随机对照研究大鼠皮下不同分离方式致炎症介质水平的变化

随着腔镜及内镜技术的发展，皮下人造腔隙的临床应用愈渐广泛。目前，部分研究发现，以内镜甲状腺手术为代表的游离颈胸部皮下间隙的操作具有一定的微创效果「1-2];然而，相关的随机对照研究却未曾有报道，由此，皮下间隙内的操作仍被习惯性地认为仅是一种美容手术，其微创价值倍受质疑二本实验旨在通过随机对照大鼠皮肤及皮下不同受创情况下血清IL-6和中性粒细胞弹性蛋白酶(1Veutrophil elas-taee,l}E)水平的变化情况，试图揭示与其他皮下组织分离操作方式比较，结合皮肤小切口的浅筋膜下的分离具有相对的微创价值。

1资料与方法

1.1动物分组32只雄性SD大鼠，纯系，清洁级，体重324.9 427.7 。随机(以PASW Statistics 18.0软件随机数生成器产生随机表)分为4组，每组8只。实验组1:常规切口剑突与肋弓下缘平面两侧各0.5 cm横切口)+浅筋膜下分离(向头侧游离4.5 c耐皮下面积)，示意图见封三，图1;实验组2:常规切口(同实验组1)+真皮下分离(向头侧游离，游离面积同实验组1);实验组3:常规切U(同实验组1)+浅筋膜下扩一大分离(在实验组1游离的基础卜，向尾侧游离对称的皮下面积，共9 cm};实验组4:扩大切[C=1(剑突平面的3 cm横切口)+浅筋膜下分离(同实验组1)

1.2手术方法手术均由同一组人员配合完成。大鼠术前均行胸腹部脱毛、消毒，以10%水合氯醛0.003 mL/g腹腔注射麻醉。标记完皮下分离面积后，切开皮肤至真皮全层，略微游离真皮后即可见散布细小}(II_管的淡红色菲薄的浅筋膜组织(见封三，图2)。实验组1中，剪开浅筋膜后以圆头细分离棒沿浅筋膜下方、深筋膜(即大鼠胸腹肌固有筋膜)表面彻底游离皮下。实验组2中，以眼科剪及细分离棒行真皮下分离，注意保护深ICI浅筋膜完整性游离皮下后，若有渗血行压迫止血，术毕以医用粘合胶粘合切日(见封三，图2)0 

1.3标本采集、处理和检测分别于术前(腹腔注射麻醉后)、术后(指切口粘合后)2h,12h,24h及48 h行乙醚麻醉后采血，采用眼眶后静脉丛采血法，每次采血量为0.5一1 mL,共采血I60次标本4℃过夜，4 000 r/min离心5 min后取上清，-80℃待测。血清IL-6和VE的检测均采用双抗体夹心一步法酶联免疫吸附试验(ELISA)(美国Rapidbio公司大鼠试剂盒)试剂板所设空白孔、标准品孔及待测品孔分别加人样品稀释液、标准品及血清标木各50 p,L，加人辣根过氧化物酶标记的检测抗体100 p,L(空白孔不加)，37 0C孵育60 min;洗板5次后加底物四甲基联苯胺显色，37 0C避光孵育15 min，加入终止液后15 min内，酶标仪在450 nm波长下测量各孔的吸光度值，根据标准曲线的直线回归方程计算出大鼠各时相血清IL-6和NE浓度。

1.4统计学处理采用PASW Statistics 18.0软件进行统11一分析。计量资料以(均数士标准差)表示各实验组间及组内比较采用方差分析SNK检验或LSD检验，均为双侧检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

实验组1-4组大鼠体重分别为(366.7士24.9)g,(383.0士29.6)8,(381.6士25.2)g、(364.0士20.7)g,组间比较差异无统if一学意义(方差分析SNK检验，P-0.450)。所有实验大鼠均存活，至术后72 h无切日及胸腹壁皮下感染表现。各实验组大鼠术后血清IL-6及NE增量水平变化见图3,图4。各实验组在术后12 h血清IL-6和NE增量水平升高明显，与其他采血时相比较差异均有统计学意义(P=0.000)o

