急性冠状动脉综合征患者外周循环中性粒细胞髓过氧化物酶测定的临床意义
发表时间：2009-06-27 浏览次数：800次
作者:王媛媛
作者单位：山东大学齐鲁医院 ， 济南 250012 【摘要】 目的 探讨急性冠状动脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）患者外周循环血中性粒细胞髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）浓度的改变及其预测易损斑块的价值。方法 91例行冠状动脉造影患者分为4组，急性心肌梗塞（AMI）组19例、不稳定心绞痛（UAP）组30例、稳定心绞痛（SAP）组22例和对照组20例，抽取股静脉血分别应用流式细胞技术检测MPO浓度和粒子增强散射比浊法测定高敏C反应蛋白（highsensitivity Creactive protein,hsCRP）水平；采用透射电镜观察中性粒细胞超微结构的变化。结果 UAP组股静脉血MPO门内百分数显著高于AMI组、SAP组和对照组（P均＜0.05），AMI组股静脉血MPO平均荧光强度显著低于UAP组、SAP组和对照组（P均＜0.05）；UAP组和AMI组与对照组和SAP组相比，股静脉血hsCRP显著增高（P均＜0.05），而UAP组和AMI组、SAP组与对照组之间差异无统计学意义；UAP组MPO门内百分数和hsCRP在不稳定斑块明显高于稳定斑块（P均＜0.05）。电镜下观察对照组中性粒细胞形态较为规则，胞浆内含有大小、形状不一的不同电子密度颗粒，呈圆形或椭圆形，空泡较少；AMI患者中性粒细胞颗粒明显减少，空泡显著增多；UAP患者则显示中性粒细胞颗粒丰富，空泡少见。结论 外周循环血中MPO的含量不仅能提示ACS易损斑块的存在，而且能反映病变的严重程度。
【关键词】 中性粒细胞 髓过氧化物酶 急性冠脉综合征 高敏C反应蛋白
WANG Yuanyuan, LI Li, ZHOU Fenghua, MENG Xiao, ZHONG Ming, ZHANG Wei, ZHANG Yun
(Key Laboratory of Cardiovascular Remodeling and Function Research, Chinese Ministry of
Education and Public Health, Department of Cardiology, Qilu Hospital of
Shandong University, Jinan 250012, China)
Abstract: Objective To study the changes of peripheral venous blood concentration of myeloperoxidase (MPO) in patients with acute myocardial infarction(AMI), unstable angina pectoris(UAP) and stable angina pectoris(SAP). Methods For 91 patients subjected to coronary angiography, including 19 patients in the AMI group, 30 in the UAP group, 22 in the SAP group and 20 in the control group, the concentrations of MPO and highsensitivity Creactive protein (hsCRP) in the femoral vein were determined. The ultrastructure of leukocytes was observed by transmission electron mirror. Results The ingate percentage of MPO in the femoral vein was higher in the UAP group than in the AMI, the SAP and the control groups (P＜0.05, respectively), and there were no differences between the later three groups. The average fluoescent intensity of MPO in the femoral vein was more weakened in the AMI group than in the UAP, the SAP and the control groups (P＜0.05, respectively), and there were no differences between the later three groups. Compared with the control group, concentrations of hsCRP in the UAP and the AMI groups were significantly increased, but no difference existed between the UAP and the AMI groups or between the SAP and the control groups. In the UAP group, patients with type II lesions showed a higher ingate percentage of MPO (P＜0.05) and a higher concentration of hsCRP (P＜0.05) than those with type I lesion. Through an electron mirror, few vacuoles were found in the cytoplasm of the neutrophil in the control group, less particles and more vacuoles in the AMI group, and abundant particles and very few vacuoles in the UAP group. Conclusion Different changes of MPO between patients with AMI and UAP can not only predict ACS but also reflect the severity of inflammation.
