第卵巢切除大鼠脑内雌激素受体α表达的变化

　　作者：金丽英 郭宗君 崔红波 兰克涛 杜芳 (1 青岛大学医学院脑血管病研究所，山东 青岛 266003; 2 兖州矿务局医院神经内科; 3 青岛市第三人民医院急诊内科)

　　[摘要] 目的 观察卵巢切除大鼠脑内不同部位雌激素受体α(ERα)表达变化。方法 根用Singh等方法制作大鼠卵巢切除模型(模型组)，免疫组织化学染色观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区等部位ERα阳性细胞表达变化，并与手术对照组(对照组，不切除卵巢)比较。结果 对照组大脑各观察区有大量的ERα表达。与对照组比较，模型组大脑海马CA1区、大脑皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区ERα阳性细胞数显著减少(t=2.68～5.68,P<0.01)。结论 卵巢切除可致大鼠脑内多部位ERα表达减少，这种病理变化可能与轻度认知障碍的发生有关。

　　[关键词] 受体，雌激素;卵巢切除术;认知障碍;大鼠，Wistar

　　OBSERVATION OF ESTROGEN RECEPTOR α IN DIFFERENT CEREBRAL REGIONS IN OVARIECTOMIZED RATSJIN LIYING， GUO ZONGJUN， CUI HONGBO, et al (Institute of Cerebrovascular Diseases, Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China)

　　[ABSTRACT]ObjectiveTo observe the changes of estrogen receptor α (ERα) in different cerebral regions in ovariectomized rats. MethodsAdult healthy female Wistar rats were randomly divided into two groups: model group(OVX group) and control group. The expression of ERα masculine cells in the hippocammpi CA1, cortex, amygdala, Meynert of the basal forebrain were compared between the two groups.ResultsThe expression of ERα masculine cells was observed in every section of the brain in control group, while in model group，and the ERα masculine cells in the cortex and Meynert nucleus were distinctly decreased compared with the control group (t=2.68-5.68, P<0.01). There was no difference in the hippocampi CA1 and amygdala between the two groups.ConclusionThe expression of ERα masculine cells was decreased in the cortex and Meynert nucleus of the brain of ovariectomized rats. The change may be related to the neurodegeneration of acetylcholine nerve cells from Meynert nucleus to the cortex.

　　[KEY WORDS]receptors, estrogen; ovariectomy; cognition disorders; rats, Wistar

　　雌激素由芳香化酶催化雄激素转化而来，影响其靶组织的生长、分化和功能发挥。雌激素对神经系统的功能具有一定的保护作用[1]。研究表明，女性体内的雌激素缺乏与轻度认知障碍(MCI)发病有关[2]。大鼠卵巢切除(OVX)是一种较好的雌激素缺乏模型[3]，应用这种模型观察大鼠脑内不同部位的雌激素受体α(ERα)表达的变化及病理改变，可以探讨雌激素缺乏是否影响ERα的改变，从而了解其与MCI发生有关的病理机制。

　　1 材料和方法

　　1.1 实验动物与分组

　　成年健康雌性Wistar大鼠14只，由山东大学实验动物中心提供，5月龄，体质量210～250 g。常规饲养，环境温度22 ℃，随机分为模型组和对照组，每组大鼠7只。

　　1.2 模型制作

　　按SINGH等[3]与郭宗君等[4]的方法制备大鼠OVX模型。对照组大鼠除了不切除卵巢外,其余处理同模型组。术后大鼠观察1个月后处死。

　　1.3 大鼠脑组织病理观察100 g/L水合氯醛麻醉大鼠(300 mg/kg)，暴露心脏，先以生理盐水200 mL经升主动脉进行冲洗，再以40 g/L多聚甲醛200～300 mL灌注固定，持续30 min后取脑备用。取材范围为前囟后2.0～5.0 mm和前囟后2.0 mm至前囟前0.3 mm。脑组织常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋，连续冠状切片(片厚5 μm)，用于免疫组化观察。

　　1.4 免疫组化染色

　　切片经0.01 mol/L PBS溶液漂洗后加入ERα抗体(1∶200,Santa Cruz Biotechnology,USA), 37 ℃孵育1 h，PBS漂洗后入生物素化兔二抗(博士德公司)孵育2 h,PBS溶液漂洗后再入ABC复合物(博士德公司)孵育2 h。用硫酸镍铵加强的DAB法呈色,镜下控制染色时间,蒸馏水终止反应,干燥、脱水、透明、封片,光镜观察。PBS代替一抗作为阴性对照。

