是启动邻近静息态HSC激活和转化的初始信号之一[8]，其可使HSC活化、增殖，向肌成纤维细胞转化;同时促进ECM大量合成，抑制ECM的降解，从而推动肝纤维化不断进展。从肝组织炎症活动度分级来看，本研究结果显示：G1-G4级肝组织内BFGF及TGF-β1水平比G0显著增高(P<0.05)，但G1-G4的组间比较却无显著性差异(P>0.05)。这提示，肝组织炎症的存在是促使BFGF、TGF-β1表达的必要条件，而BFGF和TGF-β1表达水平的高低与肝组织炎症活动度之间却无必然联系。综上所述，BFGF、TGF-β1表达呈正相关关系(r=0.895)，二者共同促进纤维化进展，同时本实验还提供了针对二者进行抗纤维化治疗的理论依据。

【参考文献】  　　[1]李石.肝纤维化发生机制[J].中华消化杂志,1999,19(1)∶48-50.

　　[2]Bauer M, Schuppan D. TGF beta1 in liver fibrosis: time to change paradigms?[J].FEBS Lett, 2001, 502(1-2)∶1-3.

　　[3]中华医学会.病毒性肝炎防治方案[J].中华肝脏病杂志,2000,8(6)∶324-329.

　　[4]严家春,陈文笔,马勇,等.慢性乙型肝炎肝组织中碱性成纤维细胞生长因子及其mRNA的表达[J].中华传染病杂志,2004,22(5)∶314-317.

　　[5]张愚,屈文东,黄华,等.BFGF及TGF-β1在实验性肝硬化中的免疫组化研究[J].胃肠病学和肝病学杂志,2005,14(1)∶40-44.

　　[6]陈文笔,严家春,马勇,等.碱性成纤维细胞生长因子在乙型肝炎肝组织中的表达[J].临床与实验病理学杂志,2002,18(5)∶527-530.

　　[7]李兵顺,阎文昭,刘金星,等.纤维化肝组织转化生长因子β1表达与肝纤维化程度的关系[J].中华传染病杂志,2005,23(2)∶112-114.

　　[8]卢平,周力,张永宏.转化生长因子β1-Smads信号传导与肝纤维化的关系[J].临床肝胆病杂志,2006,22(1)∶69-71.