贲门癌中αcatenin与Ecadherin表达的相关性研究及其与贲门癌临床病理因素的关系

作者:张雷作者单位：泰山医学院附属泰安医院，山东 泰安 271000

     【摘要】  目的 检测贲门癌标本中Ecadherin和αcatenin的表达强度，探讨它们与贲门癌临床病理因素的关系及二者的相关性。方法 材料取自泰安市中心医院2000年1月～2004年5月贲门癌根治术标本62例，同期另选取癌旁正常胃组织20例做对照，行免疫组化检测。结果 贲门癌组织中Ecadherin的阳性表达率为54.8%，而正常胃组织Ecadherin 100%表达; 贲门癌组织中αcatenin的阳性表达率为45.2%，正常胃组织中αcatenin100%表达。 Ecadherin 的表达随贲门癌分化程度的降低而降低（P﹤0.01），并在有淋巴结转移者表达明显降低且与临床分期有关（P﹤0.01）；αcatenin的表达随贲门癌分化程度的降低而降低（P﹤0.01），并与淋巴结转移（P﹤0.05）及临床分期有关（P﹤0.01）。Ecadherin和αcatenin的表达与肿瘤的大小无关（P﹥0.05）。αcatenin与 Ecadherin在贲门癌组织中表达有明显相关性；它们与贲门癌浸润、淋巴结转移及临床分期成负相关。结论 对贲门癌组织中αcatenin与 Ecadherin的检测将可能成为贲门癌诊断、判断预后的有价值的生物学指标。

【关键词】  贲门癌 钙黏附蛋白 α连环素 免疫组化

   Study  of  relationships  between  expressions of αcatenin, Ecadherin and the

    clinicopathological features in human cardiac cancersZHANG  Lei

    (Dept. of Thoracic Surgery, Central Hospital of Taian City, Taian 27100, China)

    Abstract:Objective: To clarify the relationships between Ecadherin and αcatenin in the carcinoma metastasis and the relationship between their expressions and the clinicopatholoic features in patients with cardiac carcinoma. Methods: All tissues samples were taken from 62 patients with cardiac cancer after surgery in the Department of Central Hospital of Taian City from January, 2001 to May, 2004. At the same time, anther 20 normal stomach tissue were used as the contrast, and in all the speciments, expression of E-cadherin andαcatenin were determined by imunohistochemical technique. Results: The Ecadherin positive expression rate in cardiac cancer was 54.8% ,and 100% expressed in normal tissue (P﹤0.01). Ecadhern  expression was related with the degree of differentiation (P﹤0.01), lymph node metastasis (P﹤0.01) and clinical stage(P﹤0.01), but  not related with the size of cardiac tumour(P＞0.05). The αcatenin positive expression rate in cardiac cancer was 45.2% , and 100% expressed in normal tissue (P﹤0.01). The αcatenin expression was related with the degree of differentiation (P﹤0.01), lymph node metastasis(P﹤0.05), and clinical stage (P﹤0.01), but not related with the size of cardiac tumour(P＞0.05). The expressions of Ecadherin and αcatenin were associated with cardiac cancer and were negatively correlated with clinical stage and lymphtive of cardiac cancer tissues. Conclusion: The examination of Ecadherin and αcatenin may be a valuable marker for the diagnosis and prognosis of cardiac carcinoma.

    Key words : cardiac cancer; Ecadherin; αcatenin; imunohistochemical technique

 恶性肿瘤的侵袭、转移是其预后差的主要原因，肿瘤的侵袭、转移是一个多因素、多步骤、多阶段的极其复杂的过程。包括细胞黏附、降解和转移等,涉及到癌细胞与宿主之间的黏附性、癌细胞的运动等。近年来有研究表明肿瘤组织αcatenin及Ecadherin的表达与淋巴结转移及预后有密切的关系。本实验应用免疫组化SABC技术，研究了贲门癌组织中αcatenin及Ecadherin的表达情况，探讨了αcatenin及Ecadherin的表达与贲门癌分化程度、临床分期和淋巴结转移的关系，并对两者的相关性进行分析。

    1  材料与方法

    1.1  标本来源

    收集2000年1月～2004年5月经手术及病理证实的62例贲门癌患者标本，男48例，女14；手术方式为经左胸贲门癌根治术。患者年龄43～81（平均61.48±10.81）岁，所有病人术前均未接受化疗或放疗。根据PTNM国际统一分期法（1987 IUCC ）进行临床分期，Ⅱ期12例，ⅢA期29例，ⅢB期21例。组织学分级为1级（高分化）16例，2级（中分化）34例，3级（低分化）12例。同期选取正常胃组织20例做对照。蜡块制备5 μm厚连续切片。

