8例膀胱癌患者尿液CEA、CA199、CD44联合检测与分析

膀胱癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤，早期症状隐匿，患者就诊时多处于中晚期[1]。在男性肿瘤中，膀胱癌发病率居第4位，病死率排第9 位[2]。目前膀胱尿道镜/TuR 为侵入性操作，费用高且患者要承受痛苦，同时对膀胱顶部及膀胱前壁的肿瘤不易发现，尿道狭窄患者无法行膀胱镜检查，甚至还可能承担感染、出血等风险[3]。因此，寻找用于膀胱癌早期诊断及规范随访有助于膀胱癌患者临床治疗判断指标非常重要。尿液作为无创标本，可提供蛋白质、RNA 及DNA 来源，是寻找膀胱癌理想的肿瘤标记物来源。CEA、CA199 是临床中应用较多的肿瘤标志物，CEA 在膀胱癌特异度比较高[4]。最新研究认为CD44在尿路移行细胞癌中的表达可以预测其预后作用[5]，但是CD44 用于膀胱癌的诊断的相关研究较少[67]。笔者通过对近3年来膀胱癌患者的尿液进行检测，评价CEA 单独检测和联合检测对于膀胱癌的诊断价值。

1　资料与方法

1.1　一般资料　选取2010年1 月至2012 年12 月本院收治的膀胱癌患者(经膀胱镜活检或术后病理确诊为膀胱移癌)，其中男55例，女43例，平均年龄41.7 岁;其他肿瘤患者39 例，其中男20例，女19例，平均年龄47.09岁(包括卵巢癌12例，肺肿瘤12例，乳腺癌8例，妇科肿瘤6例);对照组78例，平均年龄38.8岁，其中男59例，女19例，均为本院体检中心确诊的健康者。

1.2　仪器和试剂　测量仪器为FMJ182B 型微电脑放射免疫Y计数仪，Architecti2000全自动化学发光免疫分析仪和专用配套试剂(美国雅培公司)，CEA 和CA199的放射免疫分析试剂盒，鼠抗人CD44特异性抗体试剂(上海华壹生物科技有限公司)，台式水平离心机(LD52A，北京医用离心机厂)。

1.3　方法　全部患者用洁净一次性尿杯留取中段尿10 mL，离心20min，3500r/min，收集上清液4 mL，用放射免疫分析方法对尿液的CEA、CA199 浓度进行定量分析测定，且检测过程严格按仪器操作规程进行。用于CD44检测的病理标本：取膀胱癌患者和膀胱正常年末组织切片，均经4% 甲醛固定，石蜡包埋组织连续切片(厚度为4μm)，脱蜡、水化后用0.1mol/L 的PBS溶液洗涤2～3次，将3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA 上，室温静置10 min;苏木精复染2 min，盐酸酒精分化;每个标本分别做常规HE、免疫组织化学染色;用免疫组织化学SP法标记CD44，严格按照说明书中的操作步骤进行，并在光学显微镜下观察结果。

1.4　结果判断　以细胞膜或细胞质内出现棕黄色染色为阳性细胞，细胞记数判定标准参照Tomomishida的记数标准[8]，在400倍光镜下随机观察10 个视野，若阳性细胞数小于或等于25%则为阴性表达，若大于25%则为阳性表达。

1.5　统计学处理　将尿液的CEA、CA19-9 的浓度测定结果和CD44染色结果建立数据库，采用SPSS19.0 统计软件包和Mantelhaenszlχ 2 检验和Kruskalwallis秩和检验进行比较、分析，p<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1　膀胱癌患者和健康人3项指标检测结果　对照组人群的尿液仅能测出微量的CEA，测得的浓度为(2.51±2.16)ng/mL;CA19-9水平为(29.9±2.379)U/mL，与其他肿瘤患者比较，差异无统计学意义(犘>0.05)。膀胱癌组患者尿液CEA和CA19-9 水平分别为(128.78±69.02)ng/mL、(97.66± 29.51)U/mL，均高于对照组，差异均有统计学意义(p<0.05);对照组人群CD44 的阳性表达率为(48.62±9.73)%，膀胱癌组患者CD44 的阳性表达率(67.7±26.26)%，两组进行比较差异有统计学意义(p<0.05)。见表1。

表1　　PHC患者和健康人CEA、CA19-9、CD44检测结果

对照组78 2.51±2.16 29.90±2.379 48.62±9.73

膀胱癌组98 128.70±69.02 97.66±29.51 67.70±26.26　　

 ：p<0.05，与对照组比较。

2.2　膀胱癌组患者CEA 单检与联检阳性率的比较　CEA 单独检测与CEA、CA19-9二联检，CEA、CD44二联检以及CEA、CA19-9、CD44三联检比较，差异均有统计学意义(p<0.05)， 见表2。

表2　　三项指标单检与联检对膀胱癌患者阳性率的比较

CEA 单检108 78.83

CA19-9单检86 62.78

CD44单检56 40.87

CEA、CA19-9二联检112 81.75

CEA、CD44二联检103 75.18

CEA、CA19-9、CD44三联检118 86.13　　 

：p<0.05，与CEA 单检比较。

2.3　尿液CEA、CA19-9、CD44 检测用于膀胱癌诊断的灵敏度、特异性及准确度　见表3。

表2　不同检测项目用于膀胱癌诊断的灵敏度、特异性及准确度

检测项目 灵敏度 特异度

CEA 单检78.83(108/137) 28.47(39/137)

CA19-9单检62.77(86/137) 26.28(26/137)

CD44单检40.87(56/137) 8.76(12/137)

CEA、CA19-9二联检81.75(112/137) 10.95(15/137)

CEA、CD44二联检75.18(103/137) 8.76(12/137)

