肺癌患者的Th１/Ｔh２免疫反应状态

作者:曹颖平,康明强

           【关键词】  肺肿瘤；,T淋巴细胞,辅助诱导；,Th1细胞；,Th2细胞；,细胞因子类；,酶联免疫吸附测定

　　摘要:  目的  了解不同病理类型肺癌患者辅助性T细胞亚群(Th1/Th2)的反应状态，探讨肺癌发生发展的免疫机制。  方法  收集不同病理类型肺癌患者77例（腺癌30例，鳞癌28例，小细胞肺癌19例）、肺部良性疾病患者33例、健康志愿者45例的血清，分成肺癌组、良性组和正常组，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组外周血中Th1型细胞因子白细胞介素2（IL2）、γ干扰素(IFNγ)和Th2型细胞因子IL4、IL10的浓度。结果  3种不同病理类型肺癌患者外周血中IL2、IFNγ浓度均显著低于正常组，IL4、IL10浓度显著高于正常组（P<0.05）。良性组外周血Th1/Th2型细胞因子浓度与正常组比较差别无统计学意义(P>0.05)。  结论  腺癌、鳞癌、小细胞肺癌等3种不同病理类型的肺癌患者外周血中的免疫细胞均呈现Th2型免疫反应优势状态，使肺癌逃逸免疫，是肺癌发生发展的可能免疫机制。

　　关键词:  肺肿瘤； T淋巴细胞，辅助诱导； Th1细胞； Th2细胞； 细胞因子类； 酶联免疫吸附测定

　　Th1/Th2的平衡消长是机体免疫反应调节的基本方式，肿瘤的Th1/Th2免疫反应状态是近年来国内外研究的热点之一[12]。笔者以IL2、IFNγ代表Th1型细胞因子，IL4、IL10代表Th2型细胞因子，用ELISA方法检测肺癌患者外周血中Th1/Th2型细胞因子的水平，观察不同病理类型肺癌患者的Th1/Th2免疫反应状态，将有助于揭示肺癌病人的免疫调节机制。

　　1  材料与方法

　　1.1  对象  收集2002年1月12日～2005年12月20日收治的经病理证实的肺癌患者77例作为肺癌组，年龄（56±17）岁（33～72岁），其中小细胞肺癌19例，鳞癌28例，腺癌30例；肺部良性疾病患者33例作为良性组，年龄（51±13）岁（30～68岁）；健康志愿者45例作为正常组，年龄（53±15）岁（35～70岁）。

　　1.2  方法  采集不抗凝外周血2 mL，取其血清备查。IL2，IFNγ，IL4，IL10的标准品及其检测试剂盒均购自Genzyme公司。

　　1.2.1  包被  将鼠抗人的IL2、IL10和IFNγ单抗按1.0 μg/mL，抗人的IL4按0.5 μg/μL的浓度溶于pH 9.6的碳酸盐缓冲液中，然后每孔加50 μL至96孔板中，4 ℃过夜。

　　1.2.2  用PBST（含0.05% Tween 20的PBS）洗涤3次。将灭活的新生牛血清（FCS）按5%的浓度配在PBST中，每孔加100 μL，37 ℃封闭1 h。用PBST洗涤3次。

　　1.2.3  加入50 μL标准品稀释液至零孔和空白孔，然后在各孔中分别加入50 μL稀释的标准品、血清，每份做2个复孔，而后用封板胶封住反应孔，37 ℃孵育60 min。用PBST洗涤3次。

　　1.2.4  加入生物素标记的羊抗鼠二抗，IL2、IL10和IFNγ按1∶500，IL4按1∶400稀释在含5% FCS的PBST中，每孔加入50 (L，而后用封板胶封住反应孔，37 ℃孵育60 min。

　　1.2.5  用PBST洗涤3次。用HRP标记的亲和素50 μL，而后用封板胶封住反应孔，37 ℃孵育15 min。用PBST洗涤3次。

　　1.2.6  每孔加入底物A、B各50 μL，混匀，37 ℃孵育10 min。每孔加终止液50 μL。在波长450 nm处，用空白孔调零，测每孔光密度。

　　1.2.7  制作标准曲线或求出标准方程。根据标准曲线或方程求出每测定孔的细胞因子的浓度。

　　1.3  统计学处理  资料用x±s表示，各肺癌组、良性对照组及正常对照组外周血中Th1/Th2型细胞因子浓度的比较采用成组设计的两样本均数比较的t检验。

　　2  结果    　　腺癌、鳞癌及小细胞肺癌等3种不同病理类型的肺癌患者外周血中Th1/Th2型细胞因子的浓度均明显高于正常组（P<0.05），而良性组与正常组比较，其外周血Th1/Th2型细胞因子浓度无明显差异（P>0.05）（表1）。

　　表1  3组外周血中Th1/Th2相关细胞因子的浓度（略）

　　Tab 1  The concentration of Th1/Th2 related cytokines in the serum from three study groupspg/mL

　　与正常组比较，☆：P<0.05.

