丹参注射液对小鼠lewis肺癌上皮型钙黏素表达的影响

 作者：徐亚东 张薇 尤立光 赵守梅作者单位：哈尔滨医科大学附属第五医院呼吸科 普外科 哈尔滨医科大学附属第一医院呼吸科    【摘要】  目的 观察丹参注射液对小鼠lewis肺癌上皮型钙黏素（E-cadherin, E-cad）的表达。方法 建立lewis肺癌小鼠模型，用免疫组织化学方法检测丹参对肿瘤细胞E-cad表达的影响，测肿瘤体积、瘤重。结果 生理盐水组E-cad阳性表达率与丹参组和环磷酰胺组有显著性差异，而后两组差异无显著性。结论 丹参可抑制小鼠lewis肺癌上皮型钙黏素的异常表达并抑制小鼠lewis肺癌生长。 【关键词】  丹参注射液 lewis肺癌 上皮型钙黏素　　The inhibitory effects of Danshen injection on expression of E-cadherin of Lewis Cancer mouse 　　XU Ya-Dong,et al. 　　Department of Respiratory Disease,The Fifth Clinical Hospital of Harbin Medical niversity,Daqing,Heilongjiang 163318 China    【Abstract】  Objective  To observe the inhibitory effect of Danshen injection on the expression of E-cadherin of the mice with Lewis lung cancer.  Methods  To establish Lewis pulmonary carcinoma models,detected the expressions of E-cadherin by immunohistochemistry(IHC) and determined the size of tumor,tumor weight at the end of experiment. Results  There were significant differences from the expression of E-cadherin between Danshen groups and Saline groups;E-cadherin expression levels in Danshen groups had no significant differences than in Cyclophosphamide groups. Conclusions  Danshen can inhibit effectively the growth and metastasis of implanted Lewis lung carcinoma,which is probably attributed to reducing the abnormal expression of E-cadherin.    【Key words】  Danshen Injection  Lewis lung carcinoma  E-cadherin    丹参为唇形科鼠尾草属植物，具有抗血小板聚集、改善微循环、调节血液流变学、增强机体免疫、逆转慢性肝病纤维化、抗脂质过氧化及对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护［1］；以及抗肿瘤、抗氧化、抗菌抑菌抗炎、激素样活性及心血管方面等药理作用［2］。上皮型钙黏素（E-cadherin, E-cad）是一个钙依赖性细胞黏附分子，可直接与β-连环蛋白(β-catenin,β-cat)和γ-连环蛋白结合，形成结合型的β-cat与E-cad复合体，以维持上皮细胞之间的黏附。本实验研究丹参对小鼠lewis肺癌E-cad表达的影响。　　1  材料和方法　　1.1  药物、试剂

　　丹参注射液（DS，正大青春宝药业有限公司，每支10 ml，相当于原生药15g，批号0101156）。注射用环磷酰胺（CTX江苏恒瑞医药股份有限公司，每支200 mg，批号06052021国药准字H32020857）。鼠抗人E-cadherin单克隆抗体，山鼠IgG和链霉素卵白素过氧化物酶复合物购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

　　1.2  方法

　　1.2.1  动物

　　C57BL/6纯系小鼠，雄性 6～8周，（20±2）g，60只,北京维通利华公司动物实验中心，动物许可证号：SCXK(京)2002-2003。在SPF级实验动物房内养殖。

　　1.2.2  瘤株

　　Lewis 肺癌，lewis肺癌荷瘤鼠由中科院肿瘤研究所提供并传代保种；动物许可证号：SCXK(京)2004-0001，Lewis 肺癌维持在C57 BL/6小鼠体内，每2周传代1 次。

　　1.2.3  动物分组  　　取C57 BL/6小鼠60只，随机分为3组：盐水空白对照组、丹参组、环磷酰胺组，每组20只。各组间小鼠体重差异无显著性。

丹参注射液对小鼠lewis肺癌上皮型钙黏素表达的影响

发表时间：2008-5-21 11:23:30 浏览次数：5 来源：中国创新医学网推荐

　　1.2.4  荷瘤动物模型的建立

　　取传代后14 d的Lewis肺癌瘤源小鼠，颈脱臼处死，固定于鼠板上，常规消毒，于超净工作台中，从腋部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜和坏死组织，在无菌平皿中剪碎，置组织研磨器中加4 ℃生理盐水，轻轻研磨过滤，制成瘤细胞悬液，0.4 %台盼蓝计数，细胞活力大于95%调整细胞为1 ×10 7/ml。以上述瘤细胞悬液0.2 ml于右腋部皮下注射，以建立模型。