术后24 h,48 h增量水平下降，但较术后2h仍为增高(均为P=0.000)，术后24 h与48 h值比较，差异并无统计学意义(分别为P=0.074,P=0.096)o IL-6及NE增量水平的组间比较，实验组1和3差异无统计学意义(分别为P=0.074,P-0.096);同样实验组2和4差异也无统计学意义(分别为P=0.747,P=0.897);实验组1,3与2,4的IL-6增量值分别为(42.4士20.8)p群mL,(46.3 1 22.9)P扩mL,(54.0士25.9)p郭mL,(53.3士28.1)p郭mL及NE增量值分别为(49.2士27.7)n扩mL,(54.9士31.6)n扩mL,(65.6士30.1)ng/mL,(65.2131.8)ng/mL，交叉比较差异均有统计学意义(P<0.01)。3讨论3.1皮下人造腔隙、膜样层与筋膜裂隙自从1996年Gagner4Gagner-完成首例甲状旁腺次全切除术以来，皮下人造腔隙的临床应用逐渐被推广，但最为普及的仍是内镜甲状腺及甲状旁腺手术，尤以胸指标，IL-6及NE具有相对于C反应蛋白、11,-1,1L-10,TNI;'等更好的监测价值，主要表现为两者高峰期出现较早，交叉反应较少。

本实验显示，IT_-6及NE高峰期均在术后12h出现，且两者在不同受创的情况下血清水平的变化非常相似。

4结论

结合皮肤小切口的大鼠皮下浅筋膜下的分离操作具有相对的微创性。但是，本实验缺乏大鼠皮下组织各层的解剖基础比较以提供浅筋膜下操作具有微创性的组织学证据，相关的实验尚在进一步研究中。

参考文献

[1]Jiang ZG,Zhang W,Jiang DZ.Clinical benefits of scarless endoscopic thyroidectomy:an expert's experience[J].World Journal of Surgery,2011,(03):553-557.

[2]Zhang W,Jiang ZG,Jiang DZ.The minimally invasive effect of breast approach endoscopic thyroidectomy:an expert's experience[J].CLINICAL&DEVELOPMENTAL IMMUNOLOGY,2010.459143.

[3]van Herck H,Baumans V,Brandt CJ.Orbital sinus blood sampling in rats as performed by different animal technicians:the influence of technique and expertise[J].Laboratory Animals,1998,(04):377-386.doi:10.1258/002367798780599794.

[4]Gagner M.Endoscopic subtotal parathyroidectomy in patients with primary hyperparathyroidism[J].British Journal of Surgery,1996,(06):875.

[5]Dionigi G,Boni L,Rovera F.Wound morbidity in mini-invasive thyroidectomy[J].Surgical Endoscopy,2011,(01):62-67.

[6]Rocco B,Celestino PL,Francesco R.Arterial PCO2 and cardiovascular function during endoscopic neck surgery with carbon dioxide insufflation[J].Archives of Surgery,2001,(07):822-827.

[7]袁岚,宋民光,傅国强.皮下CO2充气对腔镜下甲状腺手术动脉血气的影响[J].中国微创外科杂志,2005,(01):44-45.doi:10.3969/j.issn.1009-6604.2005.01.018.

[8]吴庆华,仇明.浅筋膜相关结构的再认识[J].国际外科学杂志,2012,(01):53-56.doi:10.3760/cma.j.issn.1673-4203.2012.01.017.

[9]Wendell-Smith CP.Fascia:an illustrative problem in international terminology[J].Surgical and Radiologic Anatomy,1997,(05):273-277.

[10]Abu-Hijleh MF,Roshier AL,A1-Shboul Q.The membranous layer of superficial fascia:evidence for its widespread distribution in the body[J].Surgical and Radiologic Anatomy,2006,(06):606-619.doi:10.1007/s00276-006-0142-8.