存素和CD44V6蛋白在胃癌中的表达及其相关性

　　作者：谷化平，尚培中 作者单位：中国人民解放军第251医院：病理科;普外科，河北张家口 075000

　　【摘要】 目的 探讨生存素(survivin) 和CD44v6蛋白在胃癌中的表达及意义。方法 应用免疫组化技术检测120例胃癌(GC)、30例异型增生(GED)和20例正常胃黏膜组织(NGM)中survivin和CD44v6蛋白表达，并结合肿瘤的病理学行为和临床随访资料进行分析。结果 在胃癌组织中，survivin 和CD44v6阳性率分别为75.8%和81.7%，均显著高于GED和NGM(P<0.05);survivin和CD44v6表达与GC浆膜浸润、淋巴结转移和患者预后密切相关(P<0.05)。结论 Survivin 和CD44v6表达与GC发生、转移和患者生存期有关，检测survivin 和CD44v6蛋白表达可作为预测胃癌患者预后的参考指标。

　　【关键词】 胃肿瘤;基因表达调控;肿瘤转移;预后;生存素;CD44v6蛋白;免疫组织化学

　　Expression and correlation of survivin and　CD44v6 protein in gastric carcinoma

　　Gu Huaping, Shang Peizhong

　　(Department of Pathology; Department of General Surgery,PLA No.251 Hospital, Zhangjiakou 075000, China)

　　ABSTRACT: Objective To investigate the expression of survivin and CD44v6 protein in gastric cancer (GC) and its clinical significance. Methods Immunohistochemical staining was used to detect the expression of survivin and CD44v6 protein in 120 cases of GC,30 cases of gastric epithelial dysplasia(GED) and 20 cases of normal gastric mucosa(NGM). The pathological features of GC and clinical followup data were also analyzed. Results The positive rate of survivin and CD44v6 was 75.8% and 81.7%, respectively, in primary GC. The positive rate of survivin and CD44v6 in GC was higher than that in GED and NGM (P<0.05). The expression of survivin and CD44v6 was closely related to infiltration of serosa, metastasis of lymph node, and prognosis of patients (P<0.05). Conclusion The expression of survivin and CD44v6 is closely related to carcinogenesis, metastasis and survival rate in GC. Survivin and CD44v6 may be prognostic indicators of GC.

　　KER WORDS: stomach neoplasm; gene expression regulation; neoplasm metastasis; prognosis; survivin; CD44v6; immunohistochemistry

　　胃癌是严重威胁人类健康和生命的常见恶性肿瘤。近年来，其发病率明显增加，发病年龄趋于提前。胃癌的发生和转移是一个十分复杂的生物学过程，涉及到多种因子的异常表达。我们采用免疫组织化学方法，对胃癌、异型增生和正常胃黏膜组织进行了生存素(survivin) 和CD44v6蛋白检测，并结合临床随访资料分析，探讨其表达与胃癌发生、侵袭转移和预后的关系及两种蛋白表达的相关性，为判断胃癌患者预后提供参考指标。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本来源 取我院普外科1995年1月至2006年1月确诊为胃癌的标本存档蜡块120例。男性80例，女性40例，平均年龄(59±74)(16-80)岁。肿瘤长径：≤4cm 39例，>4cm 81例。病理组织学分级：高、中分化胃癌78例，低分化胃癌42例。120例胃癌标本中，获得术后满5年随访者81例，其中已死亡病例60例，尚生存病例21例。取同期胃异型增生组织30例和正常胃黏膜组织(胃镜标本)20例作为对照。标本经100mL/L甲醛溶液固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片。

　　1.2 试剂来源 鼠抗人survivin和CD44v6单克隆抗体和LSAB试剂盒购自迈新生物技术公司(均为即用型)。

　　1.3 方法

　　1.3.1 免疫组织化学染色 采用微波链霉菌素生物素(microwavelabelledstreptavidin biotin, MWLSAB)免疫组织化学法和微波金属盐抗原修复技术，即将切片常规脱蜡水化后，放入枸橼酸缓冲液(10mmol/L, pH 6.0)内，用微波仪170W辐射5min，冷却后水洗。其他操作流程同常规LSAB法，所不同者为三步抗原孵肓和正常血清封闭用微波仪130W分别辐射5min，保温2min即可。

　　1.3.2 对照设计 实验用已知survivin和CD44v6阳性大肠癌组织作阳性对照，用磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。

　　1.4 结果判断 免疫组织化学染色阳性信号呈棕黄色。根据染色强度及显色癌细胞比例将染色结果分为：阴性(-)、弱阳性(+)、强阳性()3级。统计学处理采用χ2检验，P<0.05为差异有显著性意义。

　　2 结果

　　2.1 Survivin 和CD44v6蛋白在正常胃黏膜和良恶性病变组织中的表达 免疫组织化学染色显示，survivin和CD44v6阳性产物呈棕黄色或棕褐色。survivin定位于细胞质(图1A)，CD44v6定位于细胞质和细膜(图1B)。survivin蛋白在胃癌组织中的表达阳性率显著高于癌旁异型增生和正常胃黏膜组织(P<0.05)，异型增生显著高于正常胃黏膜组织(P<0.05)。CD44v6蛋白在胃癌组织中的表达阳性率显著高于异型增生和正常胃黏膜组织(P<0.05)，异型增生与正常胃黏膜组织之间无差异性(表1)。

