UF-100参数在尿路感染诊断及疗效监测中的应用研究

　　作者：马文明　郭旭霞　韩素丽　杜园园 作者单位：046000　山西省，长治医学院附属和平医院检验科

　　【关键词】 UF-100参数 尿路感染诊断 疗效监测

　　尿路感染是一种较为常见的由细菌或真菌侵入尿道引起的泌尿系统疾病，尤其在已婚女性及老年人群中发病率较高。尿路感染的实验室诊断主要依靠尿定量细菌培养，但花费时间比较长，不利于感染的早诊断、早治疗，且花费人力、物力较高，有其局限性。

　　UF-100尿沉渣分析仪利用流式细胞原理，两种荧光染料染色，尿液沉渣成分不需离心自动检测，每小时可测100个标本，操作简易，对红细胞、白细胞、上皮细胞、管型及细菌提供定量报告结果及散点图[1]，并可提供不同的直方图(此参数不作为本次研究内容，故不引入)。为了了解UF-100对尿路感染的筛查及疗效监测的价值，本文对86例急性尿路感染患者在治疗过程中不同阶段的尿液进行了定期检测，现报道如下。

　　一、资料与方法

　　1. 一般资料：从2009年2月开始，选取临床以尿频、尿急、尿痛为主诉到我院就诊的患者，按标准方法留取清洁中段尿液标本两份即时(<1 h)送检，将此尿液标本分别做尿液常规检查和细菌培养，3 d后根据培养结果确定研究对象。凡革兰阳性菌菌落数≥104 cfu/ml和革兰阴性菌菌落数≥105 cfu/ml，诊断为急性尿路感染[2-3]的患者作为研究对象。至2009年12月共收集病例86例，其中男28例，女58例;年龄22～68岁，中位年龄41岁。另取30例健康体检者为健康对照组，男11例，女19例，年龄18～72岁，中位年龄38岁。

　　2. 仪器和试剂：日本SYSMEX公司 UF-100全自动尿沉渣分析仪及配套试剂;长春迪瑞公司H-800尿干化学分析仪及配套十二联试纸条;法国梅里埃公司VITEK2-compact30细菌鉴定仪及配套试剂;日本OLYMPUS生物显微镜;河北白洋160C医用低速离心机等。

　　3. 尿液标本采集：嘱所有疑似患者按标准方法留取清洁中段尿液各约10 ml于2个无菌瓶中即时(<1 h)送检。收到尿液标本后，取1份进行尿液细菌培养，另1份进行尿液常规检验(包括干化学分析、UF-100尿沉渣分析及尿沉渣显微镜检验)，确定为研究对象者如上法每3 d留取清洁中段尿液2份进行尿液细菌培养和尿液常规检验。

　　4. 尿液干化学分析仪、UF-100尿沉渣分析仪操作：按各仪器操作规程操作。

　　5. 尿沉渣镜检：(1)涂片制备：取新鲜尿10 ml于一刻度离心管置半径15 cm水平式离心机，以1500 r/min(相对离心力=400 g)离心5 min后，弃去上清液，剩余约0.2 ml，混匀，用吸管吸20 μl上述浓缩后的悬液，滴于载玻片，用18 mm×18 mm盖玻片覆盖后镜检[4]。(2)镜检方法：先用低倍镜观察全片和计数管型数，再用高倍镜观察至少十个高倍视野的细胞，细胞以平均每高倍视野细胞数表示[4]。(3)尿液细菌培养和菌落计数：对每位疑似尿路感染患者严格按操作规程收集清洁中段尿标本，行尿液细菌培养、菌落计数和药物敏感试验。(4)所有患者在药物敏感试验结果指导下进行治疗，治疗药物主要为青霉素、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、阿米卡星等，一般每位患者在治疗期间每3 d进行尿液常规检测，特殊情况可随机检测，多数在治疗后11 d症状消失、尿检时白细胞消失，故本研究未再计入。

