生长抑素与食管癌

　　作者：杨洋 作者单位：天津市第五中心医院胸外科，天津 300021

　　【摘要】 目的： 检测食管癌组织中生长抑素(somatostatin， SS)的表达情况，研究这种生物因子与临床常见指标间的联系，试评价其在食管癌预后及生物治疗中的价值。 方法:运用免疫组织化学SP法对99例经手术治疗的食管癌患者的石蜡组织标本进行研究。结果:SS与组织分化程度和形态学分型显著相关。分化越差，SS的表达越低。SS与总生存期(OS)有显著相关性。SS可以作为影响OS的独立预后因子。取值越低，生存期越短。结论:SS在食道癌的形成、发展过程中占有一定的地位。SS可能是一种判断食管癌预后的独立因子。

　　【关键词】 食管肿瘤 生长抑素 免疫酶技术

　　Study on somatostatin and esophageal carcinoma

　　YANG Yang

　　(Department of Thoracic Surgery, Tianjin Fifth Central Hospital, Tianjin 300021, China)

　　[ABSTRACT] Objective: To determine the expression of somatostatin(SS) in esophageal carcinoma and analyze its relations to the common clinical indicators, evaluate its value for the biological therapy and prognosis of esophageal carcinoma. Methods: Waxed tissue samples of 99 patients with surgery confirmed esophageal carcinoma were studied using SP method of immunohistochemistry. Results： SS correlated significantly with the cell differentiation and morphological types. The less differentiated the cell, the lower the SS expressed. SS correlated significantly with the overall survive(OS) time. SS might serve as an independent factor of prognosis for the evaluation of OS. The lower the value, the shorter the survive time. Conclusion： SS plays a certain role in the generation and progress of the esophageal carcinoma. SS may be an independent factor for the prognostic evaluation of the esophageal carcinoma.

　　[KEY WORDS] Esophageal tumors; Somatostatin(SS); Immunoenzyme technique

　　食管癌的早期临床诊断仍缺乏有效的检测方法。临床所见多为中、晚期患者。治疗主要是手术为主，辅以化疗、放疗等综合治疗。辅助治疗在很大程度上决定患者的预后与生存期限。已有研究发现，某些特异性生物因子对于肿瘤的诊断、术后辅助治疗时预后的判断等具有特定的提示作用，同时还可以作为术后开展个性化辅助治疗的依据。有关食道癌在此方面的研究却不多见。我们以原发性食管癌为研究对象，检测生长抑素(somatostatin， SS)在食管癌组织中免疫活性的表达情况。现报告如下。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　本组食管癌组织99例取自军事医学科学院附属医院及河北肿瘤医院1986～1999年手术切除并经病理证实的标本。其中男性67例，女性32例，年龄在33～77岁之间，中位年龄55.3岁。随访69例。食管癌组织于手术中切下后，经10%中性福尔马林溶液固定、取材、石蜡包埋保存。每个标本均作4 μm厚的连续切片。

　　1.2 主要试剂

　　兔抗人生长抑素多克隆抗体(武汉博士德公司)，工作浓度1∶50，通用型SP9000免疫组化试剂盒(北京中山公司)。

　　1.3 方法

　　采用链菌素亲生物素—过氧化物酶法(streptavidinbiotinperoxidasecomplex， SP法)。用胰岛细胞瘤作为生长抑素的阳性对照片。评价标准：以细胞呈清晰棕色为阳性，按阳性细胞所占比例分为：(-) 阳性细胞比率5%以下;(±)阳性细胞比率5%～10%;(+) 阳性细胞比率11%～25%;(++)阳性细胞比率26%～50%，(+++)阳性细胞比率大于50%。

　　1.4 数据处理

　　资料采用EXCEL97建库，所有定性指标按等级量化。根据资料的特点选用定性资料R×C表格的不同检验方法：对于单向有序资料采用秩和检验及Logistic回归分析。双向有序属性不同资料采用秩和检验、Spearman相关分析及线性趋势检验。单因素生存分析采用Kaplanmeier法并经Logrank及Breslow检验。多因素分析根据COX比例风险模型(α=0.05)，采用逐步前进法进行独立预后因素的筛选。所有统计分析均利用SPSS 10.0软件包完成。

　　2 结果

　　2.1 生长抑素表达的临床特点

　　①SS 主要为胞浆染色，99例食管癌中阳性表达者44例(44.1%)。

　　②不同的手术年龄、性别、肿瘤的发生部位、浸润深度、淋巴结转移情况，以及病理组织学分型下，SS各染色等级的频数分布之间无显著性差异 (P>0.05)。

　　③不同分化条件下SS各染色等级的频数分布之间有显著性差异(P<0.05)。高分化表达率最高，低分化表达最低(P=0.0005)。

　　④Spearman相关分析示：组织分化程度与SS的表达等级之间呈非常显著的负相关，相关系数rs=-0.391 24(P=0.0001);肉眼分型同SS的表达等级之间呈显著正相关，rs=0.218 (P=0.03)。

　　⑤不同的肉眼分型SS各染色等级的频数分布之间有显著性差异(P<0.05)。溃疡型表达率最高，髓质型次之，伞型表达最低。

　　⑥线性趋势检验示：SS染色的阳性率随分化程度的降低而呈直线下降趋势(P=0.0001)

