Livin和HIF-1α在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

膀耽尿路上皮癌的发生、发展是一个多步骤、多因素长期作用的结果，除了原癌基因的激活，抑癌基因的失活外，某些凋亡调控基因及关键性转录调控因子的异常表达也是促进其发展的因素。 Livin是2000年发现的凋亡抑制蛋白家族(工APs ) 新成员，已有研究表明其在细胞凋亡和多数实质性肿瘤的发生过程中具有重要的影响作用。而凋亡抑制是肿瘤发生的重要机制，Livin作为凋亡抑制蛋白家族中的新成员，可能在膀肌尿路上皮癌的发生和发展中起着重要的作用. HIF-1α是介导细胞对缺氧微环境进行适应性反应的关键性转录调控因子，在低氧负荷下能够诱发多种相关基因的表 达，对维持肿瘤细胞的能量代谢、细胞增殖和肿瘤血管发生具有重要的作用，并且与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。本次研究初步探讨了Livin 和HIF-1α。在膀胧尿路上皮癌组织中的表达情况以及临床意义。

1资料与方法

1. 1临床资料 收集我院2006年2月一2008年10月存档膀胧尿路上皮癌标本45例，男39例，女6例;年龄38 - 9 0岁，中位年龄61岁。病理分级按2004年 WHO标准。临床分期按照UICC-TNM标准(表 1)。所有标本均经再次病理检查证实。另取15例正常膀胧豁膜作为正常对照组。

1.2检测方法和材料采用免疫组织化学SABC法。抗体，免疫组化 试剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司提供。 DAB显色，苏木素复染，氨水透明。已知结肠癌阳性切片做阳性对照，PBS代替一抗做阴性对照。

1.3结果判断 Livin蛋白主要定位于细胞质中，很少出现在细胞核中，阳性染色为粗细均一的棕黄色颗粒。 HIF-1α主要在组织上皮细胞和肿瘤细胞核及胞浆内呈局限性或弥散性表达，后者表达方式更常见于肿瘤细胞中。Livin和HIF-1α阳性结果判断采用免疫组化染色强度和细胞百分比评分的方法[2]。同时用HP工AS-100。高清晰度彩色病理图文等级采集高倍镜视野图像进行图像分析，获取的平均光密度值作为评价试验结果的量化指标。

1.4统计学处理 SPSS 13. 0软件包处理数据。采用t检验， Spearman相关分析分析资料相关性。P G0. 05表示差异有统计学意义。

2结果

2. 1 Livin蛋白和HIF-la 蛋白的表达 膀胧尿路上皮癌组织中的Livin表达明显高于正常膀恍组织。初发和复发病例存在差异。病理分级(1、11、111之间)存在差异。但是Livin表达与发病年龄和肿瘤分期没有显著差异。HIF-la 在对照组3例阳性，在膀恍尿路上皮癌中39例阳性。正常组织与肿瘤组织中HIF-la 表达存在统计学差异。HIF-la 表达与年龄、肿瘤分期、病理分级以及是否复发均无统计学差异(表1).

2. 2 Livin和HIF-la在膀肌尿路上皮癌组织中的相关性 相关性分析显示膀肌尿路上皮癌中Livin和 HIF-la蛋白表达不存在正相关性(P = 0. 361) (表2)。

2. 3平均光密度与病理分级之间的联系 采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文分析系统可以得到两种蛋白在不同病理分级中的平均光密度值。Livin和H工F-1 a蛋白表达在不同病理分级中平均光密度值差异均有统计学意义(P <0. 05)。

