食管癌组织环氧化酶_2和BCL_2蛋白的表达与临床病理的关系

　　作者：艾义国,饶旭光,马立民,杨伟　　作者单位：汕头大学医学院第二附属医院胸心外科，广东汕头515041

　　【摘要】目的：检测环氧化酶(COX)_2及凋亡相关蛋白BCL_2在食管癌组织中的表达，并探讨二者与食管癌临床病理行为的关系。方法：应用免疫组化SP法检测67例食管癌组织及10例癌旁组织标本中COX_2及BCL_2的表达。结果：食管癌组织中COX_2和BCL_2表达增高，阳性率分别为776%、835%，两者高表达与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、组织类型、分化程度、临床分期、淋巴结转移均无关。癌旁组织中二者均呈阴性表达。BCL_2和COX_2表达呈正相关(r=0270，P<005)。结论：人食管癌组织COX_2和BCL_2表达增强，COX_2可能通过激活BCL_2发挥抗凋亡作用，且在食管癌的发生、发展中起重要作用。

　　【关键词】 环氧化酶_2;BCL_2蛋白;食管肿瘤

　　Study on Cyclooxygenase_2 and BCL_2 Protein Expression in Human Esophageal

　　Carcinoma Tissue and Their Relationships to Clinicopathologic CharacteristicsAI Yi_guo， RAO Xu_guang， MA Li_min， YANG Wei

　　(Department of Cardiothoracic Surgery，The Second Affiliated Hospital，Shantou University Medical College，Shantou515041，China)[Abstract]Objective： To investigate the expression of cyclooxygenase(COX)_2 protein and apoptosis associated gene BCL_2 protein in human esophageal carcinoma tissue, and to explore their over_expression in formation and development of neoplasm. Methods： Expressions of BCL_2 and COX_2 were assayed by immunohistochemical staining on 67 samples of esophageal carcinoma tissues and their adjacent tissues(10 samples). Results： COX_2 and BCL_2 protein were over_expressed in esophageal carcinoma tissue. The expression rates were 776% and 835%. COX_2 and BCL_2 were not correlated to age， sex， tumor size， depth of invasion， histological type, pathological grade， clinical stage and lymph node metastasis. There was positive correlationship between BCL_2 and COX_2(r=0270，P<005). Conclusion： The significant higher expressions of COX_2 and BCL_2 are observed in esophageal carcinoma tissues. COX_2 may contribute to tumor proliferation，suppress apoptosis by stimulating BCL_2 expression.

　　[Key Words]cyclooxygenase_2，BCL_2 protein，esophageal carcinoma食管癌的发生、发展是一个多因素、多阶段、多基因变异的复杂生物学过程，涉及癌基因的激活和抑癌基因的失活，但诱发食管癌基因变异的因素及其生物学机制尚未明了。环氧化酶(COX)被认为是“快速反应基因”，在细胞受到各种刺激后迅速合成，其过表达可通过改变细胞某些增殖和凋亡相关基因的表达，导致细胞无限制增殖而促进消化道肿瘤的发生。凋亡相关蛋白BCL_2是重要的抗凋亡蛋白，通过部分阻止细胞色素C释放发挥抑制凋亡作用，在多种肿瘤中存在高表达。为进一步探讨两者在食管癌中的表达及其意义，我们选取汕头大学第二附属医院2001_02_05—2007_06_06外科手术切除的食管癌标本67例，应用免疫组化技术检测食管癌组织中COX_2、BCL_2的表达情况，分析其在食管癌组织中表达的变化与临床、病理特征的关系。

　　1资料与方法

　　11标本来源

　　本组男性42例，女性25例。年龄34～76岁，平均560岁。鳞癌62例，腺癌5例。根据UICC 1997年的修订标准进行TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期39例，Ⅲ+Ⅳ期28例。淋巴结转移阳性者43例，阴性者24例。高分化18例，中分化35例，低分化14例。另取正常食管黏膜组织10例，取自同期食管癌手术切除标本中，距癌组织5?cm以外，常规病理证实为正常组织的标本作对照。所有患者术前均未接受化、放疗或免疫治疗。

　　12试剂

　　COX_2兔抗人单克隆抗体、BCL_2鼠抗人单克隆抗体及SP免疫组化试剂盒均购自福建迈新生物技术开发有限公司。选用提供的COX_2和BCL_2阳性切片在同一条件下染色作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

　　13方法

　　采用辣根过氧化酶标记的SP法测定COX_2和BCL_2的表达：石蜡切片常规脱蜡至水，体积分数3%的H2O2_甲醇封闭5?min，PBS漂洗后置柠檬酸中，微波炉抗原修复5?min，PBS漂洗后依次滴加一抗4?℃过夜，二抗37?℃ 15?min，辣根酶标记的链霉卵白素工作液15?min，PBS漂洗后DAB显色，自来水充分冲洗终止反应，苏木精对比染色，脱水，透明，封固。

