卡巴胆碱对烫伤休克大鼠脏器血流量的影响

　　作者：周洁平，刘欣茹，王海滨，于勇，邱方，吴静，牛梅梅，胡森 作者单位：解放军总医院第一附属医院烧伤研究所休克与多器官功能障碍实验室,北京 100037

　　【摘要】 目的 研究烫伤休克大鼠液体复苏时给予卡巴胆碱对脏器血流量的影响。方法 Wistar大鼠分为4组：假烫组，单烫组，烫伤+补液组，烫伤+补液+卡巴胆碱组。采用35%体表面积Ⅲ°烫伤模型(100℃，12秒)，应用激光多谱勒测定伤前及伤后4、8、12小时肝、肾、肠组织血流量的改变。结果 烫伤后各组脏器血流量均较假烫组显著降低(P< 0.01)，卡巴胆碱治疗组较烫伤补液组各脏器血流量均显著升高(P< 0.01)。结论 卡巴胆碱能改善休克早期脏器血流量，有助于烧伤休克及并发症的防治。

　　【关键词】 烧伤;休克;血流量;卡巴胆碱

　　Effect of carbachol on the changes of visceral blood flow in rats with scalded injury

　　ZHOU Jieping，LIU Xinru，WANG Haibin，et al.

　　(Laboratory of Shock and Multiple Organ Dysfunction,Burns Institute，First Affiliated Hospital of General Hospital of PLA，Beijing 100037，China)

　　Abstract： Objective To investigate the effects of carbachol on the changes of visceral blood flow in rats with scalded injury. Methods Wistar rats were randomly divided into four groups: sham scalded,scalded and scalded with resuscitation,scalded with resuscitation plus carbachol group.Rats were scalded with water of 100℃ for 12 Sec to produce burn model of 35% total body surface area (TBSA) Ⅲdegree,the laser doppler technique was used to determine the blood flow in liver,kidney and intestinal mucosal before scald and at 4,8,12h after scald.Results Visceral blood flow decreased sharply after scalded injury(P<0.01),carbachol treatment resulted in significant recovery of blood flow in animals in carbachol group as compared with those in the other scalded groups.Conclusion Carbachol can improve visceral blood flow in rats with scalded injury,and it might be beneficial to the early treatment of burn shock.

　　Key words:burn;shock;blood flow;carbachol

　　严重烧伤休克早期因体液大量渗出,有效循环量锐减,内脏血流量下降,导致组织和细胞严重缺氧及脏器功能损害。即使在给予有效的液体复苏之后,血流量仍不能及时恢复,常继发内脏功能障碍等并发症。卡巴胆碱是一种胆碱能激动剂,能同时兴奋M受体和N受体，不被胆碱酯酶水解。本实验室以往研究结果显示卡巴胆碱肠内给药能显著增加肠缺血动物肠黏膜血流量[1]，但能否改善烧伤休克脏器的血流量未见报道。本研究目的在于观察卡巴胆碱对烫伤大鼠脏器血流量的影响,为临床应用卡巴胆碱治疗严重创(烧) 伤休克提供实验依据。

　　材料与方法

　　1 实验分组

　　雄性成年Wistar大鼠60只随机分为4组(每组4、8、12小时3个时间点，每时间点6只)：单烫组，即单纯烫伤不予其他处理;烫伤+补液组，即烫伤后立即经颈静脉补液;烫伤+补液+卡巴胆碱治疗组，与烫伤补液组同样补液并给予卡巴胆碱治疗;假烫组(6只)，不进行烫伤，其他操作同单烫组。

　　2 模型制备

　　适应性喂养1周，实验前禁食16～18小时，不禁水。3%戊巴比妥钠(20mg/kg)肌肉注射麻醉后，背部备皮，固定动物，暴露右侧颈静脉用充满0.5%肝素的无菌硅胶管向心插入，建立静脉通路，肝素帽封管。将大鼠背部置于100°C沸水中12秒，制备35%全身休表面积(TBSA)Ⅲ°烫伤模型。伤后烫伤补液组、卡巴胆碱治疗组立即经颈静脉输入复方氯化钠注射液，24小时总量按每1%TBSA补液2ml/kg计算，前8小时给予1/2量，剩余1/2量在后16小时输液泵匀速泵入。卡巴胆碱(100μg/kg，sigma公司提供)分别于烫伤后30分钟，6小时经胃管给药。伤后4、8、12小时检测血流量。各组动物间歇期均被固定，适时补充麻醉药品，保持麻醉状态。

