CK19和CK20在胃癌患者横结肠系膜前叶中的表达及临床意义

　　作者：王琰珉　何庆泗　孙国瑞　李盛梅　姜金波　　作者单位：1济南市传染病医院　(山东　济南　250021)山东大学齐鲁医院　2普外科　3病理科　(山东　济南　250012)

　　【摘要】目的：研究细胞角蛋白(cytokeratin, CK)19、CK20对胃癌腹膜微转移的检测价值，并探讨与微转移发生有关的因素。方法：2007年6月—2007年10月期间30例行手术治疗的胃癌患者，术中行横结肠系膜前叶活组织检查，免疫组织化学法检测CK19及CK20的表达，并行HE染色，以腹腔灌洗检查癌细胞作比较。结果：CK19及CK20在胃癌患者横结肠系膜前叶中的表达阳性率分别为43.3%和30.0%，明显高于腹腔灌洗液细胞学检查法(10.0%)，且阳性率因肿瘤侵出浆膜层而升高。结论：术中行活组织检查检测CK19、CK20，可用于判断胃癌患者有无腹膜微转移，从而指导临床分期，为判断预后及建立个体化的术后治疗方案提供更可靠的依据。

　　【关键词】 微转移•胃肿瘤•肠系膜•CK19•CK20

　　【ABSTRACT】 Objective: To investigate the role of CK19 and CK20 in determining the peritoneum micrometastasis in gastric carcinoma, and the factors about the occurrence of peritoneum micrometastasis. Methods: Thirty cases of gastric cancer were collected from June to October, 2007.The anterior lobe of transverse mesocolon biopsy was undertaken intraoperatively, CK19、CK20 im munohistochemical staining were performed on the tissue from biopsy, compared with HE staining and peritoneal lavage cytology(PLC). Results: The positive rates of CK19 and CK20 in the anterior lobe of transverse mesocolon were 43.3% and 30.0% respectively, which were obviously higher than PLC(10.0%). The positive rate was increased with the depth of tumor invasion. Conclusion: Detecting CK19 and CK20 can be used to conclude the occurrence of peritoneum micrometastasis, accordingly, to accurately determine the clinical staging of patients suffering from gastric carcinoma.

　　我国胃癌的发病率居各种恶性肿瘤的之首，年死亡率为25.53/10万[1]。许多患者即使行根治术后仍死于远处复发。进展期胃癌根治术后最常见的复发为腹膜转移，约占总复发的33%～50%，5年生存率在35%以下，而腹膜转移是导致患者死亡的主要原因之一[2]。对于胃癌腹膜微转移的检测，目前已有较多报道，但效果并不理想;其中腹腔冲洗液细胞学检查方法(peritoneal lavage cytology，PLC)是检查腹腔冲洗液中游离癌细胞的常见方法，但其灵敏性、准确率较低。本研究通过自横结肠系膜前叶处取活组织行病理学检查，用免疫组织化学的方法检测细胞角蛋白(cytokeratin, CK)中的CK19及CK20，研究其与胃癌患者腹膜微转移的关系，探讨促进微转移发生的因素，为临床判断预后、指导治疗提供一条新的思路。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料　选取2007年6月—2007年10月在山东大学齐鲁医院普外科行手术治疗的胃癌患者30例，其中男21例，女9例。年龄38~73岁，中位年龄57岁。突破浆膜层者共9例，未突破浆膜层者21例。

　　1.2　术中取材　术中以生理盐水冲洗腹腔及网膜囊，随后吸出收集，术后行PLC作为对照。自横结肠系膜前叶取活组织，约黄豆粒大小，术后行免疫组织化学法检测CK19及CK20。常规清除淋巴结并分组，与胃癌切除标本一同行病理组织学检查。

　　1.3　免疫组织化学方法　组织块以10%甲醛固定，石蜡包埋。每只蜡块均4 μm厚连续切片4张,其中2张用于HE染色，1张用于CK19染色，1张用于CK20染色。所用CK19、CK20单克隆抗体，PV9000试剂盒及DAB显色剂均购自北京中杉公司。

　　1.4　结果判定　CK表达于上皮细胞，阳性反应物质定位于胞质,呈现棕黄色。HE染色阴性,而CK19或CK20阳性者,视为发生了微转移。

　　1.5　统计学处理　采用SPSS10.0统计软件包进行分析，CK19、CK20与PLC的差异及腹膜微转移与肿瘤浸润深度、淋巴结转移的关系均用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　CK19、CK20在细胞中的表达及HE染色　 CK19、CK20染色均为棕黄色颗粒，表达于肿瘤的细胞质。30个活组织块的HE染色均为阴性。

