副肿瘤性神经系统综合征患者外周血T细胞亚群、活化及调节性T细胞的变化及其意义

作者：蚌埠医学院    作者单位：233004蚌埠医学院第一附属医院神经内科

【摘要】  目的 研究副肿瘤性神经系统综合征(PNS)患者外周血T细胞亚群、活化及调节性T细胞的变化及其意义。方法 采用流式细胞术检测10例PNS患者外周血T细胞亚群、活化及调节性T细胞，并与正常人及小细胞肺癌（SCLC）患者比较。结果 PNS组与正常组比较： CD3+、CD4+T细胞、调节性T细胞及CD4+/CD8+显著降低（P<0.05～0.01）；总活化性T细胞及活化性CD4+T细胞升高（均P<0.01）。PNS组与SCLC组比较：总活化性T细胞及活化性CD4+T细胞显著升高（均P<0.01）；调节性T细胞显著减低（P<0.01）。结论 PNS患者外周血CD3+、CD4+T细胞及CD4+/CD8+降低，活化T细胞增多及调节性T细胞减少。提示其细胞免疫功能总体处于低下状态；并有T细胞过度激活及调节性T细胞所介导的免疫抑制功能的降低。

【关键词】  副肿瘤性神经系统综合征；T细胞亚群；活化T细胞

    Changes and its significance of T lymphocyte subsets, activated and regulatory T cells in peripheral blood in  patients with paraneoplastic nervous system syndrome  ZHANG Lina, YIN Liang, LI Baiqing, et al. Department of Neurology, the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Bengbu 233004, China

    Abstract：Objective  To investigate the changes and its significance of T lymphocyte subsets, activated and regulatory T cells (Tregs) in peripheral blood in patients with paraneoplastic nervous system syndrome (PNS).Methods  The levels of T lymphocyte subsets, activated T cells and Tregs in peripheral blood in  patients with PNS were detected by flow cytometry. Then compared those with normal controls and patients with small cell lung cancer(SCLC). Results  Compared with normal controls,  the CD3+, CD4+ T cells, Tregs and CD4+/CD8+ in peripheral blood of patients with PNS group were significantly decreased(P<0.05～0.01), total activated T cells and activated CD4+ T cells were higher (all P<0.01). Compared with the SCLC group, total activated T cells and activated CD4+ T cells in PNS group were significantly increased (all P<0.01), Tregs were  markedly decreased(P<0.01). Conclusions  The CD3+, CD4+T cells and CD4+/CD8+ in peripheral blood in the patients with PNS are decreased. It indicates that patients with PNS present a decrease of cellular immunity. The decrease of activated T cells and the increasing Tregs suggests that T cells in the patients with PNS are overactivated, and the immunesuppression function mediated induced by Tregs is decreased.

    Key words：paraneoplastic neurological syndromes; T lymphocyte subsets; acivated T cells

    副肿瘤性神经系统综合征（PNS）是恶性肿瘤通过远隔作用引起的神经系统病变，它既非肿瘤的直接浸润或转移所致，也非由感染、代谢因素、营养缺乏及抗肿瘤治疗等所引起。PNS发生于1%左右的恶性肿瘤患者，最常见为小细胞肺癌(SCLC)［1］，其次为卵巢癌、乳腺癌等。且神经系统综合征的出现常先于原发肿瘤的诊断。PNS的发病机制尚未明确，目前认为大多数与自身免疫有关。研究［2］表明肿瘤产生的相关抗体与神经元抗原产生的交叉免疫反应可能是其发病机制;但体液免疫尚不能完全解释其发病机制。Albert等［3］研究认为PNS与T细胞介导的细胞免疫有关。外周血T细胞亚群分析是反映机体细胞免疫状态的较好指标，目前国内外关于PNS患者外周血T细胞亚群分布的报道甚少。本研究采用流式细胞术（FCM）检测PNS患者外周血T细胞亚群的变化，观察PNS患者细胞免疫机能的状态。现报告如下。

    1  对象与方法

    1.1  对象  (1)PNS组: 系2005年8月～2007年3月我科收治的SCLC并发PNS患者10例，男8例，女2例；年龄51～80岁，平均（60.3±10.9）岁；病程1～11个月，平均（5.9±0.8）个月; 符合2004年修订的PNS诊断标准。(2)SCLC组: 系2006年3月～2007年2月我院肿瘤及呼吸内科住院的SCLC患者10例，男6例，女4例；年龄27～78岁，平均（57.6±9.2）岁；病程1～8个月，平均（5.6±0.7）个月；均经病理确诊。（3）正常组：为健康工作人员，男7人，女5人；年龄24～52岁，平均（49.8±8.1）岁。所有病例除外与自身免疫相关的疾病，标本采集前未接受化疗、放疗等影响免疫功能的治疗。

    1.2  方法

    1.2.1  T细胞亚群、活化及调节性T细胞检测  取入组者空腹静脉血30 μl，肝素抗凝，分别加入IgG1/IgG2、CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD4/CD25、CD3/CD4/HLADR不同荧光标记单克隆抗体2～5 μl，混匀，室温避光孵育30 min，各管加溶血素2 ml，混悬器上混匀，室温避光放置10 min，弃上清，加缓冲液1 ml洗涤，并以1500 r/min离心5 min，弃上清，加入2%多聚甲醛(PFA)固定。上流式细胞仪（FACS Calibur，购自BD公司）检测，Cellquest软件分析数据，记录阳性细胞数，减去非特异性对照值。

