脑脊液S100b蛋白在吉兰巴雷综合征早期诊断中的作用

作者：于丽    作者单位：武警兵团指挥部医院内科 乌鲁木齐 830063 　　【摘要】  目的 观察吉兰巴雷综合征（GBS）急性期脑脊液(CSF)中是否存在S100b蛋白, 探讨其在GBS早期诊断中的意义。方法 采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测40例GBS患者起病后3d内、7d、14d及35例对照组入组后脑脊液S100b蛋白浓度；并同时用罗氏P800全自动生化分析仪检测脑脊液蛋白，观察早期GBS患者脑脊液中是否存在S100b蛋白，并观察脑脊液 S100b蛋白与脑脊液蛋白是否具有相关性 。结果 GBS组脑脊液S100b蛋白最早可于起病后24～72h出现，其含量在起病后第7天明显高于对照组；GBS组脑脊液蛋白含量在起病后第14天明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；脑脊液S100b蛋白含量与脑脊液蛋白含量不具有相关性（P >0.05）。结论 在GBS早期脑脊液中存在S100b蛋白，用ELISA 方法检测脑脊液S100b蛋白可以作为GBS早期诊断标志物。

　　【关键词】  S100b蛋白；脑脊液蛋白；吉兰巴雷综合征；早期诊断

　　Significance of S100b protein in the cerebrospinal fluid in early diagnosis of GuillainBarre syndrome  Yu Li.　Department of Internal Medicine,Bingtuan Command Post Hospital,Chinese People’s Armed Police Force,Wulumuqi 830063,China 【Abstract】  Objective  To observe wheather S100b protein in the cerebrospinal fluid of the early stage of GuillainBarre syndrome and to explore its significance in the early diagnosis of GuillainBarre syndrome.Methods  In 40 patients with GuillainBarre syndrome,the content of S100b protein were measured using ELISA after 3,7,14 days following the onset. As disease controls,we obtained 10 normal and 25 patients, who had other diseases of the nervous system. At the same time, with Roche P800 fully automatic biochemical analyzer to test protein of the cerebrospinal fluid.Wheather S100b protein exist in the cerebrospinal fluid of patients with GBS in early stage,and S100b protein wheather or not relevant with cerebrospinal fluid protein were observed.Results  S100b protein can exist  in the cerebrospinal fluid  as early as 24～72 hours after onset, S100b protein increased significantly after 7 days of the onset of GuillainBarre syndrome, the protein of the cerebrospinal fluid also increased significantly after 14 days of the onset in the patients compared with that in the control subjects.No correlation was noted between S100b protein and protein of the cerebrospinal fluid in the patients with GuillainBarre syndrome.Conclusion  In the early stage of GuillainBarre syndrome, S100b protein exists in the cerebrospinal fluid.Detecting S100b protein of CSF with ELISA KiT can be used for early diagnosis of GBS.    　　【Key words】  S100b protein; Cerebrospinal fluid protein; GuillainBarre syndrome; Early diagnosis        　　S100b有多种生物学功能且与含量相关。由于S100b分布的特异性(绝大多数分布于神经胶质细胞和Schwann细胞)和含量的相对稳定性(S100b表达与神经生长发育平行增加)，脑脊液中出现S100b蛋白说明神经组织受损，如果吉兰巴雷综合征（GBS）早期脑脊液中存在S100b蛋白， S100b蛋白就有可能成为GBS早期诊断标志物。

　　1  对象与方法

　　1.1  一般资料  收集新疆医科大学第一附属医院神经内科及急诊科200710～200810收治的GBS住院患者40例，男23例，女17例，年龄（49.96±12.93）岁。选择年龄相匹配的同期骨科手术病人和同期住院的其他非感染性神经内科病人为对照组，男19例 ，女16例，年龄（47.15±14.57）岁。其中癫2例，偏头痛9例，动脉粥样硬化性脑梗死5例，阻塞性脑积水2例，运动神经元病5例，皮层下动脉硬化性脑病2例，正常对照10 例（为同期骨科手术病人）。2组观察对象年龄、性别组成差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性，近期无感染史，无自身免疫疾病史。所有GBS患者均经过详细的神经系统检查及电生理检查，诊断均符合Asbury等［1］于1990年制定的诊断标准，并且均为急性起病，标本采取前未经免疫药物及激素治疗。全部受试对象均取得知情同意。