　　2.2　免疫组织化学方法与腹腔冲洗液细胞学检查的比较　经免疫组织化学染色，CK19、CK20阳性者分别为13例及9例，阳性率分别为43.3%和30.0%;PLC阳性为3例，阳性率为10.0%。CK19、CK20的阳性率与PLC阳性率之间差异均有统计学意义(P<0.05)。CK19与CK20检测结果之间差异无统计学意义(P>0.05)

　　2.3　肿瘤浸润深度及淋巴结转移与微转移的关系　30例胃癌患者中9例突破浆膜层，其中8例检测到微转移(即CK19或CK20阳性者，8/9，88.9%);21例未突破浆膜层者中微转移者9例(9/21，42.9%);两组之间差异有统计学意义。淋巴结转移与腹膜微转移的关系各组差别无统计学意义(P>0.05)。

　　3　讨论

　　胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一。腹膜种植是进展期胃癌治疗失败的主要原因。研究发现认为，临床转移一般都是由微转移发展而来[3]，因此，发现腹腔内微转移的肿瘤细胞，对于胃癌复发和预后的判断及指导临床治疗有着极其重要的意义。传统的PLC检查灵敏性低,难以早期发现腹腔内脱落的游离癌细胞(exfoliated cancer cells, ECC)，且当肿瘤细胞较少并散布在炎性细胞和间皮细胞中时,亦难以靠形态学检查作出诊断[4]。在本研究中，PLC检查阳性者仅为10.0%。

　　随着分子生物学技术的发展，微转移的检测多采用免疫组织化学及RT-PCR。CK是细胞骨架系统中间丝的组成成分之一,表达于上皮细胞来源的肿瘤,其中CK19及CK20在胃肠道肿瘤中有较高表达[5-7]。本研究中，CK19和CK20的表达率分别为43.3%和30.0%，远高于PLC的检出率(10.0%)。由此可以表明，CK19和CK20是检测胃癌腹膜为转移的较好指标。

　　本研究对胃癌患者的横结肠系膜前叶进行活组织检查，通过免疫组织化学染色，检测CK19及CK20，并与常规HE染色及PLC检查相比较。结果表明，虽然常规HE无异常表现，实际上已经有56.7%(17/30)的胃癌患者发生了横结肠系膜前叶的微转移。由此可以看出胃癌手术清除横结肠系膜前叶的重要性和必要性。

　　本研究结果还表明，胃癌腹膜微转移的发生，与肿瘤是否侵透浆膜有关。30例胃癌患者中，9例突破浆膜层，其微转移率为88.9%，明显高于未突破浆膜层者(42.9%)。此外，微转移的发生与淋巴结转移无关(P>0.05)。 这与孙振青等[8]的研究结果一致。由此可以看出，肿瘤侵透浆膜是微转移发生的危险因素，对于病变已侵透浆膜的胃癌患者，术中行腹腔化学治疗是十分必要的。

　　检测CK19、CK20在胃癌患者横结肠系膜前叶等处的表达，可以更加灵敏更加准确地检测胃癌微转移的发生，这将为判断预后及进行术后治疗提供更可靠的依据，为胃癌的诊治提供了新的思路。而是否存在其他更加灵敏的检测指标，以及腹膜其他部位的微转移检测，将有待于进一步研究。

　　【参考文献】

　　[1] 吴在德. 外科学[M].第六版.北京：人民卫生出版社，2004，460.

　　[2] Lee CC，Lo SS，Wu CW ，et a1.Peritoneal recurrence of gastric adenocarcinoma after curative resection[J]. Hepatogastroenterology，2003，50(53)：172O-1722.

　　[3] 郑树，董琦，陈益定，等.与胃肠道恶性肿瘤转移和预后相关的肿瘤细胞分子生物学特征[J].中华胃肠外科杂志，2004，7(6)：429-431.

　　[4] Benevolo M，Mottolese M，Cosimelli M，et a1.Diagnostic and prognostic value of peritoneal immunocytology in gastric cancer[J]. J Clin Oncol，1998，16(10)：3406-3411.

　　[5] Tsujitani S, Kaibara N. Clinical significance of molecular biological detection of micrometastases in gastric carcinoma [J].Nippon Geka Gakkai Zasshi, 2001, 102 (10):741-744.

　　[6] Sugita Y, Fujiwara Y, Taniguchi H, et al. Quantitative molecular diagnosis of peritoneal lavage fluid for prediction of peritoneal recurrence in gastric cancer [J]. Int J Oncol, 2003, 23(5):1419-1423.

　　[7] Mori K, Aoyagi K, Ueda T, et al. Highly specific marker genes for detecting minimal gastric cancer cells in cytology negative peritoneal washings[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2004, 313(4):931-937.

　　[8] 孙振青，周岩冰.常规检查淋巴结阴性No.7组胃癌患者的淋巴结微转移研究[J].中华胃肠外科杂志，2005，8(4)：339-341.