喉癌患者血清IL-6及TNF-α的含量测定及其临床意义

作者：姚俊，周慧，张月飞作者单位：广东医学院附属医院耳鼻咽喉—头颈外科， 广东 湛江 524001【摘要】  　　目的：探讨喉癌患者血清中白介素－6(IL-6)及肿瘤坏死因子(TNF－α)含量的变化及临床意义。方法：采用ELISA法测定46例喉鳞状细胞癌病人和52例正常人血清IL-6及TNF－α水平。结果：喉癌患者IL-6及TNF－α血清水平均正常对照组(P<0.01), 术后IL-6和TNF－α水平下降(P<0.05)。结论：血清IL-6及TNF－α水平可能与喉癌的发生、发展有关，测定其水平有助于喉癌诊断和临床病情观察。 【关键词】  喉癌 白介素－6 坏死因子　　The Determination and Clinical Significance of Serum IL-6 And TNF－α Level in Carcinoma of Larynx patients　　YAO Jun,  ZHOU Hui,  ZHANG Yue-fei　　(Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Guangdong Zhanjiang 524001, China)

　　Abstract： Objective： To study the change and clinical implication of tumor necrosis factor (TNF－α) and interleukin-6(IL-6) in patients with carcinoma of the larynx.  Method： Serum TNF－αand IL-6 level in 46 of laryngocarcinoma cases and 52 of normal control group were measured by ELISA. Result： Serum TNF－αand IL-6 level were signific- antly higher in the laryngocarcinoma patients than in normal control group (P<0.01), and  decreased in the patients of post-operation (P<0.01). Conclusion： The activity of serum IL-6 and TNF-αmay related with development of the laryngocarcinoma. The determination of TNF-αand IL-6 in serum could help to the diagnosis and observation of the laryngocarcinoma state.     　　Key words：  Laryngocarcinoma;  Interleukin-6(IL-6);  Tumor necrosis factor-α(TNF-α)

　　国内外肿瘤学近年来研究结果表明,白介素－6(IL-6)及肿瘤坏死因子(TNF-α)等多种细胞因子对肿瘤的发生、发展、转移以及疗效观察都具有极为重要的意义,尤其是对肿瘤患者机体免疫应答的调节起着至关重要的作用，成为肿瘤学领域研究的热点之一，测定其血清水平有助于恶性肿瘤的诊断和病情变化的判断［1］。本研究通过对喉癌患者手术前后血清中IL-6及TNF－α水平的测定,以健康人作对照，观察其变化，以此探讨其在临床上的意义。

　　1  资料与方法

　　1.1  临床资料：正常对照组52例,为本院健康查体者,男32例,女20例，年龄23～52岁,平均36.5岁，均未患有其他良恶性肿瘤。喉癌组46例,为经临床和病理证实的喉鳞状细胞癌病人,男35例,女13例,年龄45～72岁,平均59.6岁。其中声门上型15例，声门型23例，声门下型8例；其中有颈淋巴结转移者30例。按UICC(1987)头颈部肿瘤分期标准,属Ⅰ、Ⅱ期者18例,Ⅲ,Ⅳ期者28例。以上受试者均排除免疫系统疾病和感染性疾病,采血前未经任何治疗。          　　声门上型行水平部分喉切除术7例，水平垂直部分喉切除术8例；声门型行垂直部分喉切除术11例，水平垂直部分喉切除术9例，全喉切除术3例；声门下型8例均行全喉切除术。46例中行颈廓清扫23例。

　　1.2  样品的制备：受试者清晨空腹采静脉血,室温下凝血后立即分离血清,置-70℃低温冰箱保存待检。

　　1.3  细胞因子检测：应用ELISA酶联免疫检测法。IL-6及TNF－α试剂盒由美国Gengyre提供，华美生物工程有限公司代理。检测方法严格按照试剂盒附件说明书,按步骤进行实验。

　　1.4  OD值测定:应用DNM-9602G型酶标仪(北京利康达圣科技发展有限公司生产)在450nm处分别测定IL-6及TNF－αOD值，绘制IL-6及TNF－α标准曲线，根据标准曲线计算出待测样品中IL-6及TNF－α细胞因子浓度。

   　1.5  统计学处理：所有检验数据均用表示，用SPSS10.0软件进行分析，各组间血清IL-6及TNF－α水平比较采用t检验。

　　2  结果

　　2.1  喉癌组IL-6及TNF－α水平均高于正常对照组，两者比较IL-6差异显著，有统计学意义(t=43.53,P<0.01), TNF－α差异也有统计学意义(t=43.83,P<0.01)，结果见表1。

