环氧化酶-2和nm23H1蛋白表达及其与胆管癌的相关性
发表时间：2010-03-01 浏览次数：537次
环氧化酶-2和nm23H1蛋白表达及其与胆管癌的相关性作者：谷化平 周翠玲 作者单位：中国人民解放军第251医院病理科，河北 张家口 075000 【摘要】 目的 探讨环氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）和nm23H1蛋白在胆管癌中的表达及临床意义。方法 应用免疫组化方法检测46例胆管癌和10例正常胆管组织中COX-2及nm23H1蛋白表达水平，并结合临床病理特征进行分析。结果 在胆管癌中COX-2及nm23H1蛋白阳性表达率分别为78.3%（32/46）和54.3%（25/46）。胆管癌中COX-2表达阳性率显著高于正常胆管组织(P<0.05)，而nm23H1表达阳性率显著低于正常胆管组织(P<0.05)。COX-2表达与胆管癌的TNM分期和转移相关（P<0.05），而与胆管癌分化程度无关（P>0.05）。nm23H1表达与胆管癌的TNM分期、分化程度和转移相关（P<0.05）。结论 检测COX-2和nm23H1基因蛋白表达可作为评估胆管癌生物学行为和预后的参考指标。 【关键词】 胆管肿瘤 环氧化酶-2 nm23H1 基因表达调控 免疫组织化学 Expression of COX-2 and nm23H1 protein and its correlation with cholangiocarcinomas GU Huaping*， ZHOU Cuiling. * Department of Pathology, the 251st Hospital of PLA， Zhangjiakou 075000 Abstract Objective To investigate the expression of cyclooxygenase-2 （COX-2） and nm23H1 protein in cholangiocarcinomas (ChC) and its clinical significance. Methods Immunohistochemical method was used to investigate the expression of COX-2 and nm23H1 protein in 46 cases of ChC and 10 cases of normal choledochus(NCC). The relationship between expression of COX-2， nm23H1 and the clinicopathological factors of ChC was analyzed. Results The positive rate of COX-2 and nm23H was 78.3% （32/46） and 54.3% （25/46） respectively in ChC. The positive rate of COX-2 in ChC was higher than that in NCC (P<0.05)， but the nm23H was lower than that in NCC （P<0.05）. The expression of the COX-2 was positively correlated with the TNM phase and metastasis in ChC (P<0.05)， but the expression of the COX-2 was no correlated with the differentiation degree in ChC(P>0.05). The expression of nm23H1 was positively correlated with the TNM phase， differentiation degree and metastasis in ChC(P<0.05). Conclusion Expression of tumor suppressor COX-2 and nm23H gene protein can be helpful in predicting the biological behavior and prognosis of ChC. Key words bile duct neoplasms； cyclooxygenase-2； nm23H1； gene expression regulation； immunohistochemistry 和LSAB试剂盒购自迈新生物技术公司（均为即用型）。 1.3 免疫组织化学染色 采用微波-链霉菌素-生物素(microwave-labelledstrept-avidin biotin，MW-LSAB)免疫组织化学法和微波-金属盐抗原修复技术。