原花青素对2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑组织含水量和脑梗死面积的影响

　　作者：张艳，闵连秋 作者单位：1.锦州市中心医院神经内科，辽宁 锦州 121001;2.辽宁医学院附属第一医院神经内科，辽宁 锦州121001

　　【摘要】 目的 探讨原花青素(procyanidin，PC)对2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑组织含水量和脑梗死面积的影响。方法 将60只大鼠随机分为正常对照组、2型糖尿病单纯缺血组、PC低剂量组(50 mg/kg)、中剂量组(100 mg/kg)、高剂量组(200 mg/kg)。除正常对照组外，其余各组大鼠高脂高糖饲料喂养4周后，小剂量链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)一次性尾静脉注射，制备2型糖尿病大鼠模型。局灶性脑缺血24　h后处死大鼠，计算脑含水量和脑梗死面积。结果与正常对照组比较，2型糖尿病单纯缺血组大鼠脑组织的含水量和梗死面积明显增加(P<0.01);而PC各组均能不同程度的减少2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑组织含水量和减小梗死面积(P<0.05 vs P<0.01)，且以中、高剂量组更为明显，但PC中、高剂量组间差异无显著性(P>0.05)。结论 PC可减轻脑水肿程度、缩小局灶性脑缺血大鼠脑梗死面积，具有神经保护作用。

　　【关键词】 原花青素;2型糖尿病;脑缺血;脑组织含水量;脑梗死面积

　　Effect of Procyanidin on Content of Water inBrain and Area of Cerebral Infarction in Type 2 DiabetesMellitus Rats with Focal Cerebral IschemiaZHANG Yan1, MIN Lianqiu2(1. Department of Neurology, Jinzhou Center Hospital, Jinzhou 121001 China;2. Department of Neurology, the First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University, Jinzhou 121001 China)Abstract: Objective To investigate the effect of procyanidin (PC) on content of water in brain and area of cerebral infarction in type 2 diabetes mellitus SD with focal cerebral ischemia. Methods The SD 60 rats were divided randomly into normal group, model group, low-dose PC group, mid-dose PC group and high-dose PC group. Feeding fats with glucose forage for four weeks, STZ was injected lump-sum through vena caules, in order to make NIDDM rats. 24 hours after MCAO, content of water in brain and area of cerebral infarction was calculated. Results Comparing with normal group, the content of water in brain and area of cerebral infarction in model group was increased significantly (P<0.01), however, it decreased in different PC groups especially in mid-dose PC group and high-dose PC group (P﹤0.05vs P<0.01). But there was no significant differences between them (P>0.05). Conclusions Procyanidin can reduce the area of cerebral infarction in focal ischemic rats, reduce the level of cerebral edema and has an effectively neuroprotective effect.

　　Key words:procyanidin; type 2diabetes; ischemic; content of water in brain; area of cerebral infarction

　　原花青素(procyanidin，PC)是从葡萄籽中提取出来的多酚化合物的总称，具有抗氧化、清除自由基、抑制肿瘤、抗诱变、抗炎等多种作用 [1-3]。本实验旨在观察PC对2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑组织含水量和脑梗死面积影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物与分组

　　健康雄性SD大鼠60只，体重200～240 g，由辽宁医学院实验动物中心提供，随机分为正常对照组12只，糖尿病组48只。糖尿病组大鼠按顺序编号平均分为4 组：2型糖尿病单纯缺血组、PC低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组各6 只。PC组在建立2型糖尿病模型后，于大脑中动脉闭塞(MCAO)术前14天分别按50、100、200 mg/kg剂量灌胃PC混悬液。每天1 次，并于术前1 小时再次灌胃1 次。正常对照组和2型糖尿病单纯缺血组，于术前14 天灌胃等量生理盐水。

　　1.2 药品及试剂

　　胆固醇、胆酸钠由郑州利伟生物实业有限公司提供;PC粉剂由天津尖峰天然产物研究开发有限公司提供，批号是(6050804);链脲佐菌素(STZ)由厦门市星隆达化学试剂有限公司提供。

　　1.3 2型糖尿病大鼠局灶性脑缺血模型的制作[4]

　　SD大鼠常规饲料适应性饲养1 周，然后喂饲高脂高糖饲料4周，诱导高胰岛素血症和胰岛素抵抗后，按25 mg/kg体重的剂量一次性尾静脉注射STZ溶液。72 h后取尾血测血糖，超过16.7 mmol/L为2型糖尿病大鼠，然后用线栓法制成局灶性脑缺血(middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型。