　　1.2  S100b 蛋白检测方法  所有患者于起病3d内（最早采于起病后20h）、第7天、第14天，对照组于入院后或手术时留取2ml脑脊液标本，离心10min（2000r/min）分别保存在-20℃冰箱备用。脑脊液外观呈血性或白细胞计数高于（10×106/L）被排除在外。脑脊液S100b蛋白应用ELISA法测定，试剂盒购于武汉新启迪生物科技有限公司，严格按照说明书进行检测，同时用罗氏P800全自动生化分析仪检测脑脊液蛋白。

　　1.3  统计学方法  所有统计分析使用SPSS 11.0统计软件，计量资料以均数±标准差表示，统计方法采用单因素方差、t检验，变量间的关系采用Spearman相关分析，P≤0.05示差异有统计学意义, 对于诊断结果的评价，用敏感度（sensitivity），特异性（specificity），准确率（accuracy）评价。

　　2  结果

　　2.1  GBS组与对照组S100b蛋白比较  GBS组第7天脑脊液 S100b蛋白含量明显增高，与对照组比较有统计学意义（P=0.027)。见表1。

　　2.2  GBS组3个时间点S100b蛋白比较  GBS组中3d内5例脑脊液S100b蛋白阳性（≥0.2μg/L），第7天26例S100b蛋白阳性，第14天8例S100b蛋白阳性。S100b蛋白在3d内含量最低，第7天升高，第14天含量下降。GBS组第7天脑脊液S100b蛋白含量与3d内、第14天比较差异有统计学意义（P=0.018，P=0.022）。见表1。

　　2.3  GBS组与对照组脑脊液蛋白及GBS组3个时间点脑脊液蛋白比较  GBS组第14天与对照组、GBS组3d内、第7天脑脊液蛋白含量比较明显升高，差异有统计学意义（P=0.000）。GBS组中3d内2例脑脊液蛋白阳性(≥0.5g/L)，第7天4例脑脊液蛋白阳性，第14天21例脑脊液蛋白阳性。见表1。

　　表1  GBS组不同时期与对照组脑脊液S100b蛋白含量及脑脊液蛋白含量（略）

　　与对照组比较，aP＜0.05，与同组第3天、第14天比较，bP＜0.05；与对照组和同组3d、第7天比较，cP＜0.01

　　2.4  GBS组3个时间点S100b蛋白与脑脊液蛋白之间的关系  GBS组在起病3d内、第7天、第14天脑脊液中S100b蛋白含量与相应时间点脑脊液蛋白含量的相关系数（r）分别为0.241（P=0.032）、0.383（P=0.028）、0.481（P=0.035），提示两变量不具有相关性。

　　2.5  脑脊液S100b蛋白定量检测的灵敏性和特异性  以脑脊液S100b蛋白含量≥0.2μg/L为分界值时（准确率77.33％），灵敏度为65%，特异性为92.5%，阳性预测值89.65%，阴性预测值69.56%。以脑脊液S100b蛋白含量≥0.15μg/L为分界值时（准确率78.75%），灵敏度为95%，特异性62.5%，阳性预测值71.7%，阴性预测值92.59%。见表2。