3讨论

肿瘤的发生、发展与细胞凋亡的紊乱密切相关。凋亡受抑制将导致细胞存活时间延长，利于发生突变的细胞生长积累，最终导致肿瘤的产生。凋亡抑制蛋白((IAP)是目前发现的唯一一种可以和半肌氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶直接结合发挥凋亡抑制作用的蛋白家族。它的过度表达引起的凋亡不足与肿瘤的发生密切相关[3J。而Lm m则是由Ashhab等发现的一种新的细胞凋亡抑制蛋白，它含有IAP家族成员特有的BIR和RING指结构域。Livin主要通过阻断凋亡受体及以线粒体为基础的外源性和内源性凋亡途径发挥抑制细胞凋亡的作用[5]。 国内外的研究证实了Livin的表达在各种实质性肿瘤中的重要临床意义。实验观察到在肿瘤组织中Livin表达明显高于正常组织。说明Livin在膀眺尿路上皮癌的发生、发展中确实发挥着某种作 用。并且复发病例中Livir，的阳性率明显升高，这进一步证明了Livin在膀胧尿路上皮癌中的作用。也为我们对部分患者术后辅助治疗以及及时、早期诊断提供了依据。Gazaniga等30例浅表膀肤癌患者的研究发现，Livin可能与癌的进展有关，并且可以作为预测复发的标志物这与我们的实验结果相一致。但是人组对象较少，并且缺乏相应的临床随访.对于Livin和膀耽尿路仁皮癌复发之间的关系还无法完全证实但是对于来院就诊的初发与复发患者的对比研究中，复发患者的Livin 表达要高于初发患者，有统计学意义。说明Livin 的表达确实可能与膀肤尿路上皮癌的复发有关。另一方面L.ivin的致肿瘤作用也是双重的.有研究表明Livin虽然在致肿瘤中起着主要的作用，但是其在NK细胞的作用下会分裂产生截短的促凋亡蛋白质.从而抑制肿瘤生长在膀肤尿路上皮癌中是否也存在这样的作用还需要我们继续研究。若确实如此，那么，除了Livin外，截短的Livin也可以作为癌症治疗的潜在靶点芍、 氧在新陈代谢中起着重要的作用，需氧器官要获得氧以生产能量而肿瘤的快速生长对氧的依赖性更为显著但大量证据表明实体肿瘤大多遭受低氧负荷因此，在实体肿瘤中常表现出HIF 的高水平积聚弓。此外，氧剥夺似乎也与氧自由基的积聚有联系，他们能够对细胞内的蛋白质和 I) A产生额外的压力.促进正常细胞向肿瘤细胞转化在哺乳动物中有三种HIF-1α亚基HIF-1α即 H IF-1 a . H IF-2。和HiF-3a HIF-1α在细胞中任何部位都有表达毕。HIF-1α在肿瘤的发展过程中有着不同的影响，因为他们都具有环境依赖型的功能和不同的作用方式在哺乳动物.相对缺氧负荷的主要转录反应就是通过缺氧诱导因子来完成调节的。这些都表明HIF-1α在肿瘤的发展中发挥着重要的作用 研究发现，HIF-1α在癌组织中的表达明显高于正常组织，这说明HIF-1α在膀胧尿路上皮癌中确实存在表达升高但是在肿瘤分级、分期和年龄以及初发和复发之间却并没有发现差异。这与Io- achim等的研究报道相类似。而Ord等在对高级别膀胧尿路上皮癌的研究中也观察到HIF-la 与分级，分期和淋巴结没有关联。另一方面，也有研究表明，HIF-1a和血管发生标记物在预后和预测膀既癌中起着重要的作用.这可能是由于我们现存的资料不足，单个研究单位的病例存在选择性偏倚.而且人组病例数量相对较少等因素导致无法真实反映HIF-1。在膀肤尿路上皮癌中的情况。大量临床研究则是解决这个问题的最佳方法。

本次研究Livin和HIF-1α在木院既往膀胧尿路上皮癌患者中的表达变化虽然研究结果显示 膀耽尿路上皮癌组织中Livin和HIF-1α表达水平均明显高于正常组织，但是Livin和HIF-1α之间却不存在相关性。他们在肿瘤的发生、发展过程中是共同起着抑制凋亡，促肿瘤的作用，还是相互之间存在一定的竞争拮抗作用?这还有待进一步_的深人研究。在复发病例中，Livin蛋白的表达明显升高，高于初发患者。说明Livin是检测膀眺尿路上皮癌预后的潜在指标。而HIF-1α在复发患者中的表达与初发病例相比，虽然阳性率增高，但是却无显著差异。但是这并不能否定HIF-1α在膀胧尿路上皮癌的复发过程中也起着积极作用。也许其可作为肿瘤复发诊断的辅助指标。

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