即切片常规脱蜡水化后，放入枸橼酸缓冲液(10 mmol/L，pH 6.0)内，用微波仪170 W辐射5 min，冷却后水洗。其他操作流程同常规LSAB法，所不同者为三步抗原孵育和正常血清封闭用微波仪130 W分别辐射5 min，保温2 min即可。实验用已知COX-2和nm23H1阳性大肠癌组织作阳性对照，用枸橼酸缓冲液代替一抗作为阴性对照。H2O2-DAB显色。 1.4 结果判断 COX-2和nm23H1在细胞质呈棕黄色染色者为阳性。根据染色强度及显色癌细胞比例将2种蛋白表达状况分为4级：未见棕黄色颗粒为阴性；阳性细胞数<25%为弱阳性“+”，25%～75%为阳性“++”，>75%为强阳性“+++”。“+”以上为阳性结果。 1.5 统计学方法 采用配对资料的χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1 COX-2和nm23H1在正常胆管和胆管癌组织中的表达 免疫组织化学染色显示，COX-2和nm23H1阳性产物定位于细胞质（见图1，2）。46例胆管癌中，COX-2和nm23H1阳性表达率分别为78.3%（36/46）和54.3%（25/46）。10例正常胆管组织均为COX-2阴性（0%，0/10），而均呈nm23H1阳性表达（100.0%，10/10）。χ2检验，COX-2在胆管癌中的表达阳性率显著高于正常胆管组织（χ2=8.50，P<0.05），而nm23H1阳性表达率显著低于胆管癌（χ2=4.08，P<0.05）。 2.2 COX-2和nm23H1表达与胆管癌临床病理指数的关系 COX-2表达与胆管癌患者性别、发病年龄和胆管癌分化程度无关，而与胆管癌TNM分期和转移状况相关（P<0.05）；nm23H1表达与胆管癌患者性别、发病年龄无关，而与胆管癌分化程度、TNM分期和转移状况均相关（P<0.05），见表1。 2.3 胆管癌中COX-2和nm23H1表达之间的相关性 在COX-2阳性表达的36例胆管癌中，nm23H1阳性表达为15例（41.7%）， 在COX-2阴性表达的10例胆管癌中，nm23H1阳性表达为10例（100%），两者差异有统计学意义（χ2=7.20，P<0.05）。3 讨论 近年来肿瘤分子生物学研究表明，恶性肿瘤的形成和转移的发生是一个多基因、多因子各自发挥或相互协同作用的结果。因此，寻找、研究和揭示肿瘤的相关抗原或标志物与肿瘤的关系，对肿瘤诊断、有效防治、预测预后及术后辅助治疗提供依据具有十分重要意义。环氧化酶（cyclooxygenase，COX）又称前列腺素内过氧化物酶，是前列腺素合成过程中一个重要的限速酶，它可将花生四烯酸代谢成各种前列腺素产物，从而参与机体的多种病理生理过程，如炎症、发热及出凝血机制等。COX是膜结合蛋白，存在于核膜和微粒体膜[1]，它有2种同工酶，即结构型COX-1和诱生型COX-2。COX-2基因长8.3 kb， 位于染色体1q25.2-q25.3，其编码604个氨基酸。COX-2是一种诱导性即刻反应基因，在正常生理状态下，绝大多数正常组织中检测不到COX-2表达，只有当细胞受到刺激才能迅速诱导表达COX-2。近年来研究表明，COX-2除在炎症反应中起重要作用外，尚与肿瘤密切相关，它可通过刺激肿瘤细胞增殖和生长、抑制细胞凋亡、促进肿瘤血管形成、增加细胞侵袭力、抑制机体免疫功能、促进癌前病变向肿瘤转化等肿瘤的形成[2]。近年来研究证实，包括大肠癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌和肺癌等肿瘤组织中COX-2表达均明显增高，并与肿瘤的转移明显相关[3-4]。本研究结果显示，COX-2在正常胆管组织无表达，在胆管癌组织中阳性表达率为78.3%，并随着胆管癌的TNM分期增高和器官转移其表达阳性率显著增高(P<0.05)。有关COX-2表达与胆管癌分化程度的关系研究，目前存在不同观点。Him等[5]报道，COX-2表达与胆管癌分化程度无关。Wu等[6]报道，COX-2表达与胆管癌分化程度有关。本研究结果显示，COX-2表达与胆管癌分化程度无关，表明COX-2可能在胆管癌的发生发展、临床进展和转移过程中起着重要作用，而对判断胆管癌的恶性程度方面意义不大。 nm23是一种肿瘤抑制相关基因，分为nm23H1和nm23H2两个亚型，其编码产物二磷酸核苷激酶(NDPK)与微管聚合、G蛋白介导的信号传递、细胞与周围组织附着力、完整的基底膜形成及转录调节有关。nm23表达降低与肿瘤的淋巴结转移、高复发率及低生存率等显著相关[7-9]。本研究结果显示，nm23H1表达阳性率在胆管癌中显著低于正常胆管组织(P<0.05)，并随着胆管癌的临床分期增高、分化程度降低和器官转移其表达阳性率显著降低(P<0.05)，提示nm23H1蛋白低表达在胆管上皮细胞的恶性转化和肿瘤侵袭转移的生物学行为过程中起到重要促进作用。【参考文献】[1] Sano H， Kawahito Y， Wilder RL， et al. 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