　　3 脏器血流量测定

　　肝、肾、肠组织血流量测定:采用PeriFlux5001微循环激光多普勒血流仪(瑞典Perimed公司生产)，以u表示血流相对值，检测前以3%戊巴比妥钠肌注补充麻醉，腹部剃毛备皮，75%乙醇消毒，剑凸下沿腹中线作一长约3cm切口，打开腹壁，分别以P402探头轻触肝左叶及左肾上极,距盲肠约10㎝回肠处插入P406探针，待读数稳定后记取读数。

　　4 统计方法

　　数据以±s表示,组间比较采用方差分析。

　　结果

　　烫伤后各组各时间点肠、肝、肾血流量均较假烫组显著降低(P<0.01)，给予补液的烫伤对照组较单纯烫伤组有所升高，但显著低于卡巴胆碱治疗组(P< 0.01), 结果详见图1～3。

　　图1 卡巴胆碱对烫伤休克大鼠肝血流量的影响(治疗组与烫组补液组相比：*P<0.01)(略)

　　图2 卡巴胆碱对烫伤休克大鼠肾血流量的影响(治疗组与烫组补液组相比：*P<0.01)(略)

　　图3 卡巴胆碱对烫伤休克大鼠肠血流量的影响(治疗组与烫伤补液组相比：*P<0.01)(略)

　　讨论

　　在严重烧伤强烈应激状态下,机体大量分泌儿茶酚胺等应激激素,同时产生大量炎症介质,使内脏血管收缩,这是导致内脏血液灌注不足和血液重新分布的重要原因。以往研究显示,大鼠烧伤后尽管进行液体复苏能使血压维持在伤前水平但内脏血流量仍明显降低[2]。本实验结果也表明烫伤后脏器血流量明显下降,给予补液虽然能使血流量有所升高,但脏器血流量仍然处于低水平,这与休克后虽进行液体复苏却仍出现脏器功能障碍等并发症密切相关。本实验结果显示给予卡巴胆碱能显著增加大鼠烧伤后多脏器的血流量。

　　卡巴胆碱为胆碱能受体激动剂，能兴奋M、N受体，兴奋M受体能扩张血管，这一现象继 Furchgott发现乙酰胆碱(Ach)可致内皮完整家兔离体胸主动脉舒张后 ,已被证实广泛存在于哺乳动物的大动脉和微动脉系统。这种存在于血管内皮细胞上可被 ACh激活的靶点有研究认为是M3受体[3][或一种有别于经典 M受体的内皮细胞Ach作用靶标(endothelial target for acetylcholine,ETA)][4]。内皮细胞上的ACh靶点激活后可释放 EDRF、PGI2、EDHF等,上述分子可分别作用于血管平滑肌介导舒张反应。这可能是卡巴胆碱能增加脏器血流量的重要机制。

　　近年来胆碱能抗炎通路的发现[5],为卡巴胆碱的研究提供了广阔的空间。以往研究证实卡巴胆碱肠内灌注不仅能显著增加肠缺血动物肠黏膜血流量、促进胃肠吸收，而且能显著减轻30%TBSA Ⅲ°烫伤大鼠局部及全身炎症反应，抑制TNFα和IL6等促炎细胞因子的释放[6]。最近国外学者证明，胆碱能N受体激动剂烟碱能显著抑制血管内皮细胞黏附因子的表达，抑制TNF诱导的内皮细胞的活化。而抑制炎症因子及血管内皮细胞的活化，对于增加脏器血流量改善微循环均具有重要意义。

　　综上所述，卡巴胆碱能增加烫伤休克大鼠的脏器血流量，为其用于烧伤休克的临床治疗提供了实验基础，但其增加脏器血流量的确切机制仍需要进一步研究。

　　【参考文献】

　　[1]胡森,曹卫红,孙丹,等.卡巴胆碱对肠部分-缺血再灌注损伤所致全身炎症和多器官功能障碍的影响[J].中国危重病急救医学,2005,17(1):49-62.

　　[2]Fiddian Green RG,Hugland U,Gutierrez G,et al.Goals for the resuscitation of shock[J].Crit Care Med,1993,21(2):S25-37.

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　　[5]Borovikova LV,Ivanova S,Zhang M.et al.Vagus nerve stimulation attenuates the systemic inflammatory response to endotoxin[J].Nature,2000,405(25):458-462.

　　[6]姜小国,胡森,石德光,等.卡巴胆碱对肠缺血再灌注大鼠血浆肿瘤坏死因子α和白介素10含量的影响[J].中国危重病急救医学,2003,15(3):167-169.