手术对非小细胞肺癌患者血清抗Survivin抗体水平的影响

　　作者：邹亚峰,王国臣　　作者单位：064400 河北省迁安市人民医院胸外科(邹亚峰);华北煤炭医学院附属医院胸外科(王国臣)

　　【摘要】 目的 本实验探讨手术对非小细胞肺癌患者血清中抗存活素(Survivin)抗体水平的影响。方法 用酶联免疫吸附(ELISA)检测260例非小细胞肺癌(NSCLC)，其中69例Survivin抗体阳性患者行手术治疗，68例健康体检者和60例肺良性病变患者血清中的Survivin抗体水平。结果 高于对照组均值2个标准差作为确定非小细胞肺癌抗Survivin抗体阳性的诊断标准:1.3946+2×0.0846=1.56 U/ml。抗Survivin抗体在健康体检者中检测结果均为阴性，在非小细胞肺癌中表达率51.5%(134/260)，手术组69例，化疗组65例，其表达量明显高于健康体检者(P<0.05)。抗Survivin抗体在良性病变手术组几乎不表达，与健康体检者比较差异无统计学意义(P>0.05)。肺癌手术组术前、术后1周抗Survivin抗体表达比较差异有统计学意义(P<0.05)，术后1周和术后2周抗Survivin抗体表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。肺癌手术组腺癌、鳞癌术前抗Survivin抗体表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。肺癌手术组腺癌、鳞癌术后1周抗Survivin抗体表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 对于非小细胞肺癌患者手术前后抗Survivin抗体水平的监测有助于评估非小细胞肺癌患者的治疗效果，指导临床治疗。

　　【关键词】 非小细胞肺癌;抗Survivin抗体;Survivin;ELISA;鳞癌;腺癌;手术;肺良性病变

　　目前，国内外综合治疗对非小细胞肺癌患者血清抗存活素(Survivin)抗体水平的临床研究甚少，多数为关于Survivin蛋白与临床疗效的观察研究，且结论多由统计肿瘤患者的生存期，或体外实验研究得出，鲜有探索临床治疗与非小细胞肺癌患者血清抗Survivin抗体之间的相互关系的临床观察研究。本实验用通过用ELISA法对非小细胞肺癌患者手术前后血清中抗Survivin抗体的测定，检测抗Survivin抗体变化，观察治疗效果，指导临床治疗。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 260例非小细胞肺癌患者(非小细胞肺癌组)血清标本，经酶联免疫吸附(ELISA)法检测后证实为抗Survivin抗体阳性的69例手术患者(肺癌手术组)血清标本，术后1、2周采血经离心后的血清标本和68例健康体检者(对照组)的血清标本以及60例肺良性疾病患者(肺良性病变组)术前和术后1周采血经离心后的血清标本。

　　1.2 实验试剂 人抗Survivin抗体/生存蛋白(SurvAb)酶联免疫分析试剂盒(上海麦莎生物科技有限公司,产品编号：E1 814 h,检测范围1.56～100 U/ml)。

　　1.3 检测方法 血清抗Survivin抗体浓度测定采用ELISA法,严格按说明书实验步骤操作，450 nm光波检测吸光度。

　　1.4 浓度计算 计算以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，OD值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线根据样品的OD值，由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数;或用标准的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程，将样品的OD值代入方程式，计算出样品的浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　1.5 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 对照组男女不同性别抗Survivin抗体表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

　　表1 对照组抗Survivin抗体检测值比较±s

　　项目抗Survivin抗体P值t值男(n=49)1.3857±0.08220.161-1.418女(n=19)1.4179±0.0884 总数(n=68)1.3946±0.0846

　　2.2 抗Survivin抗体在对照组中检测结果均为阴性，而在非小细胞肺癌组中表达率为51.5%(134/260)，手术患者69例，化疗患者65例，2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

　　表2 2组抗Survivin抗体阳性率比较例(%)

　　组别 阳性阴性对照组(n=68)0(0)68(100)非小细胞肺癌组(n=260) 134(51.5)*126( 48.5)

　　注：与对照组比较,*P<0.05

　　2.3 抗Survivin抗体在良性病变手术组术前与健康体检组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

　　表3 抗Survivin抗体在良性病变组测量结果比较±s

　　组别抗Survivin抗体u值肺良性病变组(n=60)1.4110 ±0.12840.8413对照组(n=68)1.3946±0.0846

　　2.4 肺癌手术组术前、术后1周抗Survivin抗体表达比较差异有统计学意义(P<0.05)，术后1周和术后2周抗Survivin抗体表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

