结肠癌患者凝血与纤溶分子标志物的检测及其临床意义

　　作者：张仁华　王加勇　孙晓慧　牛军    作者单位：山东大学齐鲁医院　1外科　2肝胆外科　(山东　济南　250012)3山东省千佛山医院　皮肤科　(山东　济南　250014)

　　【摘要】  目的: 探讨结肠癌患者凝血与纤溶分子标志物的变化与肿瘤分期、分化程度及转移的关系。方法:结肠癌患者组125例，按Dukes分期分为A+B期组(58例)、C+D期组(67例);按分化程度分为低分化+未分化组(40例)、高分化+中分化组(85例)。正常对照组54例。取空腹外周静脉血，测定血浆组织因子(TF)、凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、凝血酶原激活物抑制物(PAI-1)。结果: 结肠癌患者组TF、TAT、t-PA、PAI-1水平较正常对照组明显增加(P<0.01)。C+D期组和低未分化组患者血浆TF、TAT、t-PA、PAI-1水平分别高于A+B期组和高中分化组(P<0.01)。结论:结肠癌患者存在明显的凝血及纤溶机制异常，且其变化与病情发展及预后有关，监测患者TF、TAT、t-PA、PAI-1水平可能成为预防血栓形成及慢性DIC等凝血性疾病的有效措施。

　　【关键词】  结肠肿瘤·血液凝固因子·组织型纤溶酶原激活物

　　Study of molecular markers of coagulation and fibrinolysis systems in patients with colon cancer

　　ZHANG Ren-hua1，WANG Jia-yong2, SUN Xiao-hui3, NIU Jun2

　　1Department of Surgery, 2Department of Hepatobiliary Surgery, Qliu Hospital Affiliated Shandong University (Jinan 250012, China)

　　3Department of Dermastology, Qianfoshan Hospital (Jinan 250014, China)

　　【ABSTRACT】 Objective: To investigate the relationship between the changes of blood coagulation and fibrinolytic parameters with the pathological types, differentiation degree and metastasis in patients with colon cancer. Methods: By enzyme-linked immunosorben Assay(ELISA),4 plasma molecular markers of the coagulation and fibrinolysis systems were measured in 54 healthy volunteers and 125 cases of colon cancers, which included 58 Dukes A+B, 67 Dukes C+D and 40 undifferentiated and poorly differentiated, 85 well-differentiated and moderately differentiated patients. Their blood samples were taken from their peripheral veins.These molecular markers of coagulation and fibrinolytic system were as followings：tissue factor(TF), thrombin-antithrombin III complexes(TAT)， tissue-type plasminogen activator(t-PA)， plasminogen activator inhibitor-1(PAI-1).Results: The levels of TF、TAT、t-PA、PAI-1 in 125 colon cancer patients were significantly higher than that in control group(P<0.01). The levels of TF、TAT、t-PA、PAI-1 increased progressively with the exacerbation and differentiation of colon cancer, and there was a significant difference between the two groups (P<0.01). Conclusion: The patients with colon cancer, especially those in the advanced stage usually, accompany with the dysfunction of blood coagulation, monitoring their alterations in TF、TAT、t-PA、PAI-1 levels could be a valid measure to prevent coagulation disorder and to direct the clinical use of anticoagulation drugs.

　　【KEY WORDS】 Colon neoplasms·Blood coagulation factors·Fibrinolysis

　　恶性肿瘤会导致凝血、抗凝和纤溶系统的失衡， 使机体处于高凝状态[1]， 从而影响肿瘤的生长与转移[2]。1878年Biuroth发现血栓中存在恶性肿瘤细胞，从而认为血栓与恶性肿瘤转移有关。恶性肿瘤患者血栓发生率约为10%～30% ，其中以腺癌的发生率最高。本研究对125例结肠癌初诊患者检测凝血和纤溶的分子标志物，观察恶性肿瘤患者凝血、纤溶系统的变化，旨在分析和探讨其与结肠癌病情发展及预后的临床意义。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料　2007年6月—2008年12月，山东大学齐鲁医院收治结肠癌患者125例(结肠癌组)，其中男72例，女53例;年龄31～76岁，平均年龄(52.3±10.05)岁。所有病例均经病理组织学确诊。肿瘤分期采用Dukes分期法，分为A+B期组(58例)和C+D期组(67例);按分化程度分为高分化组(38例)、中分化组(47例)、低分化组(26例)和未分化组(14例)。另取同期健康体格检查者54例为对照组，其中男32例，女22例;年龄30～75岁，平均年龄(52.8±10.05)岁。所有研究对象在采集标本前2周内均无血栓及出血性疾病、无感染性疾病，手术前2周及治疗过程中均未使用影响凝血及止血的药物。

　　1.2　主要试剂　血浆组织因子(tissue factor，TF)试剂盒购自美国Diagnostica公司，血浆凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物(thrombin-antithrombin Ⅲ complexes，TAT)试剂盒购自ASSAYPRO公司，血浆组织型纤溶酶原激活物(Tissue-type plasminogen activator，t-PA)和血浆纤溶酶原激活物抑制物(Plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)试剂盒购自上海太阳生物技术公司。

　　1.3　检测方法　对照组与结肠癌组均于术前清晨空腹抽取外周静脉血，配成抗凝静脉血4.5 mL(枸橼酸钠︰血液=1︰9)，即刻以3 000 r/min离心15 min，吸取血浆分装5管，立即置于-80 ℃冻存，分3次检测。采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)测定。标本采集严格按照止血与血栓实验检测取血注意事项操作，所有实验步骤均严格按照试剂盒使用说明操作。