Key words: Myeloperoxidase; Neutrophil; Acute coronary syndrome; Highsensitivity Creactive protein 动脉粥样硬化斑块破裂和伴随血栓形成是急性冠状动脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）的主要病理基础和发病机制，研究证实，不稳定斑块局部有大量的中性粒细胞和巨噬细胞的浸润以及炎症因子的表达，因此，由中性粒细胞介导的炎症反应与易损斑块的关系倍受重视。目前，中性粒细胞释放的酶-髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）作为反映中性粒细胞激活的指标受到关注［1］，本研究通过检测ACS患者外周循环MPO门内百分数和平均荧光强度的改变，旨在探讨MPO浓度的变化及其预测易损斑块的价值。
1 资料与方法
1.1 研究对象 选择2002年12月 2004年1月于山东大学齐鲁医院心内科住院行冠状动脉造影患者91例，入选者均排除急、慢性感染、肿瘤、近期手术、创伤、慢性结缔组织病及其它影响炎症指标的疾病，分为急性心肌梗死组（AMI组）、稳定心绞痛组（SAP组）、不稳定心绞痛组（UAP组）和对照组。其中，AMI组19例，男12例，女7例，平均年龄（58.25±9.74）岁，均为ST段抬高型心肌梗死7 10?d的患者，冠脉造影示单支病变10例，两支病变7例，三支病变2例，病变血管中1例为稳定斑块，18例为不稳定斑块。SAP组22例，男10例，女12例，平均年龄（58.73±7.81）岁，采用世界卫生组织的诊断标准，劳力性心绞痛发作性质和程度稳定在1 3个月内无改变者，冠脉造影示单支病变5例，两支病变9例，三支病变8例，病变血管中13例为稳定斑块，9例为不稳定斑块。UAP组30例，男18例，女12例，平均年龄（60.62±6.73）岁，除上述劳力性心绞痛以外的缺血性心绞痛，冠脉造影示单支病变7例，两支病变11例，三支病变12例，病变血管中5例为稳定斑块，25例为不稳定斑块。对照组10例，男5例，女5例，平均年龄（51.37±7.82）岁，冠状动脉造影均正常。4组受检者年龄和性别匹配。
1.2 方法 按本研究室常规方法行冠状动脉造影检查，各组受试者在冠状动脉造影时抽取股静脉血10?mL待测。
1.2.1 冠状动脉病变分型 冠状动脉造影结果由两名有经验的医师分析完成，对狭窄程度＞50%的斑块进行形态学分型，进一步将偏心性的狭窄病变分为二类，稳定斑块：基底部较宽、表面光滑的偏心病变；不稳定斑块：基底部较窄呈尖角状的病变、有龛影、表面凹凸不平或火山口样的病变。
1.2.2 MPO和高敏C反应蛋白（hsCRP）测定 采用全血溶血法检测粒细胞表型，应用流式细胞技术检测中性粒细胞MPO，结果以MPO平均荧光强度及MPO门内百分数表示；采用粒子增强散射比浊法在Behring Nephelometer 100(BN 100)特定蛋白分析仪上测定hsCRP。MPO试剂盒由美国BECTONDICKINSON公司生产，hsCRP试剂盒由德国Date Behring公司生产。
1.2.3 电镜检查 中性粒细胞由肝素抗凝血4?mL，经淋巴细胞分离液分离后获取。加入3%的戊二醛4?℃下固定4?h，PBS冲洗10?min×3，1%锇酸固定1?h，PBS冲洗10?min×3，梯度乙醇脱水。丙酮逐级脱水，环氧树脂812包埋，制成超薄切片，经醋酸双氧铀、柠檬酸铅染色各30?min，日本电子株式会社JEM1200EX型透射电镜观察。
1.3 统计学处理 采用SPSS11.0软件系统分析，所有测量参数均以±s表示，不同组间计量资料比较采用非配对ｔ检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 临床资料比较 AMI组、UAP组和SAP组与对照组相比，低密度脂蛋白胆固醇（LDL）均明显增高［（3.63±0.73）mmol/L vs （2.62±0.57）mmol/L；（3.79±0.94）mmol/L vs （2.62±0.57）mmol/L；（3.55±0.49）mmol/L vs （2.62±0.57）mmol/L；P均＜0.05］，但3个冠心病亚组间差异无统计学意义(P＞0.05)；各组患者临床用药情况亦无显著性差异。