　　表4 肺癌手术组术前、术后抗Survivin抗体测量结果比较n=69，±s

　　时间抗Survivin抗体F值P值手术前2.1009±0.734266.1350.000手术后1周1.4342±0.1154*1.1080.272手术后2周1.3083±0.1215

　　注：与手术前比较，*P<0.05

　　2.5 肺癌手术组腺癌、鳞癌术前抗Survivin抗体表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表5。

　　表5 肺癌手术组腺癌、鳞癌术前抗Survivin抗体测量结果比较±s

　　病理类型抗Survivin抗体t值P值鳞癌(n=33)2.4352±0.50450.4340.665腺癌(n=36)2.3792±0.5610

　　2.6 肺癌手术组腺癌、鳞癌术后1周抗Survivin抗体表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表6。

　　表6 肺癌手术组腺癌、鳞癌术后1周抗Survivin抗体测量结果±s

　　病理类型抗Survivin抗体t值P值鳞癌(n=33)1.4382±0.11830.2720.786腺癌(n=36)1.4306±0.1142

　　3 讨论

　　Survivin蛋白的组织分布特征有明显的细胞选择性，它表达于胚胎和发育的胎儿组织，不见于终末分化的正常成人组织(胸腺和生殖腺除外)，但在体内外的分化组织、人类大多数肿瘤组织内有Survivin蛋白的表达。该蛋白可被自身固有T细胞所识别，具有抗原性，血清中其抗体称为抗Survivin抗体。癌细胞的Survivin过表达可导致抗Survivin抗体和细胞毒性T淋巴细胞抗癌反应[1,2]。

　　目前，Survivin的基因表达情况可以通过分子生物学、免疫组化、血清抗Survivin抗体等多种方法检测，但前两种方法由于操作复杂繁琐，不易在临床上推广，而血清学方法由于具有操作简单，重复性好，不需要蜡块等优点，在临床上已见报道。2000年 Rohayem 等[2]首先报道了用ELISA法检测肺癌和结直肠癌患者血清中的抗Survivin抗体，其中肺癌患者51例，结直肠癌患者49例，在其实验中，肺癌患者抗Survivin抗体阳性11例，阳性率21.6%(11/51)，结直肠癌患者抗Survivin抗体阳性4例，阳性率8.2%(4/49)。并且发现抗Survivin抗体在肺癌患者中有相当高的流行率，令人感兴趣的是在肺癌的细胞株中Survivin的表达水平尤其高。因此Survivin可以被认为是一种主要的肿瘤抗原[3]。2004年Joseph等[4]报道对头颈癌获得癌症治疗前连续294人的血液进行了抗Survivin抗体的检测,标准治疗是对早期患者行根治性手术，对中期危险的患者加辅助放疗，如靠近手术边缘或有淋巴结转移。伴行的放化疗给予有淋巴结转移和淋巴结以外器官转移者。所有癌症患者根据世界卫生组织分级标准被组织学分级为分化良好，中分化和低度分化[5]，肿瘤病理学分期根据美国癌症联合委员会分期制度[6]。在其实验中对照组截断值等于均数+2个标准差，对照组有1例高于此标准(2.5%)，而癌症样本有134例(46%)高于此标准(P<0.01)。在癌的不同部位抗Survivin信号表现无明显不同。并且抗Survivin和肿瘤侵袭性相关，表明血清自身抗体可以代表细胞的状态。这些结果提示检测循环血液中的抗Survivin抗体可以作为检测确定头颈癌状态的一种有用的非侵袭性标志物。国内董德琼等[7]报道用ELISA法验检测非小细胞肺癌患者血清中的抗Survivin抗体34例，抗Survivin抗体阳性率为32.5%(11/34)，高于Rohayem报道的21.6%的阳性率的报道，且有治疗后较治疗前有明显下降。以高于对照组均值2个标准差作为非小细胞肺癌抗Survivin抗体阳性的诊断标准。我们在本实验中，收集了260例非小细胞肺癌患者治疗前的血清，所有患者均符合世界卫生组织/国际肺癌学会(WTO/LASLA)肺和胸膜肿瘤组织学分类标准[8]，用ELISA法检测其血清中的抗Survivin抗体，其阳性率为51.5%(134/260)(手术组69，化疗组65例)，高于以往报道，可能与我们所用的试剂有关。为了便于比较治疗前后抗Survivin抗体的变化，我们剔除了抗体阴性的非小细胞肺癌患者及未经治疗者，其中69例行肺癌根治术(肺叶切除+纵隔淋巴结清扫或全肺切除+纵隔淋巴结清扫),肺良性病变60例进行手术治疗，术前术后1周采血进行抗Survivin抗体检测,肺癌手术组术后1周、2周采血进行抗Survivin抗体检测。实验结果以高于对照组均值2个标准差作为确定非小细胞肺癌抗Survivin抗体阳性的诊断标准:1.3946+2×0.0846=1.56 U/ml。