　　14结果判定标准

　　COX_2、BCL_2阳性染色主要定位于细胞质的棕黄色颗粒，随机选取5个高倍视野(×400)计算肿瘤细胞中阳性细胞比例，按文献[1]分为：阳性细胞<5%为“_”，5%≤阳性细胞<30%为“+”，30%≤阳性细胞<60%为“++”，阳性细胞≥60%为“+++”，+～+++均视为阳性表达。

　　15统计学处理

　　应用SPSS150软件进行数据分析，率的比较采用χ2检验;COX_2和BCL_2表达的相关性采用Spearman秩和相关分析。

　　2结果

　　21COX_2、BCL_2在食管癌中的表达及与临床病理特征的关系

　　本组COX_2阳性表达52例(图1，封3)。10例癌旁正常食管组织均为阴性表达。食管癌标本中COX_2表达明显高于癌旁正常食管组织(χ2=23904，P<0001)。COX_2表达与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、组织类型、分化程度、临床分期及淋巴结有无转移均无关(χ2值分别为0090、0060、3773、2148、1559、0652、0189和0052,P值分别为0776、1000、0075、0200、0580、0722、0769和1000)。本组BCL_2阳性表达56例(图2，封3)。10例癌旁正常食管组织均为阴性表达。食管癌标本中的BCL_2表达明显高于癌旁正常食管组织(χ2=30647，P<0001)。BCL_2表达与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、组织类型、分化程度、临床分期及淋巴结有无转移均无关(χ2值分别为0680、0373、0159、0671、1016、3519、0073和2007，P值分别为0512、0734、0750、0715、0582、0172、1000和0182)(表1)。表1COX_2、BCL_2在食管癌组织中的表达表2COX_2和BCL_2表达的相关性

　　COX_2是催化花生四烯酸转化为前列腺素的一个关键限速酶，静息时不表达,在细胞受到各种刺激因素(细胞因子、炎症介质、生长因子、癌基因、致癌剂等)的诱导下迅速合成，与消化系统肿瘤的关系密切[2～5]，在癌症发生、发展过程中扮演重要角色。研究表明，COX_2在食管癌组织中存在高表达，但有关COX_2表达及与食管癌临床病理特征关系的报道结果不尽一致。研究发现，COX_2在分化好的食管肿瘤组织中呈强阳性表达,在分化差的食管癌组织中呈阴性表达。有研究发现COX_2在食管低分化鳞癌中也存在较高表达，分化程度与COX_2表达差别无统计学意义。研究认为，COX_2表达水平与食管癌的远处转移和肿瘤分期呈负相关或无关[6～11]。本组研究结果显示,食管鳞癌及腺癌组织中COX_2表达显著增高，二者的表达结果间无统计学意义，且COX_2表达与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、组织类型、分化程度、临床分期及淋巴结有无转移无关，而COX_2在癌旁正常的食管黏膜组织中不表达。提示COX_2的过表达可能是食管癌发生的早期事件，可能与食管癌的病因学有关。研究表明，COX_2的表达和食管癌的发生、发展有密切关系，但具体机制仍不清楚。COX_2表达与食管癌临床病理特征的关系的研究结果也不一致，原因可能与不同实验方法敏感性的差异有关，也可能与COX_2在食管癌病程中的调控机制比较复杂有关。

　　最早发现转染COX_2表达载体的鼠肠道上皮细胞对丁酸盐诱导的凋亡有抵抗，高水平的COX_2可增加第1次突变细胞的生存时间，并增加其再次突变的机会,且与BCL_2蛋白的表达增加有关[12]。进一步的研究还发现COX_2和BCL_2在胃癌中的表达升高且二者表达存在正相关[13]。而在肺癌和膀胱癌的研究中并未发现COX_2和BCL_2的表达存在相关性[14_15]。本研究结果显示，BCL_2在食管癌中的表达显著升高，且与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、组织类型、分化程度、临床分期、淋巴结有无转移均无关。COX_2的表达和BCL_2的表达呈正相关，即存在COX_2过表达的组织BCL_2也倾向过表达，而癌旁正常组织则无BCL_2表达。提示COX_2促进食管癌的发生可能是通过上调BCL_2表达，抑制肿瘤细胞的凋亡实现的，具体机制有待进一步研究。部分COX_2阴性组织亦出现BCL_2表达，也提示COX_2并不是BCL_2激活的唯一上游通路，有可能是肿瘤的发生与多基因的异常有关，而非单一基因异常作用。

　　综上，证实了COX_2和BCL_2在食管癌组织中存在过表达，COX_2的过表达可能是食管癌发生的早期事件,COX_2可能通过激活BCL_2发挥抗凋亡作用，从而促进食管癌的形成和发展。

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