天龙液对实验性自身免疫性肌炎豚鼠模型中肝脏损伤的治疗作用

　　作者：杨蕴天 江新梅 金山 作者单位：吉林大学第一医院神经内科，吉林 长春 130021

　　【摘要】 目的 采用多发性肌炎(PM)的豚鼠模型，检测血清肝功指标及肝脏病理变化，并观察天龙液对肝脏损害的治疗作用。方法 用兔肌肉匀浆加完全佛氏佐剂免疫注射豚鼠造成实验性自身免疫性肌炎(EAM)动物模型，将EAM豚鼠随机分为4组：模型组，对照组(给予生理盐水10 ml·kg-1·d-1)，泼尼松组(给予泼尼松3 mg·kg-1·d-1治疗)和天龙液组(给予天龙液3 750 mg·kg-1·d-1治疗)，比较各组间血清肌酶、肝功指标及肝脏病理改变。结果 模型制作后血清ALT、AST、GGT显著升高(P<0.05)，肝脏病理出现轻度炎性改变;天龙液组治疗后肝脏损害改变好转(P<0.05)。结论 EAM豚鼠出现肝功改变，天龙液对此肝脏损害有治疗作用。

　　【关键词】 肝脏;天龙;多发性肌炎;豚鼠

　　多发性肌炎(polymyositis,PM)是一种与自身免疫有关的炎性肌病，细胞免疫与体液免疫同时存在，可累及皮肤和内脏多种器官。有报道，PM患者血清肝功指标升高〔1〕，在制作豚鼠实验性自身免疫性肌炎(experimental autoimmune myositis，EAM)的动物模型时亦发现肝脏有明显损伤〔2〕。但目前PM合并的肝脏损伤尚未引起足够重视，无明确的治疗药物。为此本文对EAM豚鼠肝脏损伤进行了分析，并观察天龙液对肝脏受损的治疗作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物模型的建立与分组 40只健康英国短毛豚鼠(吉林大学实验动物中心提供)，体重300～400 g，雌雄各半。4～5只同处一笼，每日给予适量的新鲜蔬菜，以免维生素C缺乏。第1周所有的豚鼠均于项背部皮下注射兔肌肉匀浆0.2 ml(经分光光度计蛋白定量法测定此匀浆含蛋白45 mg/ml)+ 完全佛氏佐剂0.1 ml，以后每周注射1次，连续4 w。开始免疫注射6 w后，取肌酶谱升高的豚鼠作为PM动物模型(40只豚鼠肌酶谱均升高)，随机分为模型组、对照组、泼尼松组和天龙液组，各组10只。

　　1.2 实验方法 天龙全药由长春中医学院提供，研磨成粉末后用生理盐水配置成药液(375 mg/ml)，由吉林大学第一医院药剂科加工配制。在开始免疫注射6 w后，天龙液组豚鼠每只经胃管喂以天龙液3 750 mg·kg-1·d-1，连续6 w;泼尼松组豚鼠每只经胃管喂以泼尼松3 mg·kg-1·d-1，连续6 w;对照组豚鼠经胃管喂以生理盐水10 ml·kg-1·d-1，继续喂养6 w。模型组处死取标本。

　　1.3 肌酶及肝功指标检测 模型组和所有治疗6 w后豚鼠，经心脏穿刺取血1～2 ml，3 000 r/min 5 min，取上层血清，用日立747型生化自动分析仪检测肌酸磷酸激酶(CPK)，乳酸脱氢酶(LDH)，谷草转氨酶(AST)，谷丙转氨酶(ALT)，碱性磷酸酶(ALP),γ-谷氨酰转肽酶(GGT)。

　　1.4 肝脏病理 采用常规苏木精-伊红(HE)染色。

　　1.5 统计学方法 应用SPSS10.0软件分析结果。数据用x±s表示，组内数据比较采用两样本均数的t检验，组间数据比较采用方差分析。

　　2 结果

　　2.1 各组肌酶谱值比较 天龙液和泼尼松两组与对照组比较CPK、LDH、AST值差异有显著性(P<0.05)，天龙液组与泼尼松组CPK、LDH、AST比较差异有显著性(P<0.05)，见表1。

