骨桥蛋白在乳头状甲状腺癌中的表达及其临床意义

　　作者：金冲,张启瑜　　作者单位：温州医学院第一临床学院外科

　　【摘要】目的 探讨骨桥蛋白在乳头状甲状腺癌中的表达及意义，分析其与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化SP法检测70例乳头状甲状腺癌和20例结节性甲状腺肿中骨桥蛋白的表达。结果 骨桥蛋白在乳头状甲状腺癌与结节性甲状腺肿中的阳性表达率分别为72.86%、10.00%，两者阳性表达率有显著性差异(P<0.05)，有淋巴结转移与无淋巴结转移的乳头状甲状腺癌中骨桥蛋白阳性表达率分别为86.11%、58.82%，两者有显著性差异(P<0.05)结论 骨桥蛋白在乳头状甲状腺癌中为过表达，且与淋巴结转移密切相关。

　　　　【Abstract】 Objective This study is designed to clarify the expression of osteopontin (OPN)in papillary thyroid carcinoma (PTC)and its significance. The correlation between the expression of OPN and clinic pathologic feature of PTC is analyzed. Methods The expression of OPN in 70 specimens of PTC and 20 specimens of nodular goiter were investigated by S-P immunohisochemistry. Result Positive rate of OPN was significantly higher in PTC than nodular goiter (72.86% vs.10%, P<0.05); The rate of OPN was significantly higher in PTC with lymph node metastasis than in PTC without lymph node metastasis (86.11% vs.58.82%, P<0.05). Conclusion OPN is over expressed in PTC closely relates with lymph node metastasis.

　　【Key words】 Osteopontin(OPN) Papillary thyroid carcinoma Immunohisochemistry

　　骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种黏附蛋白,亦是一种细胞因子,是一个有多种功能的分泌型钙结合磷酸化糖蛋白,相对分子质量为41500。在不同的组织细胞中均有发现,如肾、内耳、蜕膜、胎盘、平滑肌、被激活的T细胞、巨噬细胞等。近年来报道OPN与各种肿瘤的发生、发展有密切关系，其在各种肿瘤中的相关作用已广泛研究。而在乳头状甲状腺癌中的表达国内尚未见报道。作者自2005年5月至2008年5月实验通过免疫组化SP法对乳头状甲状腺癌中OPN进行检测，以探讨OPN在乳头状甲状腺癌发生、发展的关系。

　　1 临床资料

　　1.1 一般资料 选择在台州市中心医院外科手术切除的乳头状甲状腺癌标本70例中男16例，女54例;年龄25～76岁，平均56.6岁;其中伴淋巴结转移36例、无淋巴结转移34例;另取同期20例结节性甲状腺肿作为对照组。

　　1.2 标本制作及免疫组化染色 标本均经4%甲醛溶液固定,常规石腊包埋,4μm厚连续切片，一张行苏木素-伊红染色,复核病理检查诊断，一张行免疫组化染色。鼠抗人OPN单克隆抗体(ZM-0174)购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用免疫组化SP法检测组织中OPN的表达。应用链霉素抗生物素蛋白一过氧化酶法(SP法)，DAB显色，苏木素复染。用已知OPN阳性乳腺癌切片作为阳性对照。

　　1.3 结果判定 OPN判断阳性反应标准根据：(1)按切片中显色癌细胞数比例计分：①0分无癌细胞显色;②1分显色癌细胞占癌细胞总数<25%;③2分显色细胞达到切片中癌细胞总数的25%～50%;④3分显色细胞超过切片中细胞总数的50%。(2)按切片中癌细胞显色强度计分：①0分细胞无显色;②1分呈浅黄色(弱染色);③2分呈棕黄色(中等染色);④3分呈棕褐色(强染色)。将这两方面评分相加,计总分(0～6分);每例的评分均

　　图1 OPN在PTC中的阳性表达(SP法×200)

　　为高倍镜(×400)下,观察5个视野,求得平均分。1+2>3分记为阳性，≤3分记为阴性。

　　1.4 统计学处理 应用SPSS13.0软件包对数据进行处理; 采用χ2检验;P<0.05有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 OPN的表达情况 70例乳头状甲状腺癌中51例表达OPN，OPN表达主要定位于乳头状甲状腺癌细胞胞浆中(见图1)。对照组20例结节性甲状腺肿中仅2例表达OPN，两组间有显著性差异(见表1)。

　　表1 乳头状甲状腺癌与结节性甲状腺肿中OPN表达的比较

　　nOPN阳性表达OPN阴性表达χ2P乳头状甲状腺癌组705119结节性甲状腺肿组20218χ2=25.39<0.05

　　2.2 OPN表达与乳头状甲状腺癌有无淋巴结转移的关系 在36例有淋巴结转移的乳头状甲状腺癌中31例OPN表达阳性，在34例无淋巴结转移的乳头状甲状腺癌中20例OPN表达阳性。发生淋巴结转移的乳头状甲状腺癌组织中OPN的阳性表达率明显高于未发生转移的乳头状甲状腺癌组织(P<0.05)(见表2)。

