c-erbB-2和ki67在胃黏膜肠上皮化生及胃癌组织中的表达

c-erbB-2和ki67在胃黏膜肠上皮化生及胃癌组织中的表达作者：杨京彦　张建平　刘凤军 赵著梅　郑瑶　刘文君 王妍    作者单位：山东大学齐鲁医院　1病理科　2普外科　(山东　济南　250012)    【摘要】  目的：探讨c-erbB-2、ki67在胃黏膜肠上皮化生(肠化)及胃癌中的表达及其与胃癌发生的关系。方法：采用免疫组织化学Envison法对27例单纯肠化(SIM)、26例不典型肠化(AIM)和37例胃癌组织分别进行c-erbB-2、ki67检测。结果：c-erbB-2、ki67在胃癌组织中的表达均高于SIM中的表达(P<0.05)，AIM与胃癌组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论：c-erbB-2、ki67在AIM及胃癌组织中高表达，AIM与胃癌发生关系密切，属于胃癌的癌前病变。    【关键词】  胃肿瘤·肠上皮化生· 受体，c-erbB-2·ki67    Expression of c-erbB-2 and ki67 proteins in simple intestinal metaplasia, atypical intestinal metaplasia and gastric adenocarcinoma　YANG Jing-yan1, ZHANG Jian-ping1, LIU Feng-jun2, ZHAO Zhu-mei1, ZHENG Yao1, LIU Wen-jun1, WANG Yan11Department of Pathology, 2Department of General Surgery, Qilu Hospital of Shandong University (Jinan 250012, China)　　【ABSTRACT】 Objective: To study the expressions of c-erbB-2 and ki67 proteins in simple intestinal metaplasia (SIM), atypical intestinal metaplasia (AIM) and gastric adenocarcinoma, and the relationships among them. Methods: The immunohistochemical EnVision method was used to determine the expressions of c-erbB-2 and ki67 in 27 cases of SIM, 26 cases of AIM and 37 cases of gastric adenocarcinoma. Results: The positive rates of c-erbB-2 and ki67 in gastric adenocarcinoma were significantly higher than that in SIM(P<0.05). There was no significant differences between the expression of AIM and gastric adenocarcinoma(P>0.05). Conclusion: The high expression of c-erbB-2 and ki67 in AIM and gastric adenocarcinoma suggested that AIM may play an important role in gastric adenocarcinoma. The AIM is one kind of precancerosis of gastric adenocarcinoma.　　【KEY WORDS】 Stomach neoplasms· Intestinal neoplasia ·C-erbB-2 protein· ki67 protein　　胃癌癌前病变的诊断对减少胃癌发病率，提高胃癌治愈率具有十分重要的意义。临床胃镜活组织检查中发现在良、 恶性病例中有大量胃黏膜肠上皮化生(简称肠化)患者，目前学者对胃黏膜肠化与胃癌发生危险性的关系认识不一，因此，探讨胃黏膜肠化分型及其与胃癌的关系有重要意义。　　根据胃黏膜肠化上皮细胞形态及上皮结构将其分为2型: 单纯肠化(simple intestinal metaplasia， SIM)和不典型肠化( atypical intestinal metaplasia， AIM)[1]：SIM组织腺体及杯状细胞形态规则排列整齐，杯状细胞核位于基底部，胃小凹黏膜平坦;AIM组织细胞拥挤，常呈假复层，不成熟杯状细胞扁椭圆形，核大，常偏位，极性紊乱。应用免疫组织化学方法检测胃黏膜肠化和胃癌组织中 c-erbB-2与 ki67蛋白的表达， 探讨胃黏膜不同肠化类型与胃癌的关系。1　资料与方法　　1.1　一般资料　收集山东大学齐鲁医院病理科2005～2006年胃黏膜肠化病例53例，其中SIM 27例，男19例，女8例，平均年龄56.5岁;AIM 26例，男20例，女6例，平均年龄59.5岁。胃癌37例，男28例，女9例，平均年龄59.4岁。　　1.2　方法　所有标本4 μm连续切片，分别作 HE和免疫组织化学染色。常规 HE染色，观察胃黏膜肠上皮化生的病理形态。单克隆抗体 ki67及 PV9000 检测试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，单克隆抗体c-erbB-2购自福建迈新公司。