Caveolin1、PCNA在胶质瘤中的表达及意义

　　作者：邸辉,田春辉,王冀伟,李志红,史彦芳　　作者单位：河北省保定市，河北大学附属医院神经外科

　　【摘要】目的 研究Caveolin1、增殖细胞核抗原(PCNA)在胶质瘤的表达，探讨其与肿瘤恶性程度及预后的关系。方法 用SP免疫组化技术检测60例胶质瘤标本及8例正常脑组织中Caveolin1、PCNA的表达，分析其在胶质瘤中表达的关系及与肿瘤病理级别之间的关系。结果 Caveolin1随胶质瘤病理级别的增高阳性表达率下降，在正常脑组织、低级别和高级别胶质瘤各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。PCNA随着病理级别的增高阳性表达率升高，在正常脑组织、低级别和高级别胶质瘤各组间比较差异亦有统计学意义(P<0.05)，PCNA与Caveolin1在胶质细胞瘤中的表达呈负相关性(r=-0.604，P<0.05)。结论 Caveolin1的表达对胶质瘤细胞增殖起抑制作用，而PCNA的表达与肿瘤组织分化、恶性程度及预后相关。Caveolin1与PCNA的表达存在负相关性，Caveolin1是影响胶质瘤发生发展的重要因素。

　　【关键词】 胶质瘤 免疫组化 Caveolin1 PCNA

　　Expression and significance of caveolin1 and PCNA in gliomas

　　DI Hui，TIAN Chunhui，WANG Jiwei，et al.

　　Department of Neurosurgery，Affiliated Hospital of Hebei Univercity，Hebei，Baoding 071000，China

　　【Abstract】 Objective To investigate the expression and significance of caveolin1 and PCNA in gliomas and to explore the correlation between the two factors and the malignant degree of tumor as well as patients’prognosis.Methods The SP immunohistochemistry technique was used to detect the expression of caveolin1 and PCNA in 60 cases of gliomas tissues and 8 cases of normal brain tissues(control group).Results The expression of caveolin1 was decreased with the increase of pathological grade of gliomas.There were significant differences in the expression of caveolin1among normal brain tissue，lowgrade gliomas and highgrade gliomas (P<0.05).The expression of PCNA was increased with the increase of pathological grade of gliomas.There were significant differences in the expression of PCNA among normal brain tissue，lowgrade gliomas and highgrade gliomas (P<0.05).The expression of PCNA was negatively related with the expression of caveolin1.Conclusion The expression of caveolin1 has inhibition effect on the cell proliferation of gliomas，while the expression of PCNA is related with tumor histodifferentiation，malignant grade and patients' prognosis，and Caveolin1 is an important factor to affect the pathogenesis and development of gliomas.

　　【Key words】gliomas;immunohistochemical;caveolin1;PCNA

　　胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，目前对胶质瘤的病因尚不完全清楚，依然不能从根本上将其治愈[1]。肿瘤的发生发展与细胞增殖、分化、迁移、凋亡及血管生成的信号通路异常有关。Caveolin1是定位于细胞质膜微囊部位的结构蛋白，它参与了各种信号分子和信号通路的调控。已证实在多种不同组织来源的肿瘤细胞中，Caveolin1的表达水平明显下降乃至消失，发挥了抑癌基因样作用。增殖细胞核抗原(PCNA)是一种表明细胞增殖的可靠指标。本实验采用免疫组化技术，对胶质瘤中Caveolin1及PCNA的表达进行研究，探讨它们之间的相互关系，分析其与胶质瘤的发生发展及生物学行为的意义。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　病例组：选取我科2005年1月至2008年8月手术切除的胶质瘤标本60例，其中男44例，女36例;年龄7～72岁，平均年龄46.5岁。参照Kernohan胶质瘤分级法分为四级：Ⅰ级10例，Ⅱ级15例，Ⅲ级20例，Ⅳ级15例。其中将Ⅰ、Ⅱ级25例称为低级别组，将Ⅲ、Ⅳ级35例称为高级别组。对照组：另取脑外伤行内减压的正常脑组织8例作为对照，其中男4例，女4例;年龄16～67岁，平均年龄48.8岁。