　　表2 乳头状甲状腺癌有无淋巴结转移标本中OPN表达的比较

　　nOPN阳性表达OPN阴性表达χ2P有淋巴结转移组36315无淋巴结转移组342014χ2=6.59<0.05

　　3 讨论

　　骨桥蛋白(OPN)是一种含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,简称RGD结构)残基的磷酸化酸性糖蛋白分子。在不同的组织细胞中均有发现,如肾、内耳、蜕膜、胎盘、平滑肌、被激活的T细胞、巨噬细胞等。OPN在骨的重建、动脉硬化、血管重塑、血管形成、炎症、免疫反应等过程中均发挥重要作用。Senger[1]于1979年首次报道OPN与肿瘤有密切关系，发现在尿、乳汁及已发生远处转移的肿瘤患者血液中均可检测到OPN。OPN与肿瘤的发生、发展及转移的关系逐渐受到广大研究人员的关注，在各种肿瘤当中得到了广泛研究。大量研究证实,OPN与多种肿瘤的发生、发展及转移密切相关[2～4]。Coppola等[5]采用免疫组织化学技术检测350例患者肿瘤组织和113例不同部位的正常组织,结果发现100%胃癌细胞OPN表达阳性,85%结肠癌、82%肾盂移行细胞癌、81%胰腺癌、72%肾细胞癌、71%肺癌和子宫内膜癌、70%食管癌、58%头颈部鳞状细胞癌和59%卵巢癌OPN表达阳性。并认为OPN的表达与肿瘤的分期有关。

　　国外Takano等[6]通过实验研究证实了OPN在甲状腺分化型与未分化型癌中均有表达。Tunio等[7]用Northern blot、原位杂交、免疫组化等技术检测,提出OPN在甲状腺癌组织表达，而不表达于正常甲状腺组织。本研究显示乳头状甲状腺癌组织中OPN阳性表达率明显高于结节性甲状腺肿组织中OPN阳性表达率，其差异有统计学意义(P<0.05),说明OPN在乳头状甲状腺癌中为过表达，OPN参与乳头状甲状腺癌的发生。提示可利用OPN在两者表达的差异性，有利于临床病理良恶性组织的鉴别诊断。

　　大量动物实验说明OPN与肿瘤的转移有密切关系, Aritia等[8]研究发现阻断肝细胞生长因子(HGF)诱导OPN在肿瘤细胞的表达后,肿瘤细胞在大鼠体内的生长受到抑制转移灶的形成数量也明显减少。本研究显示发生淋巴结转移的乳头状甲状腺癌组织中OPN的阳性表达率明显高于未发生转移的乳头状甲状腺癌组织(86.11%、58.82%，P<0.05), 与Guarino[9]等报道OPN在甲状腺癌组织中过量表达,而且OPN表达的程度与淋巴结转移情况、肿瘤大小均有密切关系。本研究结果与之相一致，说明OPN阳性表达的乳头状甲状腺癌更易发生淋巴结转移, OPN与乳头状甲状腺癌的转移有密切关系。

　　在肿瘤生长、侵袭及转移过程中,大量研究表明OPN与新生血管床形成的关系密切。Hirama等[10]发现,用OPN基因转染的C1300细胞能明显刺激静脉内皮细胞的迁移和新生血管的形成,通过CD31的免疫组化染色发现,利用OPN基因转染的肿瘤,其新生血管的生长速度明显地较对照组迅速。OPN影响乳头状甲状腺癌发生、发展、转移的机制有可能与肿瘤的新生血管形成有着密切关系，此有待进一步的研究。

　　本研究表明OPN参与了乳头状甲状腺癌的发生、发展。由于OPN广泛存在肿瘤患者的体液中,可作为一种无损伤性的肿瘤诊断及治疗标记，因此OPN可作为乳头状甲状腺癌病情预后判断的临床指标，并作为乳头状甲状腺癌基因治疗的靶点，值得进一步的深入研究。

　　【参考文献】

　　1 Senger DR, Wirth DF,Hynes RO. Transformation specific secreted phosophoproteins. Nature,1980,286(5773):619～621.

　　2 Ue T, Yokozaki H, Kitadai Y,et al. Co expression of osteopontin and CD44v9 in gastric cancer. Int J Cancer, 1998,79,127～132.

　　3 Jens Koopmann, Neal S, Fedar ko, et al. Evaluation of Osteopontin as Biomarker for Pancreatic Adenocarcinoma. Cancer Epidemiology Biomarkers & Prevention,2004,13:487～491.

　　4 Nemoto H, Rittling SR, Yoshitake H,et al. Osteopontin deficiency reduces experimental tumor cell metastasis to bone and soft tissues. J Bone Miner Res, 2001,16(4):652～659.

　　5 Coppola D,Szabo M,Bolware D，et al. Correlation of osteopontin expression and pathological stage across a wide variety of tumor histologies. Clin Cancer Res,2004,10(1):184～190.

　　6 Takano T,Haseqawa Y,Matsuzuka F,et al. Gene expression profiles in thyroid carcinomas.Br J Cancer,2000,83(11):1495～1502.

　　7 Tunio GM,Hirota S,Nomura S, et al. Possible relation of osteopontin to development of psammoma bodies in human papillary thyroid cancer. Arch Pathol Lab Med,1998,122(12):1087～1090.

　　8 Ariztia E V, Subbarao V, Solt D B, et al. Osteopontin contributes to hepatocyte growth factorinduced tumor growth and metastasis formation. Exp CellRes,2003,288(2):257～267.

　　9 Guarino V,Faviana P,Salvatore G,et al. Osteopontin is overexpressed in human papillary thyroid carcinomas and enhances thyroid carcinoma cell invasiveness. J Clin Endocrinol Metab,2005,90(9):5270～5278.

　　10 Hirama M,Takahashi F,Takahashi K,et al. Osteopontin over produce by tumor cells acts as a potent angiogenic factor contributing to tumor growth. Cancer Lett,2003,198:107～117.