NOS1和b-FGF在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

作者:刘琰,张一梅

作者单位：哈尔滨医科大学

   【摘要】  　　目的 研究一氧化氮合酶1（NOS1）和碱性成纤维细胞生长因子（b-FGF）在肺癌组织中的表达及其临床意义。 方法 用免疫组化法检测80例肺癌组织中NOS1和b-FGF蛋白表达。结果 NOS1和b-FGF表达的阳性率分别为52.5% 和51.3%；NOS1与肿瘤组织的分化程度密切相关，分化越低，NOS1表达越强；b-FGF表达与TNM分期、IMVD及淋巴结转移有关。 结论 NOS1和b-FGF在肺癌中表达与否与患者的预后相关。

【关键词】  肺肿瘤 一氧化氮1 碱性成纤维细胞生长因子 免疫组织化学

　　Expression and inducible nitric oxide synthase and b-FGF in Lung Carcinoma

　　LIU Yan. 

　　(Harbin Medical University,Harbin,Heilongjiang 150081 China)    　　【Abstract】  Objective  To investigate the expression and significance of inducible Nitric oxide synthase(NOS1) and b-FGF in lung carcinoma.    Methods  The expression of NOS1 and b-FGF protein was detected by SP immunohistochemical staining in 40 cases of lung carcinoma.  Results  The expression rate of NOS1 and b-FGF was 52.5% and51.3% respectively.The expression of NOS1was positively correlated with differentiation,the poorer the differentiation,the more expression of the NOS1protein.The positive expression of b-FGF was associated with intratumor microvessel density TNM stage and lymph node metastases of NSCLC.  Conclusions  The expression of NOS1 or b-FGF is correlated with prognosis of lung carcinoma.    　　【Key words】  Lung neoplasm  Nitric oxide  b-FGF  Immunhistochemistry    　　一氧化氮（NO）是一种新的血管生成调节因子，诱导型一氧化氮合酶（iNOS）机器催化产生的NO是集体内持续大量NO的主要来源，对恶性肿瘤的发生发展及血管的生成有一定的影响［1］。b-FGF是促血管形成的重要因子，肿瘤血管是实体肿瘤生长、侵袭和转移的基础，我们检测了非小细胞肺癌中NOS1和b-FGF蛋白表达，探讨NOS1和b-FGF与肿瘤血管形成和两者在肺癌临床分期的关系。

　　1  材料和方法

　　1.1  材料  我院胸外科2006～2007年手术切除并经病理证实的肺癌80例，手术前均未进行放疗或化疗，其中男性64例，女性16例，年龄34～79岁（中位年龄53岁），鳞癌53例，腺癌27例。所有标本均用100ml/L的福尔马林固定，石蜡包埋切片，厚4μm。

　　1.2  试剂  NOS1（Santa Cruz产品）和SABC试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司，抗b-FGF单克隆抗体S-P试剂盒购自福州迈新生物有限公司。

　　1.3  方法

　　1.3.1  免疫组化染色  采用S-P法染色步骤如下:石蜡切片常规脱蜡至水化，内源性过氧化物酶阻断10min，微波抗原修复，非免疫动物血清温育10min，一抗温育过夜(4℃)，二抗温育20min(室温)，链亲合素过氧化物酶溶液温育30min(室温)，DAB或AEC显色5～10min，苏木素对比染色后，脱水，透明，封片。光镜下观察，同时观察癌旁组织，并予记录。用己知的阳性切片同时同一条件下染色作为阳性对照，用ＰＢＳ代替一抗作为阴性对照。

　　1.3.2  判断标准  免疫组化b-FGF 和NOS1的表达强度根据阳性物质着色深浅及面积判断结果。对每张切片阳性细胞的阳性强度DAB显色按无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色(AEC显色按无着色、淡红色、红色和红褐色)分别计0.1.2.3分；着色阳性面积按无着色、着色<1/3,1/3，2/3,>2/3分别计分0. 1. 2. 3分；然后根据两项计分之和判断其结果:≥3分为阳性；3～ 4分为低表达；5～6分为高表达。

　1.3.3  统计学处理  采用t检验、χ2检验和精确概率法检验及相关分析。

　　2  结果

　　2.1  肺癌组织NOS1和b-FGF表达  分别有鳞癌30例、腺癌12例在NOS1呈阳性表达；有鳞癌24例、腺癌17例在b-FGF呈阳性表达；阳性率在NOS1分别为鳞癌56.6%、腺癌44.4%；在b-FGF分别为鳞癌45.3%、腺癌63.0%。（见图1，2）。

