P73、P53在胃癌组织中的表达及二者相关性

　　作者：狄茂军,杜涛,黄东,刘焱伟　　作者单位：郧阳医学院附属太和医院普外科,湖北 十堰 442000

　　【摘要】目的：检测P73、P53蛋白在胃组织的表达及二者相关性，探讨其临床意义。方法：免疫组织化学方法(SP法)检测40例胃癌患者胃组织标本中P73、P53蛋白的表达情况，结合临床病理资料进行分析，并与正常组织、慢性萎缩性胃炎和胃溃疡标本比较。结果：胃癌组织中P73、P53蛋白的阳性表达率分别为62.5 %(25/40)、55.0%(22/40)，高于正常胃粘膜组织、萎缩性胃炎、胃溃疡的表达(P<0.05);P73蛋白阳性表达率与胃癌组织类型、浸润深度及淋巴结转移无关(P>0.05); 而P53蛋白阳性表达率则与其有关(P<0.05);且二者成正相关(P<0.05)。结论：P73、P53作为抑癌基因有其组织特异性，与胃癌临床病理和生物学行为存在密切关系，二者可能共同参与胃癌的发生发展过程。

　　【关键词】 P73,P53,胃癌

　　Abstract: Objective To investigate the expression of protein P73 and P53 in gastric carcinoma and explore the correlation of P53 and P73. Methods Immunohistochemical staining was used to detect the expression of P73 and P53 protein in 40 cases of gastric carcinoma.Statistical analysis was performed according to clinicopathogical data.Results ⑴ The positive rates of expression of P73 and P53 protein in gastric carcinoma group were 62.5%(25/40)and 55.0%(22/40),respectively.Compared with normal gastric tissue group,chronic atrophic gastritis group and gastric ulcer group,the expression of P73 and P53 protein was significantly different in gastric carcinoma (P<0.05). ⑵The positive rate of P73 protein expression in gastric carcinoma group had no correlation with the histological type,depth of invasion of gastric mucosa and lymph node metastases(P>0.05),whereas P53 protein expression in gastric carcinoma group was correlated with clinicopathological status(P<0.05). ⑶P73 expression was positively correlated with P53 expression in gastric carcinoma group(P<0.05).Conclusion P73 has its tissue specificity,the expression of P73 and P53 is significantly related to pathological characteristics of gastric carcinoma and their biological behavior.Both P73 and P53 protein may participate in the development of gastric cancer.

　　Keywords: P73;P53;Gastric carcinoma

　　细胞周期失衡与细胞增殖失控被认为是肿瘤发病的重要机制。抑制基因P53的突变或缺失打破了癌基因/抑癌基因平衡而在人类肿瘤形成中起重要作用。新近发现P53家族新成员P73基因具有抑制细胞增殖和促进凋亡的作用，但也有研究认为P73的作用更象是一种癌基因[1-2]。对其在肿瘤中起抑癌作用还是致癌作用尚有争论。本研究应用免疫组织化学方法同时检测胃癌中P73、P53的蛋白表达，以探讨二者与胃癌临床病理特征的关系以及其相关性。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　2007年1月-2008年1月间活检和手术切除的40例胃组织标本，病理学检查证实为腺癌。患者术前未行化疗或放疗，其中男26例，女14例，年龄35～72岁，平均年龄52.5岁。选择慢性萎缩性胃炎19例、胃溃疡19例以及20例手术切除的正常胃组织作对照组。

　　1.2 方法

　　标本经10%福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，4 μm连续切片。采用免疫组化技术(SP法)，按试剂盒说明书的操作步骤进行，鼠抗人P73单克隆抗体、鼠抗人P53单克隆抗体均为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。

　　1.3 结果判断

　　P73蛋白以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性判断标准，P53蛋白以细胞核出现棕褐色颗粒状产物为阳性判断标准;染色强度分级:高倍镜下选择10个视野，阳性细胞少于肿瘤细胞的25%判为阴性(-)，大于肿瘤细胞的25%判为阳性(+)。

　　1.4 统计学分析

　　应用SPSS 11.5软件包进行分析，采用行×列χ2检验、Spearman相关检验。P<0.05认为差异有显著性。

　　2 结果

　　2.1 P73、P53蛋白在胃组织病变中的表达

　　P53蛋白位于细胞核内，P73蛋白除细胞核内存在外，少数胞浆亦有表达。胃癌组中P73、P53蛋白阳性表达率均高于正常胃粘膜组织、慢性萎缩性胃炎和胃溃疡组,差异有统计学意义(P<0.05),见表1。表1 P73、P53蛋白在胃粘膜不同病变中的表达 注：*P<0.05

　　2.2 P73、P53与胃癌临床病理关系

　　表2所示： P73蛋白阳性表达率在肿瘤分化程度、是否浸及浆膜层及是否存在淋巴结转移方面差异均无显著性(P>0.05)。但P53蛋白在低分化腺癌、病变浸及浆膜及有淋巴结转移组，其阳性表达率均高于高、中分化腺癌、病变未浸及浆膜及无淋巴结转移组(P<0.05)。

　　胃癌组中P73和P53的共表达率为67.5%(27/40),共同阳性表达率为32.5%(13/40),共同阴性表达率为35.0%(14/40),两者在胃癌中的表达呈正相关性(P<0.05)。表2 P73、P53蛋白的表达与胃癌临床病理特征的关系注：*P<0.05

　　3 讨论

　　肿瘤的发生是一个复杂的生物学过程，有多个癌基因和抑癌基因参与。P53基因是迄今发现的与胃癌关系最密切的肿瘤抑制基因。野生型P53基因(wildtype P53,wtP53)可参与细胞周期的调控,在维持细胞增长、抑制肿瘤增殖过程中起重要作用。但当其转变为突变型(mutanttype P53,mtP53) 时,则失去对细胞生长的抑制作用,促进细胞转化和过度增殖,导致肿瘤发生[2]。