　　1.2 方法

　　(1)标本准备：蜡块连续切片6张，片厚4 μm。1张做HE染色确定诊断，4张免疫组织化学染色，1张备用。(2)免疫组织化学染色：采用Elivision二步免疫组化法。(3)实验对照：正常脑组织与肿瘤组织同样处理作为正常组织对照;用已知Caveolin1表达阳性的膀胱癌存档蜡块作为阳性对照。每次用PBS代替一抗作为阴性对照。

　　1.3 结果观察与判断标准

　　以细胞膜和(或)细胞浆表达棕黄色颗粒为Caveolin1表达阳性。细胞核染成棕黄色为PCNA蛋白染色阳性表现。每一张切片选取连续的10～20个高倍视野(×400)，每个视野计数100个细胞，分别计算它们的阳性率。平均阳性细胞数占总计数细胞的10%以上者为阳性。

　　1.4 统计学分析

　　应用 SPSS 16.0统计软件，计数资料采用χ2检验，用Spearman 等级相关检验来分析Caveolin1、PCNA 在胶质瘤中表达的相关性，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 PCNA在胶质细胞瘤中的表达

　　PCNA在正常脑组织中未见阳性表达，在低级别、高级别组阳性表达分别为9例、33例，其阳性表达率分别为36.00%、94.29%，差异有统计学意义(χ2=46.12，P<0.05)。

　　2.2 Caveolin1蛋白在胶质细胞瘤中的表达

　　Caveolin1在正常脑组织中未见阳性表达，在低级别、高级别组阳性表达分别为16例、13例，其阳性表达率分别为64.00%、37.14%。差异均统计学意义(χ2=16.52，P<0.05)。

　　2.3 相关性分析

　　PCNA与Caveolin1的表达相关性，经Spearman 等级相关检验分析显示两者在胶质细胞瘤中的表达呈负相关性(r=-0.604，P<0.05)。

　　3 讨论

　　胶质瘤在国内发病率占颅内肿瘤的首位，约占颅内肿瘤的40%～50%[2，3]。目前临床上采取以手术为主的综合治疗，但由于其浸润性生长和恶性发展的特点，术后易复发，治疗效果不理想。目前胶质瘤发生的确切病因尚不完全清楚，所以，研究胶质瘤的发病机制并寻求早期诊断及防治措施一直是人们广泛关注的焦点。

　　Caveolin1是一种细胞质膜微囊表面标记蛋白，它不仅在组织细胞的信号传导、蛋白质的转运过程中发挥重要作用，而且在肿瘤的发生发展中具有重要的作用。近年来许多研究发现，Caveolin1在多种肿瘤细胞中表达下降。Wiechen等[4]用免疫组化法检测卵巢癌病例，发现正常的卵巢上皮和良性病变上皮表达Caveolin1，而卵巢癌中表达减少。Hayashi等[5]对92例原发性乳腺癌样本进行研究，结果16%的病例检测到了Caveolin1基因132代码的突变(P132L)，提示Caveolin1的突变可能在乳腺癌的发生中起着重要作用。在Caveolin1基因敲除的小鼠中，其肿瘤生长和转移均较正常小鼠快，故认为Cavrolin1是抑癌基因[6]。

　　关于Caveolin1在胶质瘤中表达的研究，目前尚不多见，笔者在国内还未见这方面的报道。最近国外有学者Cassoni等[7]通过免疫组化方法，研究了64例不同级别的胶质瘤中Caveolin1的表达。结果显示所有星形胶质细胞瘤均阳性表达，Caveolin1非常典型的定位于细胞膜，表达强度与肿瘤的级别密切相关。本研究用免疫组化的方法观察了Caveolin1在胶质瘤中的表达情况，结果表明Caveolin1在胶质瘤中随着病理级别的增高表达下降。本研究的结果与一些学者认为Caveolin1是一抑癌基因的研究结果相同[4-6]，与国外学者研究Caveolin1在胶质瘤中表达的结果基本一致[7]。提示Caveolin1蛋白的表达对胶质瘤细胞增殖起抑制作用，Caveolin1的失表达对判断胶质瘤的恶性行为有一定价值，亦可作为胶质细胞瘤预后评价的参考指标之一;同时也说明了Caveolin1蛋白在胶质细胞瘤中表现为一个抑癌基因。

