幽门螺杆菌感染与环氧合酶2表达的关系
发表时间：2010-08-16 浏览次数：384次
作者：赵景山 作者单位：长春市人民医院普通外科，吉林 长春 130051
【关键词】 幽门螺杆菌感染 COX 2 胃癌
众多临床研究资料表明幽门螺杆菌(Hp)是慢性胃炎的重要致病因素〔1～3〕， 同时，其与胃癌的发生也密切相关，Hp可以通过诱导炎症，调节癌基因及抑癌基因的表达诱导胃黏膜上皮细胞增殖和凋亡异常及其代谢产物包括一些酶类、毒素和蛋白，直接损伤胃黏膜等形式引起胃癌的发生。Hp与胃癌的发生发展之间的关系日益受到人们的重视，并逐渐成为临床和基础研究的热点。环氧合酶2(COX2)是炎症反应的重要介质，并且Hp感染可上调其表达〔4〕。本文检测了不同胃黏膜病变中Hp的感染情况与COX2表达的情况，旨在探讨Hp感染致胃癌的可能机制。
1 对象与方法
1.1 研究对象
本研究选取了2005年6月～2007年1月我院普通外科门诊及住院患者的胃镜活检标本共134例。其中各种胃癌前病变18例，男10例，女8例，年龄45～75(平均59.8)岁;各型胃癌61例，男47例，女14例，年龄50～79(平均62.1)岁;慢性浅表性胃炎35例，男18例，女17例，年龄35～59(平均56.9)岁;萎缩性胃炎20例，男10例，女10例，年龄20～39(平均25.6)岁。所有病例均由有经验的内镜医师进行印象观察，并经过病理检查证实。每例患者均从病变处取5块活检标本，所有标本均经10%福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，4 μm厚连续冷冻切片，选取染色较好的切片进行病理及基因表达检测使用。
1.2 方法
1.2.1 WS银染法观察Hp感染情况
WS银染法Hp为棕黑色。WS染色分级标准: 0级:未见细菌; 1级:偶有细菌;2级:细菌数目介于1～3级;3级:所有视野内见大量细菌。其中1～3级为Hp感染阳性，0级为Hp感染阴性。
1.2.2 免疫组化染色
COX2mRNA鼠抗人单克隆抗体和免疫组化(SABC法)试剂盒均为California Biotech Inc公司产品。按照试剂盒说明书操作：石蜡包埋组织切片60℃烤箱中过夜，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，过氧化物酶阻断剂(0.3%过氧化氢甲醇) 10 min，以去除内源性过氧化物酶，正常羊血清室温封闭10 min，加第一抗体于4℃冰箱过夜;加第二抗体(生物素化的羊抗鼠或羊抗兔) 室温下作用10 min，加链霉菌素亲生物素蛋白——过氧化物酶溶液，室温下作用10 min。DAB显色，自来水冲洗后苏木精复染，脱水、透明中性树胶封固。PBS代替第一抗体作为阴性对照;用已知的胃癌阳性组织切片,在相同条件下染色，作为阳性对照。
1.3 COX2 mRNA阳性结果判定
镜下观察为细胞核和或细胞质内出现深浅不一的棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞。根据染色反应的深度及阳性细胞的数量分别记分为0～3分, 其中染色深度以多数细胞的呈色反应为准, 浅黄色为1分, 深黄色为2分, 棕黄色为3分, 不着色为0分。阳性细胞数<10%为0 分, 10%～45% 为1分, 46%～70%为2 分, >70%为3分, 并根据这两项的积分之和分为4级即: 阴性(-)为0分, 弱阳性(+)为1～2分, 阳性()为3～4分, 强阳性() 为5～6分。阳性细胞率的计算是先在低倍镜下(100×)随机选取细胞分布均匀的视野,再在高倍镜下(400×)用CMIAS病理彩色图像分析系统(北京航空航天大学)进行图像分析, 每例计数500个细胞, 然后测出阳性细胞的百分率: 阳性细胞率= (阳性细胞数/500)×100%。
1.4 统计学处理
实验数据用率或百分数表示，采用SPSS12.0进行统计学处理，组间比较用χ2检验。
2 结 果
2.1 Hp感染与COX2 mRNA的表达的关系
各组Hp感染阳性组COX2 mRNA基因表达差异具有显著性(均P<0.01)，其中各型胃癌组和胃癌前病变组中COX2 mRNA表达明显高于浅表性胃炎组和萎缩性胃炎组，各组别Hp阴性组间的COX2 mRNA的表达无显著差异,见表1。表1 Hp感染与COX2 mRNA表达的关系(略)
2.2 不同胃黏膜组织Hp感染率比较
Hp主要存在于胃黏膜表面的黏液中、细胞表面、胃小凹内、腺腔中及癌旁黏膜，呈弯曲状、海鸥状及杆状，往往聚集成群，而癌组织中少见Hp。Hp感染率在慢性浅表性胃炎组(28.5%)、萎缩性胃炎组(30%)、各型胃癌前病变组(61.1%)和胃癌组(89.5%)中依次增高，但胃癌前病变组和胃癌组Hp感染率较浅表性胃炎组和萎缩性胃炎组增高显著(P<0.01)，而浅表性胃炎组和萎缩性胃炎组之间和胃癌前病变组和胃癌组之间未见明显差异(P>0.05)。
3 讨 论
Hp感染可引起胃癌已达成共识，但Hp致胃癌机制目前仍未明了。一般认为Hp感染是胃癌发生发展进程中的首要推动因子。本研究发现，随着胃黏膜组织病变的加重，Hp检出率逐渐升高，其中各型胃癌的检出率最高，与文献报道结果一致〔5〕。因此推测Hp感染在浅表性胃炎→萎缩性胃炎→不典型增生→胃癌这一演变过程中起着重要的作用。但是胃癌的发生是多阶段，多基因调控的进展性过程。
COX是前列腺素合成过程中的重要限速酶，已发现有两种同工酶COX1和COX2。COX2在大多数正常组织中不表达，但在细胞受到各种刺激如炎症因子、生长因子、促癌剂等的诱导下迅速合成，参与炎症过程和肿瘤的发生〔6〕。COX2在大多数人类肿瘤中过表达，其过表达与结肠癌、头颈部肿瘤、肺癌、前列腺癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤的浸润、淋巴结转移和预后不良有关。本研究中COX2在各型胃癌中的表达明显高于慢性浅表性胃炎及萎缩性胃炎，可见COX2在胃癌的发生、发展中起着重要的作用。
综上，Hp的感染使得COX2在胃癌组织中的表达上调，而COX2则可能通过促进前列腺素的合成，促进血管生成，抑制机体免疫监视功能，阻止细胞凋亡等机制参与胃癌的发生与发展。
【参考文献】
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6 Sunil KM, Valsala H, Bharat BA. Bclxl suppressor TNFmediated apoptosis and activation of nuclear factorkB, activation protein1, and cjun Nterminal kinase〔J〕. J Inter CK Res, 2000;20(5):72535.