    1.2.2  统计学方法  检测数据以均数±标准差(±s)表示，使用SPSS 11.5 统计软件进行单因素方差分析，两两比较用q检验。

    2  结  果

    2.1  3组外周血CD3+、CD4+、CD8+ T细胞及CD4+/CD8+值的比较  见表1。PNS组和SCLC组外周血CD3+、CD4+T细胞及CD4+/CD8+显著低于正常组（P<0.05～0.01）; PNS组与SCLC组间差异无统计学意义。3组外周血CD8+T细胞的差异无统计学意义。

    2.2  3组活化性及调节性T细胞的比较  见表1。PNS组总活化性T细胞及活化性CD4+T细胞明显高于正常组及SCLC组（均P<0.01）； PNS组调节性T细胞显著低于正常组及SCLC组（P<0.05～0.01）,而SCLC组则显著高于正常组（P<0.01）。表1  PNS组、SCLC组与正常组外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞及CD4+/CD8+、总活化性T细胞、活化性CD4+T细胞及调节性T细胞的比较 注：与正常组比较*P<0.05,**P<0.01；与SCLC组比较▲P<0.01

    3  讨  论

    机体的细胞免疫应答由T细胞介导，CD3+T细胞为总成熟T细胞标志，又可分为CD4+和CD8+T细胞。CD4+T细胞能促进B细胞、T细胞及其他免疫细胞的增殖和分化，协调免疫细胞间的相互作用；CD8+T细胞参与抗病毒、抗肿瘤等免疫，且可抑制免疫应答活化阶段。CD4+/CD8+是反映机体免疫状态的重要指标，其比值失衡可导致免疫功能紊乱及一系列免疫病理改变［4］，其值上升提示正向免疫占优势，反之则负向免疫占优势。宿主对体内肿瘤组织的免疫以细胞免疫为主，且CD4+T细胞在协同杀伤肿瘤细胞中起重要作用，其数目减少可使肿瘤细胞发生免疫逃逸［5］。本研究PNS组及SCLC组患者外周血CD3+、CD4+T细胞及CD4+/CD8+显著低于正常组（P<0.05～0.01），与既往报道［6,7］一致，提示PNS与SCLC患者细胞免疫功能总体处于低下状态；而PNS组与SCLC组之间差异无统计学意义，提示PNS患者细胞免疫功能的降低是由伴发肿瘤引起的。此外，本研究PNS组及SCLC组患者外周血CD8+T细胞较正常组有增高趋势，但无统计学意义。可见PNS患者CD4+/CD8+下降主要由CD4+T细胞下降所致，这种负相免疫占优势的原因可能是癌细胞产生的一些免疫抑制因子逃避机体免疫监视所致，使肿瘤细胞得以增殖［8］。

    人白细胞抗原（HLA）DR是人类主要组织相容性复合体（MHC）Ⅱ类分子的主要抗原之一，在抗原提呈和胸腺选择中起重要作用。HLADR在激活的T细胞表面表达，且稳定表达在激活的晚期，因此可通过检测外周血总活化性T细胞及活化性CD4+T细胞来监测T细胞的活化状态。自身免疫性疾病是活化T细胞及其细胞因子介导的不正常免疫应答引起的。本研究发现PNS患者外周血总活化性T细胞、活化性CD4+T细胞显著高于正常组及SCLC组（均P<0.01），提示虽然PNS患者外周血T细胞总数降低，但处于活化状态的T细胞比例显著增多，并且存在CD4+T细胞过度活化；而SCLC组这两种活化性T细胞显著低于正常组（均P<0.01）。此结果表明PNS组与SCLC组患者虽然同样存在总T细胞减低，但处于活化状态的T细胞比例却有显著差异。推测患者体内有限数量T细胞的过度激活参与了该病的发生，导致针对正常神经元的自身免疫反应。活化T细胞增多提示可使用免疫抑制疗法治疗该病，Albert等［3］报道使用活化T细胞的特异性抑制剂（他克莫司）治疗PNS患者可能有效。

    调节性T细胞是近年来确定的一类具有免疫调节功能的T细胞亚群，此类细胞通过接触抑制的方式抑制T细胞的活化和增殖。调节性T细胞在自身免疫病和肿瘤免疫中均发挥重要作用：其数量不足或功能失调可引起自身免疫疾病的发生［9］，且调节性T细胞的缺乏可诱导针对弱抗原（肿瘤特异性抗原）的免疫反应［10］；其数量增多可抑制抗肿瘤免疫效应，促进肿瘤的生长［11］。本研究PNS组该细胞比例较正常组及SCLC组均显著降低，提示其免疫抑制功能减低，处于自身耐受状态的T细胞被自身抗原活化而致PNS发生。一项研究［12］显示存在副肿瘤性抗体的SCLC患者，其病灶的分布更局限、预后较好，推测其原因可能是调节性T细胞的减少诱导产生了针对肿瘤和神经系统共同抗原的交叉免疫反应，从而限制了肿瘤的生长，且同时导致了PNS的发生。PNS患者调节性T细胞减少，提示增加其数量或功能可能对PNS 的治疗有益。由于PNS患者伴发恶性肿瘤，故应考虑调节性T细胞的增加是否会抑制免疫、促进肿瘤生长。

    综上所述，PNS患者细胞免疫状态与未发生PNS的SCLC患者比较，活化性T细胞显著升高、调节性T细胞显著降低，是其发生自身免疫的理论基础，可指导临床的免疫调节治疗。而CD3+、CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值两组间差异无统计学意义，提示这些免疫指标相对于正常组的变化为原发肿瘤所引起的。

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