　　2.2 生存分析

　　Kaplanmeier单因素分析示不同的淋巴转移状况、分化程度、SS染色强度在生存期的表现上存在显著性差异。COX多因素分析(表1，图1)示淋巴结转移状况、分化程度和SS染色强度可以作为独立的预后因素引入。表1 99例食管癌多因素COX模型最终分析结果注：b=回归系数;S.E.=标准误;r=相关系数。

　　3 讨论

　　食管癌作为我国的一个高发癌种，临床上以手术切除为主，辅以放、化疗。早期食管癌不易发现，临床就诊者多属中晚期，手术切除后生存期较短、预后偏差。化疗及放疗效果不佳，且不良反应大，患者常难以耐受，其他疗法如基因治疗、生物治疗等作用亦不明显。评估其预后的生物指标目前均不理想，近年来，生长抑素及其类似物对肿瘤的抑制作用越来越受到人们的关注。检测食管癌组织所携带的特异性生物学信息不仅可以为临床的预后提供参考，还可以考虑相应的个性化辅助治疗。

　　生长抑素发现于1968年，1972年正式命名为促生长素抑制素，简称生长抑素(somatostatin， SS)，其氨基酸序列于1972年由 Brazeau 等[1]首先报道。SS是一种负性激素，在其多种作用中，抑制肿瘤细胞的分化增殖尤为重要。生长抑素可通过抑制胃肠激素的分泌、干扰肿瘤细胞的自分泌或旁分泌、抑制肿瘤血管的生成、调节机体的免疫功能、抑制基因的转录等机制，对抑制肿瘤细胞的生长具有一定的作用[24]。生长抑素及其类似物不仅能调节垂体激素的分泌，而且能直接对免疫系统发挥重要作用，通过特异的SST受体，还具有抑制细胞增生的作用，可抑制生物激素生长因子的分泌，从而抑制肿瘤的生长[5]。

　　本试验结果表明，SS蛋白在癌组织及正常组织上均有阳性表达，呈团块状分布。既往研究表明，SS在其他组织包括肿瘤上的表达一般均在胞浆内。在本试验结果中也得以证实。但试验中还发现有4例SS呈强阳性表达在胞核，在排除了试验整个过程本身可能引起的偏差后，我们分析SS胞核阳性表达是可能的。由于SS蛋白为胞核合成，合成后出核进入胞浆，当肿瘤切除时，由于合成时相的差异，最终可能导致这种结果的出现，因此，可以把胞核染色看作为SS的一种少见的表达模式。随后的重复切片、染色的结果也再次证明了这一点。试验中发现，食管癌组织中SS的阳性表达同淋巴结转移状况、组织分化程度显著相关。具体来说，SS表达低者淋巴结转移概率增大，组织分化程度越低。这些结果同相关的肿瘤分子水平的研究结果是相符的。多因素COX模型分析显示，SS可以作为独立的因素最终进入模型。对于生存期来讲，SS与淋巴结状况、组织分化程度一样，可以看作是一个独立的预后因子，取值越低则生存期越短。其中，组织分化程度的影响最大，淋巴结转移状况次之，SS的影响最弱。

　　杨洋.生长抑素与食管癌 天然SS生物学活性广泛，且在血浆中半衰期短(约3 min)，人们开发多种人工合成的类似物，以选择性增强和延长其某种生物学活性。通常是在SS结构中加入氨基酸以增强抗解酶的能力，而延长活性或替换某种氨基酸，衍生出许多不同活性的类似物，其半衰期长，作用更强大。生长抑素衍生物不仅应用于急性胰腺炎、消化道瘘和内分泌肿瘤等多种疾病的治疗，而且对消化道非内分泌肿瘤的生长也具有一定的抑制作用，国内外均有报道，其中研究比较多的人工合成的类似物是奥曲肽(Octreotide，SMS201995)，目前已证实奥曲肽联合α干扰素、5Fu等物治疗某些内分泌肿瘤具有一定的协同作用。Cascinu等临床研究发现：生长抑素类似物奥曲肽能够抑制结、直肠癌患者VEGF的表达水平，能够减少血管生成因子VEGF的表达[6]。

　　由于生长抑素衍生物的不良反应与常规化疗药相比明显减少，作为一种辅助治疗措施，对临床上一些不能耐受化疗或放疗的晚期消化道肿瘤患者，使用生长抑素治疗不失为一种较好的替代疗法。随着人们对内分泌治疗方法和机制更加深入的了解，相信食道癌的预后评估和综合治疗也会更好地完善和发展。

　　【参考文献】

　　1 Brazeau P， Vale W， Burgus R， et al. Hypothalamaic polypeptide that inhibits the secretion of immunereactive pituitary growth hormone[J]. Science，1972，129：7779.

　　2 Oberg K. Interferonαversus somatostatin or the combination of both in gastroenteropancreatic tumours[J]. Digestion， 1996，57(1)：81.

　　3 Faiss S， Scherubl H， Riecken EO， et al. Interferonα versus somatostatin or the combination of both in metastatic neuroendocrine gut and pancreatic tumours[J]. Digestion， 2003，57(1)：84.

　　4 Weckbecker g， Raulf F， Tolcsvai L， et al. Potentiation of the antiproliferative effects of anticancer drugs by octreotide in vitro and in vivo[J]. Digestion，2006，62(1)：22.

　　5 张鸿伟，王凤山.生长抑素及其结构修饰的研究进展[J].中国生化药物杂志，2003，24(5)：265267.

　　6 Cascinu S, Del Ferro E, Ligi M, et al. Inhibition of vascular endothelial growth factor by octreotide in colorectal cancer patients. Cancer Invest,2001,19:812.