　　PCNA作为DNA聚合酶δ的辅助蛋白，在DNA复制合成、细胞增殖过程中是一种必需的物质。目前大多数学者认为PCNA可以代表肿瘤细胞增殖能力，在一定程度上反映肿瘤恶性程度，对于分析、判断胶质瘤的预后有重要意义。Camby等[8]利用抗PCNA抗体获得的细胞增殖水平显示星形细胞瘤和间变型星形细胞瘤之间存在非常显著的差异;Kayaselcuk等[9]在对中枢神经系统肿瘤的研究中发现，PCNA指数与组织学分级有显著的统计学意义，认为PCNA可用于评价肿瘤的分级、恶性程度以及估计肿瘤复发的可能性。本组研究中，PCNA随着病理级别的增高阳性表达率升高。这表明PCNA的表达强度与肿瘤的分化程度有关，恶性程度高的胶质瘤，其肿瘤细胞增殖活性强。本研究证实PCNA可以作为病理诊断的补充，能够客观地反映胶质瘤的恶性增殖分数和生长速度，预测术后复发的危险性，这与国内、外的类似研究结果一致[8，9]。

　　作为一种抑癌基因Caveolin1的异常表达必将引起细胞增殖活性的改变。与此推断相一致，本组资料的分析结果表明，在高级别的胶质瘤细胞中Caveolin1表达缺失，而PCNA表达阳性率却明显升高;在正常脑组织及低级别胶质瘤细胞中，PCNA表达阳性率明显降低。本实验所得结果提示Caveolin1的表达对胶质瘤细胞的生长和增殖具有抑制作用，表明Caveolin1是胶质瘤细胞发生发展过程中的一种抑制因子。相信随着研究的进一步深入，PCNA和Caveolin1均有可能作为临床判断胶质细胞瘤恶性程度及预测患者预后的指标，通过对它们的深入研究，有可能为肿瘤的放化疗及基因治疗提供有价值的理论和依据。

　　【参考文献】

　　1 米中波，焦保华.重组人5型腺病毒术中瘤腔内注射治疗胶质瘤的安全性研究.河北医药，2009，31：17601761.

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　　3 王雅杰，方芳，周亚莉，等.胶质瘤组织中蛋白表达谱的研究及疾病相关蛋白的筛选.中国全科医学，2008，11：14361438.

　　4 Wiechen K，Diatehenko L，Agoulnik A，et al.Caveolin1 is downregulatedin Human ovarian careinoma and acts as a eandidate tumor suppressor gene.Am J Pathol，2001，159：16351643.

　　5 Hayashi K，Matsuda S，Machida K，et al.Invasion activating Caveolin1 mutation in human scirrhous breast cancers.Cancer Res，2001，61：23612364.

　　6 Lin MI，Yu J，Murata T，et al.Caveolin1 deficientmice have increased tumor microvascular permeability，angiogenesis，and growth.Cancer Res，2007，67：2849 2856.

　　7 Cassoni P，Senetta R，Castellano I，et al.Caveolin1 expression is variably displayed in astroglialderived tumors and absent in oligodendrogliomas：concrete premises for a new reliable diagnostic marker in gliomas.Am J Surg Pathol，2007，31：760769.

　　8 Camby I，Lefranc F，Titeca G，et al.Differential expression of S100 calciumbinding proteins characterizes distinct clinical entities in both WHO grade II and IlI astrocytic tumours.Neuropathol Appl Neurobiol，2000，26：7690.

　　9 Kayaselcuk F，Zorludemir S，Gumurduhu D，et al.PCNA and Ki67 in central nervous system tumors：correlation with the histologicaltype and grade.J Neurooncol，2002，57：115121.