　　1.5 定量分析计数和统计学处理

　　参考PAXINOS等[5]编写的大鼠脑图谱，在Olympus光学显微镜下(400倍)观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区等部位ERα阳性细胞数,随机各取5个视野计数，计算平均单个视野中ERα阳性细胞的数量，用±s表示，采用SPSS 10.0统计软件进行t检验。

　　2 结 果

　　模型组大鼠皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、Meynert核区ERα阳性细胞数明显低于对照组，差异均有显著性(t=2.68～5.68,P<0.01)。见表1。

　　表1 两组大鼠不同脑区ERα表达(略)

　　3 讨 论

　　雌激素对人类及动物学习、记忆、认知功能具有重要的作用。雌激素可影响其靶组织的生长、分化和功能发挥[6,7]。手术切除卵巢的病人和自然绝经后妇女会出现学习和记忆能力的减退、情感低落、情绪波动、焦虑等变化，严重者可以出现认知功能障碍、人格改变和近期记忆丧失，甚至发展为阿尔茨海默病(AD)。说明雌激素与MCI、AD之间有密切关系[8]。雌激素受体属核受体，是配体活化、转录因子，有介导雌激素的功能。目前已知的2个雌激素受体亚型：ERα、ERβ，分别由2个不同的基因翻译而得[9]。雌激素的作用是通过与其受体ERα、ERβ的结合形成激素受体复合物，激活的受体与DNA上特异的激素反应元件互相作用，调节靶基因的表达，同时雌激素也可调节AP1增强子与转录因子Fos和Jun之间的相互作用而影响靶基因的表达。ERα对雌激素的亲合力高于ERβ，并可在不同的脑区被雌二醇差异性地上调或下调[10]。本文实验结果表明，大鼠脑内的皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、Meynert核区ERα表达显著减少，可能是切除卵巢大鼠体内雌激素缺乏，导致雌激素受体的下调或退用性萎缩和减少，引起功能异常。这与FUNATO等[11]报道的雌激素缺乏和雌激素受体的异常，可以影响APP代谢和神经细胞的多种功能活动，从而影响MCI及AD的发生和发展的观点一致。

　　[参考文献]

　　[1]DUKA T, TASKER R, MCGOWAN J F.The effects of 3week estrogen hormone replacement on cognition in elderly healthy females[J]. Psychopharmacology(Berl), 2000,149(2):129.

　　[2] BIEBER E J, COHEN D P. Esteogen and hormone replacement theray: is there a role in the preservation of cognitive function[J]? Int J Fertil Womens Med, 2001,46(4):206.

　　[3]SINGH M, MEYER E M, MILLARD W J, et al. Ovarian steroid deprivation results in a reversible learning impairment and compromised cholinergic function in female SD rats[J]. Brain Res,1994,644(2):305.

　　[4]郭宗君,杜芳,张延霞,等.穹隆海马伞切断及去势大鼠脑内β淀粉样肽140表达的变化[J].齐鲁医学杂志，2004，19(1):4.

　　[5]PAXINOS G, WATSON C. The rat brain in sterrotaxic coordinated[M]. 2nd. Australia: Academic Press Australia,1988:23.

　　[6]PAECH K, WEBB P, KUIPER G, et al. Differential ligand activation of estrogen receptors ERα and ERβ at AP1 sites[J]. Secience, 1997,277(5331):1508.

　　[7]BIEBER E J, COHEN D P. Esteogen and hormone replacement theray: is there a role in the preservation of cognitive function[J]? Int J Fertil Womens Med, 2001,46(4): 206.

　　[8]VINCENTL B, SMITH J D. Effect of estradiol on neuronal swedishmutated βamyloid precursor protein metabolism:reversal by astrocytic cells[J]. Biochem Biophysi Res Commun, 2000,271(1):82.

　　[9]ENMARK E, PELTOHUIKKO M, GRANDIEN K, et al. Human estrogen receptor βgene structure, chromosomal localization, and expression pattern[J]. J Clin Endocrinol Metab, 1997,82(12):4258.

　　[10]OSTERLUND M, KUIPER G G,GUSFASSON J A,et al. Differential distribution and regulation of estrogen receptor alpha and receptor beta mRNA with in the female rat brain[J]. Mol Brain Res, 1998,54(1):175.

　　[11]FUNATO H, YOSHIMURA M, KUSUI K, et al. Quantition of amyloid βprotein (Aβ) in the cortex during aging ang in Alzheimer disease[J]. Am J Pathol, 1998,152(6):1633.