    1.2  试剂

    粘片剂APES；即用型SABC免疫组化试剂盒，兔抗人αcatenin及Ecadherin抗体，均购自武汉博士德生物工程有限公司。

    1.3  免疫组化染色

    应用免疫组化SABC技术按试剂盒说明书进行操作。具体步骤如下：将贲门癌石蜡切片置烤箱60℃ 1小时以使切片紧密黏附； 切片常规脱蜡至水；30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合，室温10分钟以灭活内源性酶，蒸馏水洗3次；热修复抗原：将切片浸入0.01M的枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0），电炉加热至沸腾后断电，间隔6分钟，反复2次。冷却后PBS（pH 7.6）洗涤2次；滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟，甩去多余液体，不洗；滴加适当稀释的一抗（稀释5倍的兔IgG），37 ℃1小时，PBS （pH 7.6）洗2分钟×3次；滴加生物素化山羊抗兔IgG，37 ℃20分钟，PBS（pH 7.6）洗2分钟×3次；滴加试剂SABC，37 ℃20分钟，PBS（pH 7.6）洗5分钟×4次；DAB显色：使用DAB显色盒（AR1022），取1 ml蒸馏水，加试剂盒中A、B、C试剂各1滴，混匀后加至切片，室温显色，镜下控制反应时间；苏木素轻度复染，脱水、透明、封片，显微镜观察。

    1.4  结果判定

    细胞膜出现黄色、黄褐色线性着色或胞浆出现黄褐色颗粒着色判定为阳性。

    每张切片在阳性表达较高区随机选择10个高倍镜视野（×400），连续计数至少1000个肿瘤细胞，根据纪小龙等［1］提供的免疫组化阳性判断标准，计算阳性细胞的百分比率：阳性细胞数﹤10%或无阳性着色为阴性（-），阳性细胞数≥10%为阳性（+）。

    1.5  统计学处理

    贲门癌组织及正常胃组织中的αcatenin及Ecadherin的表达以阳性率表示，数据经PEMS3.0统计软件包处理。阳性率的比较采用χ2检验。

    2  结  果

    2.1  标本组织中αcatenin及Ecadherin的表达情况

    62例贲门癌组织中，有28例αcatenin呈阳性表达，阳性表达率为45.2%;有34例Ecadherin呈阳性表达，阳性表达率为54.8%。20例正常胃组织中αcatenin全部和Ecadherin表达阳性，贯门癌和正常胃组织中αcatenin和Ecadherin的表达均有显著差异。见图1～4，表1、2。表1   贲门癌组织及正常胃组织中αcatenin的阳性表达情况表2  贲门癌组织及正常胃组织中注：与正常胃组织比较，﹡P＜0.01。

    2.2  αcatenin的表达与临床病理因素的关系

分化程度不同的贲门癌中，其αcatenin的阳性表达有着明显差别，分化程度越低其αcatenin的表达越低。发生淋巴结转移的病例中αcatenin缺失表达率高于无淋巴结转移者。不同临床分期的贲门癌αcatenin的阳性表达有显著差别，分期越晚αcatenin的阳性表达率越低。但是未显示与肿块大小有关。见表3。表3  αcatenin的阳性表达与临床病理因素的关系

    2.3  Ecadherin的表达与临床病理因素的关系

    分化程度不同的贲门癌中，其Ecadherin的表达有着明显差别，分化程度越低其Ecadherin的表达越低。发生淋巴结转移的病例中Ecadherin缺失表达率高于无淋巴结转移者。不同临床分期Ecadherin的阳性表达有显著差别，分期越晚Ecadherin的阳性表达率越低。但是未显示与肿瘤大小部位有关。见表4。表4  Ecadherin的阳性表达与临床病理因素的关系

    2.4  贲门癌中αcatenin与Ecadherin的相关性见表5。αcatenin与Ecadherin的差别分析：χ2 =4.1667 ，P=0.0412，说明两者表达差别有统计学意义。αcatenin与Ecadherin相关分析：χ2=38.7889 , 列联系数r=0.8235，表明两者高度相关。表5  αcatenin 的表达与Ecadherin表达之间的关系