　　健康对照组全部阴性，肺良性病变组术前亦全部阴性，Survivin在正常组织及肺良性病变组织中不表达。这表明检测非小细胞肺癌患者血清中的抗Survivin抗体，用于肺良恶性疾病的诊断及鉴别诊断具有一定的特异性。69例非小细胞肺癌患者术前抗Survivin抗体均阳性，(2.1009±0.7342)，术后1周测血中抗Survivin抗体阳性4例，阳性率4.3%(4/69)，术后2周全部阴性，上述结果表明，在行肺癌根治切除术，切除了原发肺癌和可能转移的淋巴结,切除了Survivin蛋白的来源，进而根除了Survivin蛋白诱发机体产生抗Survivin抗体的免疫反应，表明血清抗Survivin抗体与肿瘤负荷有关。非小细胞肺癌患者术后1周测血中抗Survivin抗体阳性4例，阳性率4.3%，术后2周全部阴性，说明体内的抗体完全消失需要一定的时间。在69抗Survivin抗体阳性的非小细胞肺癌手术的患者中，鳞癌33例，腺癌36例，术前、术后抗Survivin抗体浓度差异无统计学意义，说明抗Survivin抗体与病理类型无明显关系。260例非小细胞肺癌患者血清抗Survivin抗体检测，抗体检测阴性126例，占48.5%。即使是同一种肿瘤，且组织中均有Survivin蛋白的聚集，有的病例表达抗Survivin抗体，有的病例不表达，提示抗Survivin抗体的表达可能和宿主的免疫状态有关。Yagihashi等[9]在其研究中亦报道抗Survivin的抗体反应并不是在那些表达Survivin癌症患者的所有患者中表现的。

　　总之，通过对健康体检者抗Survivin抗体的检测及良性肺疾病患者术前术后抗Survivin抗体的检测，抗Survivin抗体在健康体检者及非良性疾病患者中不表达，而在非小细胞肺癌患者中高表达，说明抗Survivin抗体对非小细胞肺癌患者具有特异性，可作为非小细胞肺癌筛查及早期诊断的指标。通过对非小细胞肺癌患者术前术后抗Survivin抗体的检测，我们发现抗Survivin抗体在术后水平迅速下降，说明其为非小细胞肺癌治疗监测的一项较为敏感的指标。

　　【参考文献】

　　1 Schmitz M,Diestelkoetter P,Weigle B,et al.Generation of survivinspecific CD8+ T effector cells by dendritic cells pulsed with protein or selected peptides.Cancer Res,2000,60:48454849.

　　2 Rohayem J,Diestelkoetter P,Weigle B，et al.Antibody response to the tumorassociated inhibitor of apoptosis protein survivin in cancer patients.Cancer Res,2000,60:18151817.

　　3 Tamm I,Wang Y,Sausville E,et al.IAPfamily protein survivin inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas (CD95),Bax,caspases,and anticancer drugs.Cancer Res,1998,58:53155320.

　　4 Chang JT,Wong FH ,Liao CT ,et al.Enzyme immunoassay for serum autoantibody to survivin and its findings in headandneck cancer patients.Clinical Chemistry,2004,50:12611264.

　　5 Shanmugaratnam K,ed.Histological typing of tumours of the upper respiratory tract and ear.International histological classification of tumours.2nd ed.Berlin: SpringVerlag，1991.192.

　　6 Fleming ID,Cooper JS,Henson DE,et al.AJCC cancer staging manual.5th ed.Philadelphia: Lippincott Williams Wilkins,1998.2376.

　　7 董德琼,杨渝浩.薛东鹰.非小细胞肺癌患者血清抗Survivin抗体、P53抗体水平的研究.贵州医药,2005，29:969970.

　　8 钟雪云.肺和胸膜肿瘤的病理组织学新分类.中国肿瘤,2000,9:129130.

　　9 Yagihashi A,Asanuma K,Nakamura M,et al.Detection of antisurvivin antibody in gastrointestinal cancer patients.Clinical Chemistry,2001,47：17291731.