　　2.2 各组肝功指标比较 豚鼠ALP、ALT、AST、GGT正常值分别为(151.65±9.26)、(57.08±10.21)、(51.01±11.41)、(7.10±1.21)IU/L，与模型组比较显著差异(P<0.05)。天龙液和泼尼松两组与对照组比较ALT、AST、GGT明显好转(P<0.05)。天龙液组与泼尼松组ALT、AST、GGT比较差异有显著性(P<0.05)，见表2。

　　表1 各组豚鼠肌酶谱值比较(略)

　　与对照组比较：1)P<0.05;与泼尼松组比较：2)P<0.05，下表同

　　表2 各组豚鼠肝功指标值比较(略)

　　2.3 各组豚鼠肝脏病理变化 正常肝脏组织大体形态正常，镜下肝细胞索排列有序，肝细胞形态正常。模型组肝细胞索排列紊乱，内皮细胞及肝细胞普遍水肿，出现气球样变性，汇管区有炎性细胞浸润，而天龙液组上述改变明显好转，肝细胞略有肿胀，无明显气球样变及点片状坏死;泼尼松组肝脏病理亦有好转，改变与天龙液组相似。对照组上述改变无好转。见图1。

　　图1 各组豚鼠肝脏病理改变(HE，×200)(略)

　　3 讨论

　　本实验所采用的实验方法均参考赵红东等的报道〔3〕，成功制备与人类PM病变相似的动物模型，因此在建立EAM模型中本实验方法是可靠的，可模拟人类PM时酶学变化。

　　本实验证实EAM豚鼠肝功指标亦升高，且肝脏病理出现肝细胞索排列紊乱，内皮细胞及肝细胞普遍水肿，气球样变性，汇管区有炎性细胞浸润等炎性改变，提示PM时存在肝脏的改变。肝脏是一个免疫器官，肝脏疾病时可发生细胞吞噬功能，体液和细胞免疫功能的紊乱，引起一些病理生理学改变;另一方面，异常的免疫反应也是导致某些肝脏疾病病理变化的发病机制。血清内ALT、AST、ALP、GGT主要来自肝脏，在病理情况下，肝脏的酶含量常有改变，并且可以反映在血液内酶浓度的变化〔4〕。本组资料由于ALP不与GGT平行升高，因此推测肝功指标升高是因为肝细胞损害造成，而非肝内胆汁淤积所致。免疫介导的炎性改变时，肝细胞通透性改变或肝细胞溶解坏死，使得存在于细胞浆内及细胞膜处的ALT、AST及GGT 易于逸出，进入血液，使酶活力增高。肝脏损害的原因可能为：①自身抗体介导的免疫损害：自身免疫性肝病总是伴有自身抗体的出现，如抗线粒体抗休(AMA)、抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)等〔5〕，这些抗体在PM时也有增高。几乎所有的自身抗体相结合的抗原成分为细胞内抗原，自身抗体与靶细胞上自身抗原成分的特异结合激活补体系统而引起溶细胞作用，导致靶细胞损伤。②细胞因子作用：在PM时白介素-1、4、6、10，肿瘤坏死因子,α-干扰素升高〔6〕，这些细胞因子在免疫性肝病中也起作用，介导免疫反应，产生细胞损害。通过本实验，认为在临床治疗PM患者时，应用对肝脏有损害的药物需慎重;在治疗的同时，给予护肝治疗，可能会取得更好的疗效;监测血清肝功指标变化对判断预后会有所帮助。

　　实验采用的天龙为脊椎动物壁虎科(Gekko)蹼趾动物或同属它种壁虎的干燥体，又名守宫、壁虎、蝎虎。性味寒咸，有小毒，入心肝经。具有补肺肾、养精血、止咳平喘、祛风定惊、解毒通络、散结等功效。目前天龙在治疗系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病有较好的疗效〔7〕。本实验表明天龙液组动物血清肝功指标明显下降(P<0.05)，肝脏病理改变好转，说明天龙对EAM豚鼠的肝脏损害有较好的治疗效果。有报道天龙具有组织修复、抗炎、抗肿瘤〔8～12〕等作用，我们认为天龙可能通过抑制自身免疫应答引起的炎症过程以及调整机体的免疫调节功能对EAM肝脏损害起到治疗作用。

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