　　2.2  NOS1和b-FGF的表达及与NSCLC生物学行为的关系  NOS1表达与肿瘤的分化程度有密切关系，低分化组的阳性率明显高于中度分化组和高分化组，与肿瘤大小、组织类型、临床分期、术后复发和转移均无关（P>0.05）。    　　b-FGF在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达均与病理类型无关(P>0.05),随着肿瘤病理分级增高，b-FGF的阳性表达有增高趋势,但经统计学处理差异无显著意义(P>0.05)。b-FGF阳性表达在有淋巴结转移组阳性表达率均显著高于无淋巴结转移者(P<0.05)，见表1。

　　表1  NOS1 和b-FGF的表达及与NSCLC生物学行为的关系（略）

　　图1  .NSCLC NOS1免疫组化染色癌细胞浆呈阳性表达（略）

　　图2  .NSCLC b-FGF 免疫组化染色癌细胞浆呈阳性表达（略）  　　3  讨论    　　iNOS表达与一些恶性肿瘤的恶性程度密切相关，肿瘤细胞iNOS 产生的一氧化氮可以促进肿瘤微血管的形成，并使肿瘤血管处于最大的舒张状态［2］。本组实验发现，肺癌分化越差，NOS1阳性率越高，提示NOS1 表达与肺癌的恶性程度有一定关系。    　　b-FGF与肿瘤血管生成的关系密切, b-FGF还可通过自分泌和旁分泌作用促进肿瘤细胞增殖,起到分裂原的作用［3］。本实验研究结果表明b-FGF在有淋巴结转移组的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组,说明它们对肿瘤的转移有促进作用,而且与肿瘤进展有关。NO促血管生成的作用机制尚不清楚,目前认为NO是调节血管生成的开关分子,可能通过与其他血管生成因子如VEGF或b-FGF等相互作用而发挥作用。体外实验证实NO是b-FGF引起血管生成的关键信号之一;也有研究表明,NO主要在VEGF调节的血管生成过程中发挥作用［4］。最近有研究表明,iNOS选择性抑制剂氨基胍(AG)通过抑制iNOS活性，减少NO的生成,阻断其效应途径及VEGF的产生,可抑制肿瘤血管增殖,导致肿瘤坏死增加,且对化疗药物起协同作用,亦从肿瘤间质血管方面间接证实了VEGF和iNOS是促进肿瘤血管生成的重要因子［5］。而VEGF和b-FGF在促血管形成方面有协同作用，同时也提示在抗NSCLC新血管生成治疗应多因素联合应用［6］。    　　动物实验发现，iNOS在伴有炎症的肺鳞癌发生早期的癌前病变阶段组织中的表达即有上调，炎症程度不同的组织中表达有一定差异；随着癌变的进展，iNOS表达进一步上调，在没有明显炎症的侵袭癌、转移癌组织中逐步加强表达，提示iNOS表达虽与肺的炎症有关但在肺癌的发生发展中不同于炎症过程中的一过性表达，不仅仅是炎症的伴随产物，而是促进和保持细胞恶性转化的重要因素［7］。本组NOS1和b-FGF表达均与肺癌的临床分期无关，提示两种蛋白在肺癌组织中表达也并非一过性。

【参考文献】  　　［1］ 李红霞,王春光,邵国光,等.肺癌组织中诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的表达及其与血管生成的关系［J］.吉林大学学报（医学版）,2005，31(4)：592-594

　　［2］ 曾曙光，陈伟良.一氧化氮在舌鳞癌血管生成中的作用［J］.中山大学学报（医学科学版）,2002，23（5）：375-377

　　［3］ 冉瑞琼,傅晓颖,曹晓运,等.p16抑癌基因产物在肺癌中的表达及临床意义［J］.上海医科大学学报,1997,24(2):83-86

　　［4］ Konopha TE, Barker JE, Bamford TL,et al. Nitric oxide synthase Ⅱ genedisruption:implications for tumor growth and vascular endothelial growth factor production［J］.Cancer Res,2001,61(7):3182-3187

［5］ 王广义,顾建华,吕国悦,等.氨基胍对小鼠移植性胃癌的影响［J］.吉林大学学报（医学版）,2004,30(3):409-412

　　［6］ 李桂圆，陈龙邦，王靖华，等.VEGF、b-FGF、NOS2和NOS3在非小细胞肺癌的表达及其临床意义［J］.中国癌症杂志,2003,13(2)

　　［7］ Wilson KT, Fu S, Ramanujam KS, et al. Increased expression of inducib;e nitric oxide synthase and cycloosygenase-2 in Barrett's esophagus and associated adenocarcinomas［J］. Cancer Res,1998,58(14):2929-2934