甲状腺转录因子-1在喉癌及喉良性病变中的表达

　　作者：余文发,赵玉林,王萍,王凯　　作者单位：1.新乡医学院第一附属医院耳鼻喉科，河南 卫辉2.郑州大学第一附属医院耳鼻喉科， 河南 郑州3.新乡医学院第三附属医院功能检查科，河南 新乡

　　【摘要】 目的 研究甲状腺转录因子1(TTF1)在喉癌及喉良性病变中的表达,探讨TTF1在喉癌发生发展中的意义。方法 采用EnVison方法检测喉癌及其癌旁组织各39例、声带小结13例及声带息肉17例中TTF1的表达情况。结果 喉癌组TTF1表达强阳性率(48.7%)与喉癌癌旁组织组(12.8%)和对照组(0)比较差异均有统计学意义(P<0.01);喉癌T1N0M0T1N1M0组TTF1强阳性率(32.9%)与T2N1M0、T3N2M0组(55.6%、100%)比较差异均有统计学意义(P<0.05);T2N1M0组TTF1强阳性率(55.6%)与T3N2M0组(100%)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TTF1在喉癌中有表达,提示TTF1可能参与了喉癌的发生和发展。

　　【关键词】 甲状腺转录因子;喉癌;免疫组织化学

　　Expression of thyroid transcription factor1 in laryngeal carcinoma and benign lesion tissues　　YU Wenfa,ZHAO Yulin，WANG Ping，et al　　1.Department of Otolaryngology，the First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College，Weihui 453100,China;　　2.Department of Otolaryngology，the First Affiliated Hospital of Zhenzhou University，Zhenzhou 450052,China;　　3.Department of Function，the Third Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College，Xinxiang 453000,China

　　Abstract: Objective To investigate the expression of thyroid transcription factor1(TTF1) in laryngeal carcinoma and benign lesion tissues,and to discuss the significance of TTF1 in the development of laryngeal carcinoma.Methods The expression of TTF1 in the tissues of 39 cases of laryngeal carcinoma,39 cases of laryngeal pericarcinoma samples，13 cases of chorditis nodulosa and 17 cases of polyp of cord was detected by EnVison immunohistochemistry.Results There was significant difference in the expression of TTF1 in the tissuse of laryngeal carcinoma(48.7%),laryngeal pericarcinoma(12.8%) and control group(0).There was significant difference in the expression of TTF1 in the tissuse of T1N0M0 T1N1M0 group(32.9%),T2N1M0 group(55.6%)and T3N2M0 group(100%).Conclusion TTF1 expressed in laryngeal carcinoma tissues may be play an important role in the development of laryngeal carcinoma.

　　Key words: thyroid transcription factor1;laryngeal carcinoma;immunohistochemistry

　　喉癌严重危害人类的健康，其发病率及病死率呈上升趋势，已成为头颈部恶性肿瘤患者死亡的重要原因之一，但发生机制仍未完全明了。近年来研究发现，甲状腺转录因子1 (thyroid transcription factor1,TTF1)不仅可以在甲状腺组织中表达，也在其他一些恶性肿瘤中表达[12]。关于TTF1是否参与喉癌的发生发展，国内外极少见文献报道。作者通过检测TTF1在喉癌及喉良性病变中的表达，以探讨TTF1在喉癌发生发展中的意义。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　收集新乡医学院第一附属医院病理科1996年1月至2006年1月间确诊的原发性喉癌及其癌旁组织各39例，年龄42～73岁，平均(57.6±0.5)岁。39例喉癌病理组织学类型均为鳞癌。按TNM分期[3]：T1N0M0 21例，T1N1M0 5例，T2N1M0 9例，T3N2M0 4例。按分化程度分为3组：高分化9例，中分化16例，低分化14例。同时收集同期病理科确诊的声带小结13例及声带息肉17例为对照组，年龄26～63岁，平均(48.6±0.3)岁。

