Survivin在肾透明细胞癌中的表达及其意义

　　作者：朱李兵，王禾，武国军，王栋　(第四军医大学西京医院泌尿外科，陕西西安 710032;　　南京军区福州总医院泌尿外科，福建福州 350000)

　　摘要：目的 检测抗凋亡基因survivin在肾透明细胞癌中的表达情况及其与肾透明细胞癌生物学特性的关系。方法 收集53例肾透明细胞癌组织及8例正常肾组织，以免疫组织化学方法检测survivin蛋白表达;半定量RTPCR方法，检测肾透明细胞癌中survivin mRNA表达水平，与正常肾组织进行比较分析。结果 62.3%(33例)肾透明细胞癌组织表达survivin蛋白，而正常肾组织无1例阳性表达。RTPCR结果表明，survivin mRNA阳性表达率为56.25%(18/32)。Survivin表达与病理分级、临床分期、有无淋巴结转移等恶性生物学特性密切相关。结论 Survivin的高表达与肾透明细胞癌具有密切相关性，提示survivin对于肾透明细胞癌的预后可能具有重要意义。

　　关键词：肾透明细胞癌;survivin;凋亡

　　Expression of survivin and its significance in suprarenal epitheliomaZhu Libing, Wang He, Wu Guojun, Wang Dong

　　(1. Department of Urology, Xijing Hospital, Xian 710032;

　　2. Department of Urology,Fuzhou General Hospital of PLA, Fuzhou 350025, China)

　　ABSTRACT: Objective To detect the expression of survivin in suprarenal epithelioma(SRE) and elucidate its function in suprarenal epithelioma. Methods A total of 53 SRE specimens and 8 nomal nephridial tissues were obtained. Immunohistochemistry method was used to test protein expression of survivin. Semiquantitative RTPCR was used to measure survivin mRNA levels. Results Survivin protein were detected in 33 of 53(62.3%) SRE tissues. In contrast, no expression of survivin in nomal nephridial tissues was detected. The expression rate of survivin mRNA in tumor tissues (56.25%,18/32) was significantly higher than that in normal tissues(0,0/8). Conclusion Over expression of survivin is common in suprarenal epithelioma. Survivin may play an important role in SRE and is associated with prognosis.

　　KEY WORDS: suprarenal epithelioma; survivin; apoptosis

　　肾癌是目前泌尿外科中常见的恶性肿瘤，而肾透明细胞癌占肾癌的70%-80%，它的发生与发展受到多种基因的调控。Survivin是一种细胞凋亡抑制因子，其在肿瘤发生中的作用近年来受到广泛关注。我们主要研究survivin在肾透明细胞癌中的表达情况，探讨其与肾透明细胞癌的病理分级、临床分期、淋巴转移等的相关性。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本 53例肾透明细胞癌组织手术切除标本，来自本院2004年10月至2005年8月间的肾癌手术患者，术后病理证实为肾透明细胞癌。按ROBSON临床分期，Ⅰ期16例，Ⅱ期17例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例。另取8例正常肾组织作对照。

　　1.2 试剂与仪器 Survivin单抗、生物素二抗、DAB显色系统由博士德公司提供;Trizol试剂购自Invitrogen公司;Survivin基因引物由北京三博公司合成;Leica Q570c 真彩图像分析仪(德国);Nikon Eclipse E1000采图摄像系统(日本)。

　　1.3 免疫组化方法检测survivin蛋白表达 53例标本经100mL/L福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，4μm连续切片。免疫组化采用SABC法，石蜡切片常规脱蜡，梯度酒精至水，3%(体积分数)H2O2室温灭活30min， 微波抗原修复，正常山羊血清封闭30min，滴加一抗(1∶100)后4℃过夜，滴加二抗，DAB显色、脱水、透明、封片。用已知的阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。Survivin主要以胞核或伴有胞浆棕黄色为阳性显色。用Nikon Eclipse E1000采图摄像系统进行照相。