　　6. 质量控制：尿液干化学分析、UF-100尿沉渣分析、尿液细菌培养每日进行规范的室内质量控制，并参加卫生部临床检验中心室间质量评价成绩合格。

　　7. 统计学分析：采用SPSS 14.0统计软件包进行统计学分析，采用方差分析及两两比较的q检验(Newman-Keuls法)进行分析。表1　尿沉渣镜检、尿干化学、UF-100及尿液细菌培养结果

　　二、结果

　　1. 急性尿路感染患者的尿液各项检验结果：见表1。其中对UF-100尿沉渣有形成分定量检验结果采用方差分析，红细胞计数F值为203.76，白细胞计数F值为756.8656，P<0.01。说明各组总体均数不相等，然后采用两两比较的q检验(Newman-Keuls法)进行分析显示：尿液红细胞检验除治疗后第6、9天之间及第6、9天结果与对照组结果无统计学差异外(q=1.7488、2.0946、0.8369，P>0.05)，其余各组间均有统计学差异(q值5.5456～34.4176，均大于q界值，P<0.05);尿液白细胞检验除治疗后第9天与对照组结果无统计学差异外(q=0.8421，P>0.05)，其余各组间均有统计学差异(q值3.8184～31.3467，均大于q界值，P<0.05)。

　　2. 白细胞在急性尿路感染初诊时和治疗过程中的第3、6、9天UF-100尿沉渣分析前向散射光(FSC)/荧光(FL)典型散点图举例：图1a、1b、1c、1d为其中一例急性尿路感染者治疗前及治疗后第3、6、9天尿液检验UF-100尿沉渣分析白细胞在FSC/FL散点图显示结果举例。图2a、2b、2c、2d为其中另一例急性尿路感染者治疗前及治疗后第3、6、9天尿液检验UF-100尿沉渣分析白细胞在FSC/FL散点图显示结果举例。图3为对照组随机一例尿液采用UF-100尿沉渣分析白细胞在FSC/FL结果。由图1和图2可见，急性尿路感染白细胞FSC/FL散点图共同特点为：感染早期均在左上方密集成团分布，说明大量的白细胞具较高FSC，较低FL，提示白细胞为活细胞[1,5]。在治疗后不同时间，白细胞FSC/FL散点密度下降，并逐渐下移至右下方，说明白细胞数量减少，白细胞具较低FSC，较高FL，提示为损伤或死亡白细胞，治疗有效。

　　三、讨论

　　尿路感染的诊断常不能依靠临床症状和体征，而是依靠实验室检查特别是细菌学检查。凡是有真性菌尿者(清洁中段尿细菌培养：革兰阳性菌菌落数≥104 cfu/ml，或革兰阴性菌菌落数≥105 cfu/ml)，均可诊断为尿路感染[2]。而实际工作中，由于尿液细菌培养需要时间长，不便于临床早期诊断和治疗，尿常规检验或尿沉渣镜检是否有较多白细胞就成为临床诊断尿路感染的最主要依据。但由于以往尿常规检验方法难以标准化，结果误差很大。近年来虽然尿常规化学成分的自动化检验受到了临床认可和普及，但对有形成分的检验还主要是显微镜人工镜检，由于受操作人员的技术水平和责任心等的影响，同时，目前的临床检验科通常需要较快处理日益增多的检验样本，造成实际工作中很难做到标准化操作，所得到的结果经统计学处理差异很大，因此影响临床的诊断与治疗[6]。

　　干化学尿液分析仪可检测白细胞、亚硝酸盐来确定泌尿系统是否有细菌感染。但亚硝酸盐检测受感染细菌是否含有硝酸盐还原酶(主要是大肠埃希菌)，食物中是否有适量的硝酸盐和尿液标本是否在膀胱内停留4 h以上等因素的影响。因此本试验阴性并不能排除细菌感染的可能。UF-100能较好地解决上述缺陷，能够检出所有的细菌[5]。如本组病例部分患者亚硝酸盐为阴性，而UF-100细菌数在发病初期量很多，随着治疗好转，细菌量也逐渐下降。由此可见，UF-100可进行白细胞及细菌的定量连续观察，弥补了尿干化学检验之不足，二者联用再结合尿沉渣镜检可使报道更趋完整，为临床提供更多、更确切信息。