　　3  讨论    　　已知辅助性T细胞（Th细胞）是机体重要的免疫调节细胞。人类Th细胞存在Th1、Th2两个不同的功能亚群，其中以分泌IL2、IFNγ和TNFα为主的称为Th1，主要介导细胞免疫和移植物排异等。而Th2细胞主要分泌IL4、IL5、IL6及IL10，主要介导体液免疫和过敏反应。由于机体内Thl/Th2两个亚群相互作用，相互拮抗，任一亚群可以遏制另一个亚群的增殖及功能发挥，因此维持着正常机体内Thl/Th2两个亚群细胞因子的动态平衡，当Thl/Th2细胞因子的平衡失调，即所谓的Thl/Th2漂移，会导致机体免疫调节功能的紊乱。    　　肿瘤的发生发展与机体的免疫功能有密切关系。当宿主的免疫功能低下，或宿主APC的功能低下或缺陷时，肿瘤发病率增高；而在肿瘤进展时，肿瘤患者的免疫功能受到抑制，两者可互为因果，双方各因素的消长对肿瘤的发展起着重要的作用。机体的抗肿瘤免疫的效应机制包括细胞免疫和体液免疫两个方面，其中细胞免疫是抗肿瘤免疫的主力，Thl细胞主导机体的细胞免疫功能，对抗肿瘤免疫反应十分重要。在细胞免疫机制中起主要作用的效应细胞为T细胞、NK细胞和巨细胞。抗原活化的T细胞只能特异地杀伤、溶解带有相应抗原的肿瘤细胞，并受MHC限制，具体包括MHCI类抗原限制的CD8+ CTL和MHCⅡ类抗原限制的CD4+ Th细胞。CTL识别肿瘤细胞自身表达的MHCI类抗原分子，Th细胞识别由APC提呈的MHCⅡ类抗原分子。目前认为，CD8+ CTL是抗肿瘤免疫的主要效应细胞，其杀伤肿瘤的机制有二：一是通过其抗原受体识别肿瘤细胞上的肿瘤抗原并与之结合，通过溶细胞作用，直接杀伤肿瘤细胞；二是分泌各种细胞因子，如IFNγ、TNF而间接杀伤肿瘤细胞[34]。    　　笔者的研究结果显示，与正常组比较，腺癌、鳞癌及小细胞肺癌等3种不同病理类型的肺癌外周血中Th2型因子IL4和IL10浓度呈现明显优势状态，Thl型细胞因子IL2和IFNγ的浓度却明显下降，说明3种不同病理类型的肺癌患者机体均出现Thl/Th2细胞因子的平衡失调，均发生了Thl向Th2的异常漂移。骨髓瘤、卵巢癌、肾癌、结直肠癌、黑素瘤等多种类型肿瘤宿主体内也发现Thl向Th2的偏移现象[5]。

IL4是IL10分泌的启动因子之一，某些诱因使肿瘤机体发生向Th2的偏移后，肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）可产生大量的IL4，进而促进肿瘤组织产生IL10，后者可降低炎症细胞因子的表达；也可降低抗原提呈细胞MHC的表达。IL4是介导Th2型细胞发育的主要细胞因子，IL10是抑制Thl型细胞因子应答的主要细胞因子，本研究发现3种不同病理类型的肺癌患者机体均发生了Thl向Th2的漂移现象，而肺部良性疾病组未出现该免疫变化，说明Th1向Th2的漂移是恶性肺瘤的特有现象，Th2型细胞因子优势状态将导致机体抗肿瘤免疫功能的减弱，将保护肿瘤逃逸免疫监视和免疫攻击，这可能是肺癌发生发展的免疫机制之一，这也为肺癌的治疗提供新的思路，如果能纠正失衡的Thl/Th2细胞因子网络，逆转肺癌细胞或其宿主机体的Thl/Th2的异常漂移，将非常有利于以细胞免疫为主的抗肿瘤免疫能力的恢复，对减少肺癌发生，防止肺癌复发、转移，提高长期生存率等都有重要的意义。

　　参考文献：

　　[1]  Jankovic D,Kullberg M C,Caspar P, et al. ParasiteInduced Th2 polarization is associated with downregulated dendritic cell responsiveness to Th1 stimuli and a transient delay in T lymphocyte cycling cellular immunology and immune regulation[J]. Immunology, 2004,173(4):24192427.

　　[2]  Chechlinska M,Duma A,Swierkowska K, et al. Sera of lung cancer patients affect the release of Th1, Th2 and monocytederived cytokines, and the expression of IL2R alpha by normal, stimulated mononuclear cells[J]. Cell Mol Biol Lett, 2004,9(1):6981.

　　[3]  Knutson K L,Disis M L. Tumor antigenspecific T helper cells in cancer immunity and immunotherapy[J]. Cancer Immunol Immunother, 2005,54(8):721728.

　　[4]  Neurath M F,Finotto S,Glimcher L H. The role of Th1/Th2 polarization in mucosal immunity[J]. Nat Med, 2002,8(1):567573.

　　[5]  Murakami H,Ogawara H,Hiroshi H. Thl/Th2 cells in patients with multiple myeloma[J]. Hematology, 2004,9(1):4l45.

　　基金项目: 福建省自然科学基金资助项目（C0510016，C0310025）

　　作者单位: 福建医科大学 附属协和医院 检验科，福州  350001；附属协和医院 胸外科，福州  350001；2005级硕士研究生，福州  350004