　　1.4 RTPCR法检测survivin mRNA的表达 取病例中的32例新鲜的肾透明细胞癌组织手术标本,分别取癌组织和远端的正常组织，使用Invitrogen 公司的Trizol 试剂，按照操作步骤提取组织总RNA。以此RNA为模板，加入2.5mmol/L oligo(dT) 16及M2MLV逆转录酶，在37℃水浴1h，85℃灭活10min。利用RTPCR 方法，以βactin 为内参照，同时在一个反应体系中加入survivin 和βactin 两种引物,在一致的条件下扩增。survivin：上游引物：5′CCCTGCCTGGCAGCCCTTTC 3′;下游引物：5′CTGGCTCCCAGCCTTCCA′。扩增产物为188bp。βactin：上游引物：5′GCTCTCTTCCAGCCTTCCTTC 3′;下游引物：5′AGAGCCACCAACCCACACAGAG 3′。扩增产物为261bp。反应条件为：95℃ 1min，55℃ 1min，72℃ 1min，25个循环。反应产物经17g/L琼脂糖凝胶电泳、照相。

　　1.5 统计学分析 应用统计学软件SPSS for Windows 11.5对实验数据进行χ2检验。P<0.05表示有显著性差异。

　　2 结 果

　　2.1 RTPCR结果 RTPCR检测结果显示，32例肾透明细胞癌组织中，survivin表达的有18例，占56.25%(图1)。图1 Survivin表达的RTPCR的结果(略)

　　2.2 免疫组化染色结果 Survivin在正常肾组织中几乎无表达，而肿瘤病例中53例中有33例survivin表达阳性，阳性率为62.3%(图2)。图2 Survivin在肾透明细胞癌的表达(略)

　　2.3 Survivin表达与肾透明细胞癌临床病理特征之间的关系 Survivin的表达与性别、年龄、肿瘤大小等无明显关系，与病理分级、临床分期、有无淋巴结转移密切相关，在G3-G4组、Ⅲ-Ⅳ期组、有淋巴结转移组，survivin的表达明显高于G1-G2组、Ⅰ-Ⅱ期组、无淋巴结转移组(表1)。表1 Survivin表达与肾透明细胞癌临床病理特征之间的关系(略)

　　3 讨 论

　　Survivin是1997年发现的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins, IAPs)家族的一个新成员，特异地表达于人和鼠的胚胎发育组织以及多数人类肿瘤细胞，在正常成人组织的表达仅见于胸腺、睾丸和分泌期子宫内膜。人类survivin基因位于染色体17q25，长度范围在75-130kb，含3个内含子和4个外显子。Survivin是至今发现作用最强的凋亡抑制蛋白之一，目前其作用机制尚未完全研究清楚。Rodriguez等认为survivin通过与capase3和capase7结合并抑制capase3和capase7的活性而阻断细胞的凋亡过程。BlanceBrude等认为survivin是通过抑制线粒体依赖凋亡途径的上游启动子capase9和减少活性capase3、capase7的产生而发挥抗凋亡作用。同时，survivin的表达具有细胞周期依赖性，它只在G2/M期表达，在有丝分裂开始时与纺锤体的微管蛋白结合，使肿瘤细胞逃避监控，抵抗细胞凋亡，导致其异常分裂增殖。

　　研究表明，survivin的表达与多种肿瘤的生物学特性和疾病分期有关，在人类大多数系统的肿瘤中如肺癌、肝癌、白血病等中均有高表达。在泌尿系统中，Smith等认为survivin可以作为新发生的膀胱癌或复发性膀胱癌的一种简单无创的诊断方法。

　　本研究结果显示，无论是survivin基因还是survivin蛋白，在肾透明细胞癌中均有较高的表达，而在正常组织中无1例表达，说明survivin在肾透明细胞癌组织中选择性表达，而不表达于正常的肾组织，其表达可能是肾透明细胞癌发生的重要因素之一。分析survivin表达与肾透明细胞癌的主要参数的关系，发现survivin的表达与性别、年龄、肿瘤大小等无明显关系，与病理分级、临床分期、有无淋巴结转移密切相关。Survivin在G3G4组、Ⅲ、Ⅳ期及有淋巴结转移组阳性表达率均高于G1G2、Ⅰ、Ⅱ期及无淋巴结转移组，提示

　　survivin的表达可能会影响肾透明细胞癌的生物学特性，使其更容易浸润周围组织，发生局部转移、远处转移等恶性行为，也可能是预后不良的指征。

　　综上所述，survivin作为一种凋亡抑制基因，在肾透明细胞癌的发生发展中具有重要作用，同时对其预后可能也起着重要作用。

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