　　图1 Survivin和CD44v6蛋白在胃癌组织中的表达(略)

　　Fig.1 Survivin and CD44v6 exprossion in Gc (MWLSAB×200)

　　A: immunohistochemistry positive surviving expression in cytoplasm (MWLSAB×200); B: immunohistochemistry positive CD44v6 expression in cytoplasm (MWLSAB×200

　　2.2 Survivin和CD44v6蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系 Survivin和CD44v6蛋白表达均与患者性别和肿瘤长径无关，而随着胃癌的分化程度减低、浆膜浸润和淋巴结转移，survivin和CD44v6蛋白阳性表达率增高，差异均有统计学意义(P<0.05，表2)。

　　2.3 Survivin和CD44v6表达与胃癌患者预后的关系 120例胃癌中，获得满5年以上随访的胃癌标本81例，其中survivin和CD44v6蛋白表达阳性率分别为74.1%(60/81)和85.2%(69/81)。Survivin 和CD44v6蛋白表达与患者预后呈正相关(P<0.05，表3)。

　　2.4 Survivin 和CD44v6蛋白表达之间的关系 在survivin阳性表达的91例胃癌中，CD44v6表达阳性率为87.9%(80/91)，在survivin阴性的29例胃癌中，CD44v6表达阳性率为62.1%(18/29)，差异有统计学意义(χ2=9.81, P<0.05)。

　　表1 Survivin 和CD44v6蛋白在各种胃组织中的表达(略)

　　Table 1 Survivin and CD44v6 expression in gastric tissues

　　NGM: normal gastric mucosa; GED: gastric epithelial dysplasia; GC: gastric cancer; *P<0.05 vs. GC

　　表2 Survivin 和CD44v6蛋白表达与胃癌临床病理指标的关系(略)

　　Table 2 Relationship between expression of survivin and CD44v6 protein in GC and clinicopathologic characteristics

　　*P<0.05 vs. well/moderately;▲P<0.05 vs. nonseross soakage;△P<0.05 vs. nonlymph node metastasis

　　表3 Survivin 和CD44v6蛋白表达与胃癌患者预后的关系(略)

　　Table 3 Expression of survivin and CD44v6 and prognosis in GC patients

　　▲P<0.05 vs. survival

　　3 讨论

　　Survivin是一种凋亡抑制基因，属于IAP家族新成员，具有显著的抗凋亡作用和肿瘤特异性表达的特点。其表达与细胞周期密切相关，是G2/M期的调节基因，参与细胞周期调控、有丝分裂及肿瘤的恶性转化，并与肿瘤的发生发展和预后密切相关[14]。本研究结果显示，survivin蛋白在正常胃黏膜组织中无表达，在胃癌中的表达阳性率显著高于异型增生组织，并随着癌细胞分化程度减低、浆膜浸润、淋巴结转移和患者生存期减低而显著性增高。提示survivin蛋白表达不仅与胃癌的发生发展及肿瘤分化的生物学特性密切相关，而且在肿瘤的侵袭和转移过程中起到一定作用，survivin表达阳性率越高，患者预后越差。表明survivin高表达是预示胃癌临床进展和生物学行为的一种重要生物学标志。

　　CD44是位于人类第11号染色体短臂上的基因所编码的细胞黏附分子，是单基因编码分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，能与透明质酸等多种配体分子结合，介导细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间的黏附，通过黏附、迁移、渗透、信号传导等促进肿瘤细胞的侵袭转移。CD44v6是最早被发现的含有变异型外显子v6编码序列的CD44分子，被认为是肿瘤转移促进基因，可赋予肿瘤细胞以转移能力。CD44v6的过量表达与多种人体恶性肿瘤的发生发展、侵袭转移和不良预后密切相关，是判断肿瘤生物学行为及预后因素的重要指标[45]。本研究结果显示，在胃癌组织中CD44v6蛋白表达阳性率显著高于异型增生和正常胃黏膜组织，并随着癌组织分化程度减低，浆膜浸润、淋巴结转移和患者生存期减低，CD44v6蛋白表达阳性率亦随着显著性增高。结果表明，CD44v6表达不仅参与胃粘膜上皮细胞的恶性转化过程，而且在预测原发胃癌的转移潜能方面具有较大实用价值，是一个预测胃癌患者预后不良的重要生物学参考指标。

　　恶性肿瘤的发生、发展、侵袭与转移是涉及多种相关因子调控的复杂的生物学过程。本研究发现，在胃癌组织中survivin蛋白高表达者CD44v6蛋白表达显著增高，两者呈正相关。提示，在胃癌的发生、临床进展和转移的病理过程中，survivin和CD44v6可能发挥着协同效应，共同参与了胃癌的演化过程。因此，在病理活检中检测胃癌组织中这两种基因蛋白表达水平，对胃癌患者的术式选择及切除范围具有指导意义，并可估计胃癌患者的预后，为今后开展肿瘤基因治疗积累更多的临床资料。

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