　　1.2.5  给药方法

　　从接种肿瘤第6日开始腹腔注射药物，盐水组日腹腔注射0.9%生理盐水0.2 ml；丹参组日腹腔注射丹参注射液0.2 ml稀释液（相当于生药40g/kg）；CTX组日腹腔注射CTX 0.2 ml稀释液（相当于CTX药量25mg/kg）；连续10 d 。末次给药后24 h，小鼠处死，剥取瘤块称重，肿瘤组织制成蜡块。

　　1.3  观察指标与测定方法

　　瘤体积：瘤体积＝0.52ab2（注：a为瘤体的最长径,b为瘤体的最短径）。瘤重：剥取瘤块称重。抑瘤率(%)=(模型组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/模型组平均瘤重×100%。

    E-cad计数：用E-cad标记指数，指每个标本随机检测5个以上视野，数500个以上肿瘤细胞，按其阳性百分数分为4级：I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别为0、0～25％ 、26～75％ 、76～100％，其中“I”为阴性，“Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ”为阳性。

　　1.4  免疫组化染色及评估

　　应用免疫组化SP法。以正常肺粘膜表达的强度及方式为阳性对照。E-cad免疫染色阳性物质呈棕黄色，主要定位于细胞膜，即连续的细胞膜染色。

　　1.5  统计学处理

　　数据以（x±s）表示，采用SPSS12.0统计软件进行单因素方差分析。

　　2  结果

　　2.1  E-cad在小鼠lewis肺癌细胞各组中的表达

　　E-cad阳性细胞在各组中数量及表达强弱不一，CTX组阳性细胞数量最多。阳性信号表达较强，呈深棕黄色，且阳性信号多在细胞膜中。丹参组E-cad阳性细胞略少，阳性细胞的信号表达较弱，呈浅棕色，主要分布在胞膜，偶见胞浆。生理盐水组E-cad阳性细胞数量明显减少，且阳性细胞的信号表达也比较弱，主要分布在胞核和胞浆，并且肿瘤组织有较多的片状坏死(见图1)。

　　2.2  丹参对小鼠lewis肺癌细胞E-cad的表达的影响

　　丹参组肿瘤细胞E-cad 标记指数高于生理盐水组(P<0.01)，略低于CTX对照组，但差异无显著性(P>0.05)。丹参组的瘤重和瘤大小明显小于盐水对照组的瘤重和瘤大小（P<0.01），生长抑制瘤率分别为45.30%。丹参组瘤体大小明显小于盐水对照组（P<0.01）（见表1）。表1  丹参注射液对小鼠lewis肺癌细胞E-cad的表达的影响(略)

　　3  讨论

    人类型E-cad基因定位于16q22.1，E-cad与其相关蛋白链接素(Catenin)结合形成复合体介导同种细胞的联结, 是介导细胞间及细胞与细胞外基质粘附的主要分子, 功能维持上皮细胞间连接, 控制细胞极性、分化及组织形态发生，在肿瘤浸润转移中发挥重要作用。E-cad的低表达导致癌细胞间的粘附力减弱,易使癌细胞弥漫生长,不能形成腺管,容易脱落并向远处转移。

    中医药的抗癌机理与现代医学化疗药物的抗癌作用有相同之处，均具有影响细胞周期中的G1／S调控点，使肿瘤细胞停滞于 G0、G1期，而不进入S期进行DNA复制，从而起到抑制肿瘤细胞生长和抗转移的作用。本实验丹参组的瘤重及瘤体大小明显小于盐水对照组且有较好的量效关系，丹参组肿瘤细胞E-cad 标记指数高于生理盐水组(P<0.01)，略低于CTX组，差异无显著性(P>0.05)，说明丹参能有效抑制肿瘤细胞E-cad的异常表达，使肿瘤细胞停滞于G0、G1期起到抗肿瘤的作用。

【参考文献】  　　［1］郭海平，吴乃峰.复方丹参临床药理研究新进展［J］.解放军药学学报,2000,16(2):105-106

［2］袁淑兰，王修杰，魏于全.丹参酮抗肿瘤作用及其机制的研究［J］.癌症,2003,22(12)：1 363-1 366