CEA、CA199、CD44三联检86.13(118/137) 9.48(13/137)

3　讨　　论

膀胱癌患者尿液CEA、CA199、CD44 三者联合检测可以提高膀胱癌的检出率，健康者和其他肿瘤患者尿液中仅能测出微量的CEA，二者比较差异无统计学意义(犘>0.05)。膀胱癌患者尿液中CEA 和CA199 浓度明显升高，表明CEA 和CA199作为一种肿瘤标记物用于诊断膀胱细胞癌(TCC)具有可行;免疫组织化学SP 法检测98 例膀胱癌患者膀胱癌组织中CD44的表达情况，结果显示膀胱癌组患者CD44 的表达水平较对照组高，差异有统计学意义(犘<0.05)。CD44 参与肿瘤细胞的成活、生长、分化、增殖和迁移等过程，CD44表达阳性的细胞增殖、迁移能力高于CD44 表达阴性的细胞[9]，研究表明CD44 的变异体CD44V6 在膀胱癌组织中的有高表达情况[10]，CD44的检测有助于对膀胱癌患者的预后作出估计，阳性表达也是膀胱癌预后不良的重要指标之一。膀胱癌患者尿液的CEA、CA199 可以进行廉价、自动的定量分析，这些标记物有助于膀胱癌患者的管理和减少膀胱镜检查的频率，有助于早期发现膀胱癌[1115]。但这些肿瘤标记物均不能代替膀胱镜检查，如何减少膀胱镜检查的频率还需要进一步的研究探讨。膀胱癌患者尿液CEA、CA199、CD44 联合检测对提高早期诊断和及早进行疾病治疗，延长患者的寿命有重要价值[1620]。

参考文献

[1] JemalA，CleggLX，WardE，etal.Annualreporttothenationonthestatusofcancer，19752001，withaspecialfeatureregardingsurvival[J].Cancer，2004，101(1)：327.

[2] PfisterC，ChautardD，DevonecM，etal.Immunocyttestimprovesthediagnosticaccuracyofurinarycytology：resultsofaFrenchmulticenterstudy[J].JUrol，2003，169(3)：921924.

[3] 于浩.尿液中膀胱癌肿瘤标记物的研究进展[J].岭南现代临床外科，2012，12(2)：159160.

[4] 张锁英，李长生，黄龙学，等.尿CEA 检测对膀胱癌诊断的临床意义[J].实用癌症杂志，1993(3)：132133.

[5] ElAssalON，YamanoiA，Ono T，etal.Theclinicopathologicalsignificanceofheparanaseandbasicfibroblastgrowthfactorexpressionsinhepatocellularcarcinoma[J].ClinCancerRes，2001，7(5)：12991305.

[6] 孙旭东，王含章.膀胱肿瘤标志物检测方法的研究进展[J].现代泌尿外科杂志，2012，17(3)：319321.

[7] StavropoulosNE，FilliadisI，Ioachim E，etal.CD44standardformexpressionasapredictorofprogressioninhighrisksuperficialbladdertumors[J].IntUrolNephrol，2001，33(3)：479483.

[8]IshidaT.ImmunohistochemicalexpressionoftheCD44variant6incolorectaladenocarcinoma[J].SurgToday，2000，30(1)：2832.

[9] 廖治，肖洪涛，瞿大成，等.CD44分子与子宫内膜癌关系的研究进展[J].西部医学，2009，21(6)：10271028.

[10]LiCZ，LiuB，WenZQ，etal.InhibitionofCD44expressionbysmallinterferingRNAtosuppressthegrowthandmetastasisofovarianCancercellsinvitroandinvivo[J].FoliaBiol(Krakow)，2008，54(6)：180186.

[11]萨伊德，杨为民.CA199在膀胱癌中的表达及临床意义[J].临床泌尿外科杂志，2008，23(5)：341342，344.

[12] WashinoS，Hirai M，MatsuzakiA，etal.ClinicalusefulnessofCEA，CA199，andCYFRA211astumormarkersforurothelialbladdercarcinoma[J].UrolInt，2011，87(4)：420428.

[13]HegeleA，Mecklenburg V，VargaZ，etal.CA199andCEAintransitionalcellcarcinomaofthebladder：serologicalandimmunohistochemicalfindings[J].AnticancerRes，2010，30(12)：51955200.

[14]徐卓群，徐汇义.尿癌胚抗原检测对膀胱癌的诊断价值[J].标记免疫分析与临床，1995，2(1)：4849.

[15]单立平，张墨，李波，等.CD44和CD8+T 细胞在膀胱癌的表达及其临床病理意义[J].现代肿瘤医学，2013，21(1)：112115.

[16]赵阳，曹浩明.膀胱癌患者外周血淋巴细胞表型及CD44检测[J].中国肿瘤，2002，11(8)：481482.

[17]WoodmanAC，SugiyamaM，YoshidaK，etal.AnalysisofanomalousCD44geneexpressioninhumanbreast，bladder，andcoloncancerandcorrelationofobserved mRNA andproteinisoforms[J].AmJPathol，1996，149(5)：15191530.

[18]RossJS，delRosarioAD，BuiHX，etal.ExpressionoftheCD44celladhesionmoleculeinurinarybladdertransitionalcellcarcinoma[J].ModPathol，1996，9(8)：854860.

[19]PallM，IqbalJ，SinghSK，etal.CA199asaserum markerinurothelialcarcinoma[J].UrolAnn，2012，4(2)：98101.

[20]PalK，RoyS，MondalSA，etal.UrinarylevelofCA199asatumormarkerinurothelialcarcinomaofthebladder[J].UrolJ，2011，8(3)：203208.(收稿日期：20131116)