　　1.4　统计学处理　所获计量资料以x±s表示，应用SPSS13.0软件进行统计学分析。2组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。P≤0.05为差异具有统计学意义。

　　2　结果

　　结肠癌组患者的TF、TAT、t-PA、PAI-1水平较正常对照组有明显的增高(P<0.01，表1)。

　　C+D期组结肠癌患者的TF、TAT、t-PA、PAI-1水平明显高于A+B期组患者(P<0.01)及对照组(P<0.01);将A+B期组患者与对照组进行比较，其血浆TF、TAT、t-PA、PAI-1的水平差异均有统计学意义(P<0.05，表2)。

　　低未分化组结肠癌患者的TF、TAT、t-PA、PAI-1水平明显高于高中分化患者(P<0.01)及正常对照组(P<0.01) ;高中分化组患者血浆TF、TAT、t-PA、PAI-1的水平与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05，表3)。

　　3　讨论

　　恶性肿瘤引起血栓形成的机制有多方面，发病机制较为复杂，与血流减慢和血液高凝状态、血管壁内皮细胞损伤等因素有关。已证实胃肠道恶性肿瘤患者存在明显的止凝血功能紊乱。凝血和纤溶系统在生理性再生、血管生成、细胞浸润、肿瘤转移等方面起着重要作用。目前诊断早期凝血功能改变有价值的敏感指标是凝血和纤溶分子标志物[3-5]。

　　TF是凝血因子激活的分子标志物，也是凝血系统中最关键的的促凝因子。作为外源凝血系统的启动者， TF可通过调节血管内皮细胞生长因子(VEGF)合成参与肿瘤的形成及转移[6]。TF同时可促进凝血酶大量形成，将纤维蛋白原转化为有活性的纤维蛋白。纤维蛋白可以捕获血液循环中的肿瘤细胞，造成癌细胞的转移。TAT是活化的凝血因子与抗凝因子形成的复合物，是凝血因子活化的分子标志物。凝血酶生成后可迅速与抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)以1∶1等摩尔相结合，形成无抗凝和凝血活性的TAT，从而使凝血酶灭活。血浆TAT升高是凝血激活的一个特征，也是凝血酶大量生成的直接证据。血浆TAT是凝血酶早期形成的敏感的分子标志物，在凝血功能早期改变和血栓前状态时血浆TAT值即可明显升高，故血浆TAT可敏感检测早期凝血功能异常[7-8]。本研究显示，结肠癌组患者血浆TF水平显著高于对照组，同时反映体内凝血酶形成的分子标志物TAT也显著增高，说明胃肠道恶性肿瘤患者机体凝血系统处于激活状态。此外，本研究还发现肿瘤分期和分化程度为C+D期、低未分化的患者血浆TF、TAT水平分别高于A+B期、高中分化的患者，提示对恶性胃肠道肿瘤患者要注意预防高凝状态，适当应用抗纤溶药物不仅可减少临床上出血并发症的发生，还可能阻止或缓解肿瘤细胞的浸润。Ozturk等[9]发现结肠癌患者TF的表达与Dukes分期呈正相关，是肝转移的一个独立危险因素，提示TF可以作为预测结肠肿瘤肝转移的指标。这与本研究结果是一致的。

　　t-PA是纤溶系统因子，存在于血循环中，其作用是使无活性的纤溶酶原转变为有活性的纤溶酶。血浆t-PA和血浆PAI-1主要由血管内皮细胞合成储存，并释放入血液循环。血管内皮细胞受损是凝血、纤溶状态改变的始动因素[10]。t-PA及PAI-1主要反映纤溶活性变化，同时亦是反映血管内皮功能的指标。血浆t-PA及血浆PAI-1作为纤溶系统的分子标志物可以反映纤溶状态的早期改变，能够早期预测血栓形成。在血管腔表面存在着t-PA和PAI-1的动态平衡，纤溶酶原激活物t-PA介导纤溶始动，PAI-1则调节纤溶过程，t-PA和PAI-1相互制约调整和维护了正常血浆纤溶活性，当血管内皮细胞受损可使PAI-1的量增加和(或)t-PA量减少。PAI-1表达增加，t-PA表达下降，使纤溶酶活性减低，导致血管局部纤溶蛋白分解的活性降低，使纤维蛋白易于沉积，微血栓不断形成，集聚形成血栓[11-13]。资料显示在乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌患者血液t-PA含量均明显升高，且与生存期相关;有人在胰腺癌的研究中发现，过度表达的t-PA 能刺激癌细胞浸润、增殖，促进肿瘤的转移[14]。本研究通过对t-PA和PAI-l的检测显示，结肠癌患者组各指标均显著高于正常对照组，提示结肠癌患者纤溶系统亦处于激活状态。同时本研究发现C+D期、低未分化的患者血浆t-PA和PAI-l水平分别高于A+B期、高中分化的患者，提示t-PA和PAI-l在肿瘤发生局部浸润、淋巴结或远处脏器转移过程中发挥了重要作用，可以作为判断肿瘤患者预后的指标。

　　总之，结肠癌患者存在明显的凝血及纤溶机制的异常，且其变化与病情发展及预后有关。监测TF、TAT、t-PA、PAI-1等凝血与纤溶分子标志物的水平不仅是预防血栓形成及慢性DIC等凝血性疾病的有效措施，还可能成为评价肿瘤患者预后的有效指标。

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