　　UF-100流式尿沉渣分析仪集电阻抗、电导度，流式细胞技术，激光和荧光染色等技术为一体，成功地实现了对尿液中各种有形成分的快速分析。由于每个有形成分(包括白细胞、红细胞、上皮细胞、细菌、各种管形、结晶、精子等)在液压聚焦下产生一系列信号，经计算机多参数分析，极大地提高了实验室工作效率。使尿液的各种有形成分得以标准化、自动化、定量分析，并能进行图像处理和图形报告，极大地提高了尿液有形成分分析的准确度和精密度，较好地解决了尿沉渣检查中存在的主要问题，提高了临床诊断效能[6-7]。

　　从表1可见，尿路感染组与对照组比较各项指标均明显增高，在对尿路感染组尿液检验结果分析研究过程中，我们发现在发病第1～7天中，尿液干化学试带法白细胞均为阳性，在+～+++之间，尿沉渣镜检白细胞均>30个/HP，不能明确提示患者治疗是否有效，而UF-100显示白细胞数呈现动态性变化，体现了定量化分析的优越性。

　　UF-100尿沉渣分析FSC/FL图中，FSC(纵坐标)为前向散射光强度，反映细胞体积，FSC越大，则细胞越大;FL(横坐标)为荧光强度，反映细胞可染色部分荧光强度，表示细胞核和线粒体，细胞核越小则FL越小。活的细胞位于FSC/FL散点图左上方，多成团分布，说明大量的白细胞具较高FSC，较低FL，可提示为急性感染。而死亡和变性的白细胞常显示细胞体积和密度改变，表现为 FSC减低和染色性增强。下移至右下方，提示治疗有效[1,8]。

　　观察感染组患者(图1,2)，除了白细胞量下降之外，还有一个显著变化，与治疗初期散点图比较，其白细胞在散点图的位置发生了明显的变化，发病初期白细胞位于左上方，治疗几天后，白细胞下移至右下方，提示白细胞由存活转为衰亡，而且这种变化先于量的改变，可在早期提示临床治疗是否有效。

　　综上所述， UF-100尿沉渣分析参数可反映尿路感染时白细胞形态的变化及细菌感染情况，对尿路感染有较好的诊断价值，可初步判断尿路感染情况，并可用于尿路感染的临床诊断及治疗效果的判断。

　　(本文图片见光盘)

　　【参考文献】

　　[1]　赵俊红，马骏龙.UF-100尿沉渣分析仪检测红细胞假阳性结果特征的探讨.现代检验医学杂志，2007,22(1)：27-28.

　　[2]　叶任高，陆再英，谢毅，等.内科学.6版.北京：人民卫生出版社，2004：525.

　　[3]　王海燕.肾脏病学.2版.北京：人民卫生出版社，1997：811.

　　[4]　叶应妩，王毓三，申子瑜，等.全国临床检验操作规程.3版.南京：东南大学出版社，2006：294-295.

　　[5]　齐杰，潘健，韩江，等.尿流式有形成分及干化学分析在尿路感染诊断中的应用评价.中华检验医学杂志，2009,32(6)：630-634.

　　[6]　Hannemann-Pohl K， Kampf SC. Automation of urine sediment examination：a comparison of the Sysmex UF-100 automated flow cytometer with routine manual diagnosis(microscopy，test strips，and bacterial culture).Clin Chem Lab Med,1999,37(7)：753-764.

　　[7]　丛玉隆，王淑娟.今日临床检验学.北京：中国科学技术出版社，1997：273.

　　[8]　Al-Daghistani HI，Abdel-Dayem M.Diagnostic value of various urine tests in the Jordanian population with urinary tract infection.Clin Chem Lab Med,2002,40(10)：1048-1051.