    3  讨  论 

    3.1  Ecadherin在贲门癌中的表达及临床意义

    恶性肿瘤侵袭、转移是肿瘤治疗中最大障碍之一，肿瘤侵袭转移是一个十分复杂的生物学现象，包括肿瘤细胞黏附于基质，蛋白水解酶降解基质，肿瘤细胞转移等过程。大致包括：①肿瘤从原发灶脱落；②侵犯周围组织；③进入循环组织；④逃避免疫监视；⑤浮着于远处血管床；⑥外渗入靶器官组织；⑦形成继发肿瘤等几个过程。其中黏附是一个重要环节，细胞表面的黏附分子是黏附功能的执行者。经多年的研究已分离鉴定出四类与肿瘤转移有关的细胞黏附分子（celladherin molecules,CAMs)，分别为整合蛋白家族，钙粘蛋白家族、免疫球蛋白超家族、选择素家族等四大类［2］。钙粘蛋白是一类介导细胞间同质黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白，主要包括分布于上皮组织中的Ecadherin，分布于神经和肌肉组织中的Ncadherin和分布于胎盘组织中的P cadherin 三类［3］。Ecadherin主要存在于人和动物的上皮细胞，它是维持上皮细胞形态和结构完整性的关键分子。Ecadherin是以嗜同性介导同型细胞细胞间黏附的细胞黏附分子，它是维持正常上皮完整性和极性的跨膜糖蛋白，近年来的研究发现在正常上皮中Ecadherin总是均匀稳定地在细胞边缘呈强阳性表达，而在大多数肿瘤组织中相对于正常组织显示低表达、不均匀性表达、甚至缺失表达。当Ecadherin表达降低或其他因素损害Ecadherin的黏附功能时，肿瘤细胞就易于脱离并逃离原发灶发生侵袭转移［4］。有研究表明Ecadherin的异常表达与肿瘤的分化、侵袭和转移有显著的相关性［5］。

    于会明等［6］的研究指出上皮型钙粘蛋白Ecadherin的表达异常与胃癌的临床分期、分化程度、浸润深度及淋巴结转移率密切相关，也有Ecadherin的表达与淋巴结转移无关报道［7］。在研究中我们发现Ecadherin在高、中、低分化贲门癌中，阳性表达率分别是93.8%（15/16）、50%（17/34）、16.7%（2/12），呈递减趋势，且三者比较差异有统计学意义。说明分化越低的贲门癌，Ecadherin的阳性表达率越低，提示Ecadherin的低表达与贲门癌癌细胞的分化程度密切相关。

    李建成等［8］研究报道，Ecadherin在舌癌中的阳性表达在Ⅲ、Ⅳ期的表达比Ⅰ和Ⅱ期显著降低（P﹤0.05）。本研究显示62例贲门癌Ⅱ期的Ecadherin阳性表达率为100%（12/12），ⅢA 期的Ecadherin阳性表达率为61.9%（18/29），ⅢB期为19.4%（4/21），各分期之间有显著差异（P﹤0.05）。因此，Ecadherin的表达与肿瘤浸润深度有关。

  总之， Ecadherin的低表达与贲门癌的发生发展、转移能力和分化程度有较显著的关系。对贲门癌组织中Ecadherinn的检测将可能成为贲门癌诊断、判断预后有价值的生物学指标［9］。

    3.2  贲门癌中αcatenin的表达及与临床病理因素的关系

    αcatenin是一种多功能胞质蛋白质，在钙粘素介导的细胞间黏附中，将钙粘素与β或γcatenin的复合物直接或间接连接在肌动蛋白细胞骨架上［10］。αcatenin也是一种肿瘤抑制因子［11］，可能参与调节细胞间黏附连接的形成和分解及细胞间的信号传导［12］。李智等［13］研究了78例大肠癌组织中αcatfenin的表达，其中30例可见αcatenin表达，阳性表达率38.16%，显著低于正常对照组（100%）。本组研究显示贲门癌αcatenin的阳性率为45.2% ，与正常对照有显著差异（P﹤0.01），提示贲门癌中αcatenin的表达降低。

    Kadowaki等［14］研究发现αcatenin的表达与肿瘤的分级及淋巴结转移有明显相关性。本研究发现62例贲门癌中αcatenin的阳性表达率随病理分级的上升而减少(P﹤0.01)，αcatenin与淋巴结转移和临床分期有关（P﹤0.01），提示αcatenin表达与贲门癌的低分化趋向和转移潜能密切相关,可能是贲门癌获得高转移能力因素之一［15］。

    3.3  Ecadherin与αcatenin联合表达与贲门癌的关系

    Ecadherin与αcatenin的协同表达在肿瘤细胞的生长、转移方面已有较多的研究，有报道认为Ecadherin与αcatenin组和功能上的异常，是其功能障碍和肿瘤呈恶性表现的原因。但是关于贲门癌中αcatenin与Ecadherin的意义国内外尚未见报道，Jiang［16］发现在癌细胞中突变的αcatenin不能连接Ecadherin。Watabe等［17］报道尽管细胞表面存在E-cadherin，αcatenin缺失的肺癌细胞仍不能很好地发生粘连，αcatenin的重新表达不能使这些细胞恢复E-cadherin介导的黏附功能。

    本研究显示，在62例贲门癌中Ecadherinn、αcatenin的表达，一方面两者差别有显著性χ2=4.1667( P﹤0.05)；另一方面两者又高度相关χ2=38.7889,列联系数r=0.8235,提示Ecadherinn、αcatenin在贲门癌的发生、发展的生物学过程中一方面各自有着自身的功能，另一方面又互相影响，在细胞恶性变,肿瘤浸润、转移中有协同作用。

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