　　1.2 主要试剂

　　EnVision试剂盒、DAB显色剂及其他试剂均购自福州迈新生物技术开发公司。

　　1.3 方法

　　所有组织均用体积分数4%甲醛固定，石蜡包埋，常规切片。对所有标本进行TTF1免疫组织化学染色。染色采用EnVision二步法。主要步骤：石蜡切片常规脱蜡梯度水化，胰蛋白酶抗原修复，每张切片滴加体积分数3%过氧化氢溶液以阻断内源性过氧化物酶的活性，滴加TTF1一抗，4 ℃孵育过夜，洗片，滴加二抗(标记有辣根过氧化物酶和抗鼠免疫球蛋白的多聚体分子)，室温孵育30 min，洗片，每张切片滴加50～100 μL新鲜配制的DAB溶液显色，显微镜下观察，控制反应时间，苏木素复染，脱水、中性树胶封片。用已知甲状腺组织中阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为空白对照。

　　1.4 结果判定

　　TTF1表达结果判定按阳性表达的肿瘤细胞数占全部瘤细胞的比例分级,表达强度分为3级:(1)阴性(-)：无表达或<1%的肿瘤细胞TTF1阳性;(2)阳性(+)：1%～49%的肿瘤细胞TTF1阳性;(3)强阳性(++)：≥50%的肿瘤细胞TTF1阳性。

　　1.5 统计学处理

　　应用SPSS 11.5软件包进行统计学分析，数据差异的显著性检验采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 TTF1的表达

　　39例喉癌中TTF1强阳性表达率为48.7%;39例喉癌癌旁组织中TTF1强阳性表达率为12.8%;30例对照组(声带小结13例、声带息肉17例)TTF1无强阳性表达。喉癌组TTF1表达强阳性率与喉癌癌旁组织组、对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)，见表1。表1 喉癌组、癌旁组织组与对照组TTF1的表达 例数(略)

　　2.2 TTF1在喉癌不同TNM分期的表达

　　26例T1N0M0T1N1M0标本中TTF1强阳性表达率为32.9%，9例T2N1M0标本中TTF1强阳性表达率为55.6%，4例T3N2M0标本中TTF1强阳性表达率为100%;T1N0M0T1N1M0组TTF1强阳性率与T2N1M0、T3N2M0组比较差异均有统计学意义(P<0.05);T2N1M0组TTF1强阳性率T3N2M0组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。表2 喉癌不同TNM分期TTF1的表达 例数(略)

　　3 讨论

　　TTF1是核转录蛋白NKX2基因家族成员之一，是由371个氨基酸组成的多肽，相对分子质量38 000，由常染色体14q13的单一位点基因编码产生[4]。从神经外胚层和内胚层起源的细胞可表达TTF1，而从中胚层起源的细胞不表达TTF1[5]。近年来研究表明，TTF1在肺、甲状腺及其肿瘤中有较好表达，肺癌中非小细胞癌、小细胞癌表达分别为75%和90%,阳性率较高[6] 。喉癌组织是一种幼稚的组织，喉癌大多来源于喉内黏膜上皮，喉的黏膜上皮由内胚层分化而来,这意味着来源于喉内黏膜上皮的喉鳞癌表达TTF1在组织胚胎学上存在可能性。

　　本研究分别检测了喉癌及其癌旁组织、声带小结及声带息肉TTF1的表达情况，结果表明在喉癌及其癌旁组织中有TTF1的表达，其强阳性率显著高于声带小结及声带息肉组，提示TTF1可能参与喉癌的发生。为进一步研究TTF1与喉癌发展的关系，本研究对喉癌不同TNM分期TTF1表达的情况进行研究，结果表明， T1N0M0T1N1M0期TTF1表达强阳性率高于T2N1M0期和T3N2M0期，T2N1M0期TTF1表达强阳性率高于T3N2M0期，差异均有统计学意义，提示TTF1在喉癌发展中亦可能扮演重要角色。究其原因，可能由于TTF1参与调控许多基因的表达[7]，作为胚胎发育时组织发育的启动调控因子，常在胚胎时的肺、甲状腺、前脑的上皮表达。可能正是由于TTF1参与调控许多基因的表达，进而影响了喉癌的TNM分期。关于TTF1在喉癌中扮演的真正角色，仍需进行深入的研究。

　　【参考文献】

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