免疫组织化学染色采用Envison法。切片脱蜡至水， PBS(pH 7.2～7.4)冲洗3 min×3次;枸橼酸(pH 6.0)微波修复组织抗原98 ℃、15 min，PBS冲洗3 min×3次;内源性过氧化物酶阻断剂(试剂A)室温10 min， PBS冲洗3 min×3次;一抗c-erbB-2和ki67室温下孵育150 min，PBS冲洗3 min×3次;聚合酶辅助剂(试剂B)，室温下20 min，PBS冲洗3 min×3次;滴辣根酶标记羊抗兔/小鼠IgG多聚合体(试剂C)，室温30 min;DAB显色，在显微镜下观察终止显色;复染，中性树胶封片，光学显微镜下观察。每批染色均设立阴性对照 ，以 PBS代替一抗作为阴性对照。　　1.3　结果判断　c-erbB-2 以细胞膜出现棕黄色着色为阳性，可同时伴或不伴有胞质弥漫性着色，取3个高倍镜视野中阳性细胞所占的细胞百分比的平均值，阳性细胞<50%为弱阳性，视为阴性(-)，≥50%为阳性(+);ki67阳性为细胞核着色呈棕黄色，取3个高倍视野进行细胞计数，阳性细胞≤10%为阴性(-)，>10%为阳性(+)。　　1.4　统计学处理　采用SPSS13.0统计软件包进行数据处理，行 χ2检验。 P≤0.05 为差异有统计学意义。2　结果　　2.1　c-erbB-2在SIM、AIM及胃癌组织中的表达　 c-erbB-2阳性均表现为细胞膜着色或伴有细胞质内颗粒样染色，其中SIM及AIM的细胞质着色较浅，胃癌着色较深。c-erbB-2在SIM、AIM和胃癌组织中的阳性表达率分别为 33.33%、65.38%和59.46%(图1，表1)。　　2.2　ki67在SIM、AIM及胃癌组织中的表达　ki67的阳性表达表现为细胞核着色。ki67在SIM、AIM和胃癌组织中的阳性表达率分别为 37.04%， 57.69%和 75.68%(见表1，图2)。　　2.3　c-erbB-2和ki67表达的相互关系　c-erbB-2和ki67均阳性者为35例，二者均阴性为24例，c-erbB-2表达阳性而ki67阴性者为13例，ki67表达阳性而c-erbB-2阴性者为18例。c-erbB-2和ki67表达密切相关(P<0.05)。3　讨论　　c-erbB-2是细胞来源的癌基因，编码相对分子质量为185×103的磷酸蛋白质P185，其结构与EGFR相似，具有酪氨酸激酶的活性[3]，参与对细胞生长、繁殖、分裂的调控及控制肿瘤的生长，c-erbB-2基因结构的改变、扩增、过度表达将促进细胞有丝分裂，使某些不正常细胞的独立生长能力失控从而转为肿瘤细胞。Xie等[4]利用分子生物学技术证实在 c-erbB-2癌基因转染的 NIH/3T3细胞核内酪氨酸磷酸化作用明显强于核外，并可直接参与基因调控 ，使细胞过度增殖及恶性化。李挺等[5]用免疫织组化学杂交研究发现，c-erbB-2癌基因在恶性组(50%～60%)中表达率比良性组(22.2%)高2倍。c-erbB-2基因在临床肿瘤诊断中具有重要意义。本研究显示，c-erbB-2在SIM，AIM和胃癌组织中的表达率递增， 陈杰等[6]研究认为细胞癌变后c-fos、c-myc等基因激活，而c-myc 基因可抑制c-erbB-2表达，从而使c-erbB-2等表达率下降。提示SIM和AIM作为癌前阶段，显示胃黏膜细胞过度增殖，可能与胃癌发生有关。　　ki67是一种存在于增殖细胞中的核抗原，它的功能与染色质相连，与细胞有丝分裂有关，是目前应用最广泛的增殖细胞标记之一。Gerdes 等[7]研究表明ki67的反应与细胞周期密切相关，在G1、S、G2、M期均表达，但G0期无表达，而且还发现ki67在G1 晚期/S早期微量表达，S 期聚集，尤其在后半期表达率明显增高，有丝分裂后期迅速降解或失去抗原决定簇，故认为ki67是检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标之一。目前有研究表明在多种实体恶性肿瘤中ki67的表达远高于正常组织，并与恶性肿瘤的发展，转移及预后有关[8-10]。Kenji等[11]研究发现，炎症状态下胃黏膜腺体颈部及胃底腺部分比正常黏膜有更多的ki67抗原阳性增殖细胞。本研究中，SIM、AIM、胃癌腺体部分均有ki67的表达，SIM中ki67表达部位较AIM表浅，AIM表达不及胃癌组织中弥漫。ki67在SIM、AIM及胃癌组织中的表达呈上升趋势，胃癌组织中的表达率与SIM相比，差异有统计学意义(P<0.05)，但与AIM表达的差异无统计学意义，提示AIM中的细胞增殖活性接近于胃癌细胞，与SIM相比AIM与胃癌的关系更密切。　　c-erbB-2和ki67表达的相互关系分析结果表示二者表达密切相关，提示异常增殖的细胞中可能有具有酪氨酸激酶活性的P185蛋白过度表达，增强细胞的分裂增殖，导致细胞过度增生转化成肿瘤细胞，二者对细胞癌变具有相互促进作用。　　根据c-erbB-2和ki67在SIM、AIM以及胃癌组织中的表达显示，肠化中AIM与胃癌的关系密切，属于胃癌的癌前病变。可对AIM的患者进行跟踪随访，尽早发现早期胃癌及时治疗。将肠化分为SIM，AIM2种类型，使临床能有目的的随访胃癌前病变患者，对于临床胃癌癌前病变的诊断具有一定实用价值。【参考文献】　　[1] 张建平，于佩良，杨庆媛，等.胃黏膜肠上皮化生与胃癌关系的病理研究[J].山东医科大学学报，1997，35(3):203-205.　　[2] 赵著梅，张建平，刘凤军，等. 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