2.2 冠状动脉病变的比较 UAP组和SAP组冠状动脉病变支数明显多于AMI组（P＜0.05），UAP组和SAP组冠状动脉病变支数差异无统计学意义。AMI组和UAP组的不稳定斑块发生率明显高于SAP组（P＜0.05），AMI组和UAP组之间差异无统计学意义（P＜0.05），见表1。n冠脉平均病变支数
2.4 UAP组冠状动脉病变与MPO、hsCRP、WBC、中性粒细胞的关系 UAP患者单支病变组、两支病变组及多支病变组之间MPO门内百分数、hsCRP、WBC、中性粒细胞差异无统计学意义(P均＞0.05)；MPO门内百分数和hsCRP在不稳定斑块组明显高于稳定斑块组（P均＜0.05），见表3。
2.5 电镜结果 对照组中性粒细胞形态较为规则，多为圆形，细胞表面有少量短而细的微绒毛，周边少见伪足，核多分叶，胞质内含有大小、形状不一的不同电子密度颗粒，嗜天青颗粒着色略深，体积较大，电镜下呈圆形或椭圆形，电子密度高，胞质内空泡较少（见图1）；UAP患者则显示中性粒细胞内含有丰富的颗粒，空泡少见（见图2）；AMI患者中性粒细胞内颗粒明显减少，空泡显著增多（见图3）。
3 讨 论
炎症反应在ACS发病中起关键作用，且与疾病的预后密切相关，流行病学研究发现，hsCRP是预测死亡的独立危险因素［2］。但在UAP患者中，hsCRP的结果差异很大。在hsCRP高于3?mg/L人群中，65%是UAP，其中95%可发生心肌梗死，另外有不到50%的心肌梗死患者hsCRP不增加，可见有约30%的UAP患者hsCRP并不增加［3,4］，从而促使人们努力寻找能反映易损斑块特点的敏感特异血清学标记物。
研究表明，白细胞总数与冠状动脉事件发生的危险性密切相关，且与冠心病的严重程度有关［5，6］。但白细胞总数只能粗略反映白细胞的活性，中性粒细胞和单核细胞膜表面的CD11b/CD18是由炎症诱导而表达的，促进白细胞与内皮细胞黏附［7］。最近，测定中性粒细胞所特有的酶—MPO被认为是一个较好的反应中性粒细胞活性的指标［1］。中性粒细胞中含有分泌MPO的嗜苯蓝颗粒，中性粒细胞被激活后，可以脱颗粒而将MPO释放到细胞外，具有强力的感染后特征，引起组织的损伤。因此，MPO有可能成为反映斑块易损的生物标记物，对ACS的识别提供信息。
MPO活性的高低代表中性粒细胞的量，是中性粒细胞的标志。其中，MPO门内百分数和平均荧光强度含量的变化分别反映中性粒细胞激活的数量和中性粒细胞内MPO位点的多少。本研究在UAP、SAP、AMI和对照组患者中，分别检测MPO平均荧光强度及MPO门内百分数，并与传统的全身炎症性标记物hsCRP比对。结果显示，正常人血液中的中性粒细胞仅60% 75%MPO呈阳性反应，可能中性粒细胞内MPO位点在正常情况下没有全部激活，大约有30% 40%处于休眠状态。UAP组的MPO门内百分数显著高于AMI组、SAP组和对照组；AMI组MPO平均荧光强度显著低于UAP组、SAP组和对照组，提示炎症反应时，中性粒细胞被激活，MPO从休眠中恢复呈激活状态，或者是中性粒细胞激活以后，为了应答炎症反应，细胞生产MPO能力及数量增加，而发挥其生物学作用。而AMI时炎症反应较UAP强，激活的中性粒细胞MPO过度释放，致使细胞内含量迅速降低，直至耗竭，与标有荧光的MPO抗体结合量显著减少。复习以往文献，MPO耗竭的特征表现为中性粒细胞内出现空泡［8］。电镜下观察显示，AMI患者血液标本中性粒细胞内有大量的胞浆空泡；对照组仅有少量空泡；UAP患者则显示粒细胞内含有丰富的颗粒，空泡少见。证实炎症反映强烈时中性粒细胞中的MPO耗竭。因此，MPO含量的升高和降低可能反映炎症的不同严重程度，MPO降低可能代表较为严重的炎症反应。本研究结果表明，UAP组和AMI组的hsCRP测值虽然升高，但两组之间比较无差异，进一步证实hsCRP是一个全身炎症的非特异标记物，不能作为炎症的病变程度的指标。
综上所述，检测冠心病患者外周静脉血中的MPO含量不但能提示易损斑块的存在，同时也能反映炎症的程度，在UAP患者中表现为MPO含量增加，而在AMI患者中则表现为MPO含量明显减低，其机制可能是MPO过度释放至耗竭。因此，MPO可作为斑块不稳定的标志，并且优于hCRP，同时有可能为ACS患者提供预后信息。
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