　　1.4 脑组织含水量的测定

　　造模后24 h取实验组及正常对照组大鼠各6 只，快速取全脑，取右侧脑前1/4部分称湿重及玻片重，置120　℃烤箱内烘干4 h至恒重，按以下公式计算脑组织含水量：脑组织含水量(%)=(湿重-干重)/湿重×100%。

　　1.5 脑梗死面积的测定

　　造模后24 h取实验组及正常对照组大鼠各6 只，断头取脑。将脑迅速置于-80　℃冰箱中冷冻，2 h后取出，切成1 mm厚的脑片，置于质量浓度为20 g/LTC中染色，37 ℃孵育30 分钟。选择每一切片的尾侧面用 CIAS-1000高清晰度图像处理系统进行图像分析，测量每片的梗死面积，并计算梗死区占整个冠面的百分比。

　　1.6 统计学分析

　　数据采用±s表示，采用SPSS11.5统计软件进行统计分析。多组间显著性检验采用单因素方差分析及q检验，两组间差异采用q检验。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 PC对大鼠脑组织含水量的影响

　　与正常对照组比较2型糖尿病单纯缺血组大鼠脑组织的含水量明显增加(P<0.01);而PC各组均能不同程度的减少2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑组织含水量(P<0.05 vs P<0.01)，且以中、高剂量组更为明显，但PC中、高剂量组间差异无显著性(P>0.05)，见表1。表1 PC对大鼠脑组织含水量的影响注：※※与正常对照组比较，P﹤0.01;与 2型糖尿病单纯缺血组比较，▲P﹤0.05，▲▲P﹤0.01

　　2.2 PC对大鼠脑梗死面积的影响

　　与正常对照组比较2型糖尿病单纯缺血组大鼠的脑梗死面积明显增加(P<0.01);而PC各组均能不同程度的减小2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑梗死面积(P<0.05 vs P<0.01)，且以中、高剂量组更为明显，但PC中、高剂量组间差异无显著性(P>0.05)，见表2。表2 PC对大鼠脑梗死面积的影响注：※※与正常对照组比较，P﹤0.01;与2型糖尿病单纯缺血组比较，▲P﹤0.05，▲▲P﹤0.01

　　3 讨 论

　　脑组织对缺血、缺氧损害非常敏感。大脑中动脉闭塞后，脑组织高度肿胀，神经细胞皱缩、深染及炎细胞浸润、胶质细胞破坏，神经轴突和髓鞘崩解，小血管坏死，周围有红细胞渗出及组织间液的积聚，最终导致神经细胞死亡[5]。

　　研究表明，脑组织含水量的变化能反映血脑屏障受损及脑水肿的程度，脑梗死的面积能直接反映脑损伤的程度[6]。高血糖加重自由基损伤和脑水肿，糖尿病合并脑梗死的发生与高血糖时血-脑屏障的改变，血管内皮功能紊乱等因素相关[7]。

　　本实验结果显示,2型糖尿病单纯缺血组大鼠脑组织的含水量和梗死面积明显增加(P<0.01);而PC各剂量组均能不同程度的减少2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑组织含水量和减小其梗死面积(P<0.05 vs P<0.01)，且以中、高剂量组更为明显。表明PC可以在一定程度上减轻2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑组织的脑水肿程度和减小脑梗死面积，且随着剂量增加而作用增强，提示PC具有神经保护作用。

　　【参考文献】

　　1] 增繁典,谢笔钩,张晓辉,等.原花青素的药理研究进展[J].中国药理学通报,2002,18(1):9-12.

　　[2] Ye X，KIoln RL，Liu W，et al. The cytotoxic effects of a novel IH636 grape seed proanthocyanidin extract on cultured human cancer cells[J].Mol Cell Biochem,1999，196(1-2):99-108.

　　[3] 汪晨净,高明堂,时小燕,等.原花青素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国临床药理学与治疗学,2003,8(2):173-175.

　　[4] 齐丽丽，闵连秋.原花青素对2型糖尿病大鼠局灶性脑缺血模型的保护作用[J].辽宁医学院学报,2007,28(6):4-7.

　　[5] 吴江.神经病学[M].北京:人民卫生出版社,2006:159.

　　[6] 陆景红,任明山,李光武，等.葡萄籽原花青素对脑缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国临床康复，2005，9(45):99-101.

　　[7] 马云霞,刘波.糖尿病合并脑梗死46例分析[J].宁夏医学院学报,2000,22(3):182-184.