　　表2  S100b蛋白的灵敏度和特异性（略）

　　3  讨论    　　吉兰巴雷综合征又称急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病，被认为是一种与免疫有关的炎性脱髓鞘性周围神经病，临床上以急性对称性四肢弛缓性瘫痪为主，主要累及运动神经，有较高的致残率［2］。GBS病因尚不十分清楚，一般认为与病毒感染和变态反应有关，有证据表明与空肠弯曲菌(campylobacter jejuni,CJ )的前驱感染有明显关系［3］。    　　早期诊断、早期治疗是提高治愈率、减少GBS患者致残率的关键，典型GBS 的临床诊断并不难，但对于临床症状不典型及重型患者早期诊断和治疗成为决定患者预后的关键，因此寻找GBS早期诊断标志物非常重要。    　　神经系统疾病脑脊液特殊蛋白质的检测备受关注，尤其是对某一种疾病有特异性诊断价值的蛋白质。GBS患者脑脊液中先后发现免疫球蛋白IgG、IgA水平升高,神经节苷脂抗体阳性，抗硫脂IgM及IgG升高，白介素IL10、 IL12水平增高,及脑脊液tau 蛋白增高［4］。但均因早期特异性不高,未能在临床推广。    　　Piazza等［5］在2例早期GBS患者的脑脊液中发现S100b蛋白升高，并且S100b升高程度与神经损伤程度与预后有一定的关系，因而S100b可能成为评估神经损伤程度和判断患者预后的新指标。    　　S100蛋白的基因定位于染色体lq21，由Moore于1965年在牛脑中发现，它是一种分子量为21kD的酸性钙结合蛋白，因其可溶解在pH 7.0的100％饱和硫酸铵溶液而得名［6］。S100b是S100家族中在脑内主要的和最具有活性的成员,约96％的存在于脑内，因此被认为是脑内特异蛋白，占脑可溶性蛋白总量的0.1％～0.2％，以高浓度特异性地存在于中枢神经系统的神经胶质细胞、星形细胞、少突胶质细胞、小胶质细胞、大胶质细胞以及前部垂体细胞和郎罕细胞，脑干的大部分感觉神经和小脑的小脑核也有明显的分布［7］。S100b常在胞浆中，通过旁分泌和自分泌到达胞外。S100b蛋白有广泛的生物学活性，生理浓度水平下发挥多种重要的生理功能；过量则诱导细胞凋亡，甚至坏死,高浓度(mM)S100b蛋白能通过一氧化氮依赖途径诱导神经元细胞死亡，而低浓度(μM)S100b蛋白能调节神经元细胞的生长、分化和代谢，在损伤后神经细胞的再生与修复过程中发挥重要作用［8］。这种双重作用依赖于神经损后S100b的浓度和恢复正常的时间。    　　目前临床上S100b检测方法主要有放射免疫分析法(radioimmunoassay， RIA)、免疫放射测定法（immunoradiometric assay,IRMA）、荧光免疫测定法(fluorescence immunoassay, FIA)和酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunoadsordent assay，ELISA）［910］。其中ELISA方法广泛应用于临床，测定灵敏度高达0.0125 μg/L，线性范围0～3.2 μg/L。此外，ELISA法还具有无污染、操作简便、报告结果快速等优点，本实验采用ELISA法定量检测脑脊液S100b蛋白。    　　本研究发现GBS组的S100b蛋白3d内5例（12.5%）阳性，第7天26例（65%）阳性，第14天8例（20%）阳性。GBS起病早期S100b蛋白阳性率低，随着病程的延长S100b蛋白的阳性率增高，并且S100b蛋白含量逐渐增高，第7天S100b蛋白含量明显高于第3天、第14天S100b蛋白含量逐渐减少，并且S100b蛋白在GBS起病24～72h便可在脑脊液中检测出。而GBS组的脑脊液蛋白3d内仅2例（5%）阳性，第7天4例（10%）阳性，第14天21例（52.5%）阳性，脑脊液蛋白最早在GBS起病48～72h在脑脊液中被检测出，多数需在起病后第14天方可检测出。这说明S100b蛋白比脑脊液蛋白更适合于GBS早期诊断。本研究还发现脑脊液蛋白与S100b蛋白之间不具有相关性，说明S100b蛋白可能是不同于经典蛋白细胞分离现象的独立的诊断标志物，并且脑脊液S100b蛋白含量与GBS患者病情严重程度相关。    　　在本研究中发现,正常人CSF中存在少量S100b蛋白, 此为细胞内外的钙离子调节所必须,以脑脊液S100b蛋白含量≥0.2μg/L为分界值时，对照组中10例正常对照的S100b蛋白均在正常范围内，2例癫，9例偏头痛，5例脑梗死，2例脑积水，5例运动神经元病，2例皮层下动脉硬化性脑病的S100b蛋白也在正常范围内，GBS患者脑脊液中S100b蛋白含量较其他神经系统疾病显著升高，提示S100b或许参与了GBS的致病过程。    　　综上所述，ELISA方法定量检测脑脊液中S100b蛋白对GBS早期诊断有一定的帮助, S100b蛋白可望为GBS早期诊断标志物。但是本研究病例数较少，脑脊液标本仅采集起病后3d内、7d、14d，GBS起病14d后S100b蛋白浓度随病程如何变化及S100b蛋白浓度与脑脊液蛋白浓度之间的关系有待进一步研究。

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　　［6］ Linda J，Van Eldik，Wainwright MS．The Janus face of glialderived S100B：Beneficial and detrimental functions in the brain ［J］.Restorative Neurol Neurosci,2003,21 (3):97108.

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