肺癌组织中P16及层粘连蛋白的表达及临床意义
发表时间：2009-06-27 浏览次数：924次
作者:朴贤玉,王秀华,苗宏志
作者单位：齐齐哈尔医学院生物遗传教研室（朴贤玉、王秀华、张巍） 【关键词】 肿瘤
肿瘤的形成及发展可分为两个阶段，即肿瘤细胞的克隆性增殖阶段及血管形成、肿瘤持续生长阶段［1］。多基因异常、抑癌基因的缺失和（或）突变及癌基因的激活是导致肿瘤发生的主要原因。而血管形成是肿瘤生长、侵袭、转移过程的必要条件，瘤细胞只有通过基底膜才能产生侵袭和转移、此过程中层粘连蛋白起着重要作用。本研究采用免疫组化方法，对50例肺癌标本P16蛋白及层粘连蛋白表达进行检测，探讨P16蛋白及层粘连蛋白的表达与肺癌分化程度的关系及二者在肺癌表达中的相关性。
1 材料与方法 1.1 病例选择 所有检测标本为齐医学院一附院1998年1月～2003年9月间病理科存档腊块，所有患者术前未接受放疗、化疗，标本均经病理学确诊。共收集50例标本，其中男性31例，女性19例，年龄32～70岁，平均年龄57.3岁，其中非小细胞肺癌34例（NSLLC），鳞癌31例，腺癌19例）。按TNM（基于肿瘤，结节及转移的国际癌症分类法）分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期19例，Ⅲ+Ⅳ期20例。
1.2 主要试剂 鼠抗人P16单克隆抗体及鼠抗人层粘连蛋白抗体，均购自福州迈新生物技术有限公司。
1.3 方法 采用免疫组化SP法（streptavidin peroxiase conjugataed method）一抗孵育前，切片用柠檬酸高温处理（时间，温度），染色步骤按产品说明书进行。二氨联苯胺（DAB）显色。选用已知阳性的乳腺癌组织为阳性对照，以TBS液代替一抗作为空白对照。
1.4 结果判定 P16阳性定位主要位于细胞核内，以核中出现棕黄色颗粒为阳性；层粘连蛋白染色位于癌团周围基膜,阳性表达为连续或基本连续线状包绕癌团,高倍镜下取5个不同视野，各计数200个细胞，按阳性细胞所占的百分率为“阴性”、“阳性”。阳性细胞＜10%为阴性，阳性细胞＞10%为阳性［1-2］。
1.5 统计学分析 采用χ2检验。
2 结果
2.1 P16、层粘连蛋白的阳性表达率 50例肺癌标本中P16、层粘连蛋白阳性表达率分别为38%（19/50），28%（14/50）（图1～4见封四）。
2.2 P16蛋白的阳性表达与肺癌组织分型的关系 见表1。鳞癌与腺癌组织各种蛋白阳性表达例数经χ2检验，无显著性差异（P＞0.05）。
表1 P16蛋白的阳性表达与肺癌组织分型的关系（略）
2.3 P16蛋白表达与肺癌TNM分期的关系 见表2。P16蛋白的阳性表达在Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期的肺癌组织中有显著差异（P＜0.05）。
表2 P16蛋白在肺癌组织中的表达与TNM分期的关系（略）
注：与Ⅰ+Ⅱ期相比*P＜0.05。
2.4 层粘连蛋白表达与肺癌TNM分期的关系 见表3。层粘连蛋白的阳性表达在Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期的肺癌组织中有显著差异（P＜0.05）。
表3 层粘连蛋白在肺癌组织中的表达与TNM分期的关系（略）
注：与Ⅰ+Ⅱ期相比*P＜0.05。
2.5 P16与层粘连蛋白在肺癌表达中的相关性 见表4。18例P16表达阳性肺癌组织中有13例层粘连蛋白表达阳性，32例P16表达阴性肺癌组织中有31例层粘连蛋白表达阴性，两者表达呈显著正相关（P＜0.05）。
表4 p16与层粘连蛋白在肺癌表达中的关系（略）
3 讨论 抑癌基因P16位于9号染色体短臂上（9p21），编码一个由148个氨基酸组成、分子量为1.6×104的蛋白，P16蛋白是目前为止发现的第一个直接控制细胞增殖周期的细胞固有蛋白，P16的抑制作用缺失，将使细胞异常增生［2］。P16基因主要选择性抑制CDK4、CDK6活性，从而在细胞周期中起负调控作用。P16基因的突变、缺失、5’端CPG岛甲基化等原因引起P16蛋白表达异常与多种肿瘤的发生、发展有关［3］。我们研究发现P16蛋白主要在细胞核中表达，并且该蛋白表达随着肿瘤临床分期不同而不同，Ⅲ期肺癌组织P16蛋白表达较Ⅰ+Ⅱ期下降，P16蛋白表达缺失与肺癌分期有关，可作为判断肿瘤分期的一个辅助指标。 层粘连蛋白是一种与许多具有不同结构和功能区构成的，只存在于基底膜中的大分子非胶原性糖蛋白，由附着在基膜的主质细胞合成分泌,同时主质细胞也分泌降解物质分解基膜结构,层粘连蛋白在基底膜的构建及细胞粘附、生长、迁移和分化中扮演着重要的角色［4］。本研究发现，层粘连蛋白的阳性表达在Ⅰ、Ⅱ期肺癌明显高于Ⅲ期肺癌，可能是由于高分化癌分泌合成物质多于降解物质，基膜结构较完整，而低分化癌分泌降解物质多于合成物质，基膜结构不完整有关。 本研究还发现P16蛋白与层粘连蛋白在肺癌组织表达中呈正相关，并且二者都与肺癌组织学分级有关，说明P16蛋白与层粘连蛋白表达在肺癌发生中有一定的相关性。可能与P16蛋白表达失活引起肿瘤细胞过度增殖，而使细胞分泌降解基膜物质多于合成基膜物质有关。
【参考文献】 ［1］ 崔言刚，王英年，张可佳，等.肺癌组织中P16蛋白与血管生长因子表达的临床意义［J］.山东医药,2000，40（19）
［2］ 田辉，陈明菊，张超，等.P16基因与肺癌［J］中国胸心血管外科临床杂志，1997，4（2）：119-120
［3］ Kamb A,Gruis NA,Weaver feldhous J,et al.A cell-cycle regualator potentially involved in genonsis of many tumor types［J］.Science,1994,264:436
［4］ Colognato H,Yunrchenco PD.Fom and function:the of laminin family heterotrimers［J］.Dev Dyn,2000,218:213-234