　　P53蛋白在胃癌组织中有过度表达,并且与肿瘤的分化、浸润、转移及预后有一定的关系,但文献报道不一致。张宏等[3]发现P53蛋白的表达随胃癌分化程度的降低而增强,阳性率和相对表达量与胃癌的分化程度存在明显相关性。王涛等[4]认为P53基因突变出现在细胞恶变早期。本研究发现胃癌组中P53蛋白阳性表达率明显增加，均高于正常胃粘膜组织、慢性萎缩性胃炎和胃溃疡组，而且P53 的表达与组织学分型、浸润深度和淋巴结转移密切相关，提示P53表达在胃癌发生中起重要作用。

　　P73是P53家族新成员,位于1p36.2-1p36.3，该部位是人类多种肿瘤经常发生缺失的区域[5]。P73和P53在靶DNA结合方面亦具有高度的同源性，转录激活功能相似[6]。然而P73的不同异构体和P53在肿瘤中的共同表达和相互干预赋予了P73基因抑癌又致癌的双重特性,使得P73的许多特点又与P53不同。多种肿瘤组织中P73无论在蛋白和mRNA水平都有增高趋势，而正常组织中则很难检测到P73蛋白的存在;P73在人类肿瘤中极少发生突变[7];异构形式的P73能促进肿瘤生成，似乎起癌基因的作用;一些经典的病毒癌蛋白不与P73作用等。故P73由于它和P53相似的结构和功能以及特殊的定位被认为是一个新的候选抑癌基因。

　　但唐植忠[8]应用SABC免疫组化法检测人胃癌组织中P73蛋白表达状况,结果发现37%胃癌呈P73阳性表达,粘液腺癌和印戒细胞癌阳性率明显高于管状腺癌,提示P73阳性表达胃癌恶性度高。国外许多学者[9]已报道，在室管膜瘤细胞瘤、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、结直肠癌、食管癌和膀胱癌中P73水平比周围正常组织高。本文结果与Tannapfel[10]的研究一致，P73表达与分化程度高低、肿瘤细胞侵袭深浅和区域淋巴结是否转移无相关。说明P73对肿瘤组织具有较高的侵袭性，有可能作为一种判断肿瘤侵袭能力、预测预后的标志物。

　　P73和P53可能存在功能上的联系。近来多项研究提示p73或许不是抑癌基因，而是p53的一种模拟突变体，在细胞内可以模拟P53行使功能，从而使p53基因失效，造成细胞恶变。与P53类似，P73的DNA结合区能够结合特定的DNA序列，它和转录区配合，激活细胞周期调控的核心蛋白激酶p21基因的转录活性，从而抑制细胞生长[11]。此外,P73α和P73β均能连接其它与细胞周期和凋亡相关的p53靶基因如p21、Bax、MDM2、GADD45、1433σ、cyclin G、IGFBP 3和p53R2等,从而诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡[12]。本研究发现胃癌组中P73和P53的共表达率较高，且二者表达呈正相关关系，表明P73和P53在胃癌的发生发展中可能有协同作用，二者共表达可能有助于判断胃癌的恶性转化、临床病理过程及预后。

　　【参考文献】

　　[1]Urist M,Tanaka T,Poyurovsky MV,et al.p73 induction after DNA damage is regulated by checkpoint kinases Chk1 and Chk2[J].Genes Dev,2004,18(24):3 041-3 054.

　　[2]张丽华,侯振江.p53 基因在肺癌研究中的进展[J].临床肺科杂志，2006，11(1):59-60.

　　[3]张 宏,刘晓伟.P53蛋白及cyclinD蛋白在胃癌中的表达及临床意义[J].现代肿瘤医学,2006,14(4):429-431.

　　[4]王 涛,张 蓓,王占民.人体胃癌及癌前病变P53和PCNA的免疫组化研究[J].山东医科大学学报,1998,36(3):246-249.

　　[5]Lokshin M,Li Y,Gaiddon C,et al.p53 and p73 display common and distinct requirements for sequence specific binding to DNA[J].Nucleic Acids Res,2007,35(1):340-352.

　　[6]Yang A,Kaghad M,Caput D,et al.On the shoulders of giants:p63,p73 and the rise of p53[J].Trends Genet,2002,18(2):90-95.

　　[7]Ozaki T,Nakagawara A.p73:a sophisticated p53 family member in the cancer world[J].Cancer Sci,2005,96(11):729-737.

　　[8]唐植忠.胃癌组织中PTEN,P73蛋白表达及其意义[J].中国医师杂志,2002,4(5):478-480.

　　[9]Kang MJ,Park BJ,ByunDS,et al.Loss of imprinting and elevated expression of wildtype p73 in human gastric adenocarcinoma[J].Clin Cancer Res,2000,6(5):1 767-1 771.

　　[10]Tannapfel A,Schmelzer S,Benicke M,et al.Expression of the p53 homologues p63 and p73 multiple simultaneous gastric cancer[J].J Pathol,2001,195(2):163-170.

　　[11]Horta MC,Assis LA,Souza AF,et al.p53 and p21 WAF1/CIP1 overexpression at the invasive front of lower lip spuamous cell carcinoma[J].J Oral Pathol Med,2007,36(2):88-92.

　　[12]Melino G,Bernassola F,Ranalli M,et al.p73 Induces apoptosis via PUMA transactivation and Bax mitochondrial translocation[J].J Biol Chem,2004,279(9):8 076-8 083.