　　表1  喉癌组患者IL-6及TNF－α血清水平变化（略）

　　﹡与正常对照组比较 P<0.01

　　2.2   喉癌组患者经手术后2周检测IL-6及TNF－α，结果分别为（35.26±7.89）ng/L、(41.02±5.64)ng/L，其血清水平与术前相比明显降低(P均<0.01)，一个月后复查与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。其检测结果见表2。

　　表2 喉癌组患者术后2周及一个月IL-6及TNF－α血清水平变化（略）

　　两组相比较P>0.05

　　2.3  不同临床分期喉癌病人血清IL-6及TNF－α水平比较：Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期喉癌病人血清IL-6水平比较差异有显著性(t=2.86 ,P<0.01)，TNF－α水平比较无显著性差异(t=0.91,P>0.05)。其检测结果见表3。

　　表3  喉癌组患者IL-6及TNF－α血清水平与临床分期的关系（略）

　　与Ⅰ、Ⅱ期相比，P<0.01，△P>0.05

　　2.4  喉癌患者血清IL-6及TNF－α水平与颈淋巴结转移的关系：46例喉癌患者中有30例发生颈淋巴结转移，其血清中IL-6及TNF－α水平显著高于无淋巴结转移者(t=3.04，t=2.78，P均<0.01)，具体结果见表4。

　　表4  喉癌患者血清IL-6及TNF－α水平与颈淋巴结转移的关系（略）

　　与无淋巴结转移患者相比：△P<0.01

　　3  讨论          　　白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF－α)是由单核-巨噬细胞、内皮细胞产生的细胞因子,具有激活诱导T、B细胞、增强NK细胞杀伤靶细胞、促进吞噬等功能，同时也是机体炎症反应和一系列病理生理过程的重要介质［2］。本研究结果表明,喉癌患者血清IL-6和TNF－α水平均非常显著地高于健康人(P<0.01)。可能是由于喉癌患者存在严重的细胞免疫缺陷和含量较高的循环免疫复合物，这些因素均可刺激单核细胞、淋巴细胞、成纤维细胞及内皮细胞等产生IL-6和TNF－α。IL－6和TNF－α又作用于血管的内皮细胞，在正常情况下可起到抗感染作用,而在病理情况下，可导致病理性损伤和肿瘤的发生、发展。          　　IL－6是一种多效应细胞因子,它与恶性肿瘤的增殖、自身免疫性疾病密切相关。其作用于嗜中性粒细胞趋化、脱落、释放溶酶,加强炎症防护,促进T细胞趋化游走,加强免疫反应等。IL－6生物学功能是通过靶细胞膜上特异性受体,即IL－6R来发挥效应的。匡玉庭等研究发现IL－6/sIL－6Rα复合物具有IL－6/IL－6Rα同样的生物学功能［3］。有人用3H标记的B细胞系测定急性反应期病人损伤炎症和感染等血清中IL－6水平，结果早期IL－6水平比正常人高出2～100倍，表明IL－6在急性反应期起一定的作用。本研究结果表明,喉癌患者血清中IL－6水平升高且与病情进展有关，随着临床分期增加，血清中IL－6水平也升高，并且与颈淋巴结转移状况呈正相关，提示IL－6水平的变化特征可反映喉癌生物学行为和预后。术后由于肿瘤被切除, 诱导IL－6生成的刺激因素被消除，IL－6释放减少,血清中IL－6水平下降。Burger［4］等报道了肿瘤细胞及与肿瘤相关的巨噬细胞可释放较高含量的IL－6，肿瘤细胞在增殖、浸润或转移过程中，可能会产生较高水平的IL－6水平。因此，血清中IL－6水平上升与肿瘤负荷大小、病情进展呈正相关，IL－6水平上升可能预示着喉癌患者病情进一步恶化，或肿瘤发生转移现象，提示应采取适当的治疗手段。上述实验结果可能对临床会有一定的辅助实用参考价值［1］。

　TNF－α是细胞因子网络中重要的组成部分，参与多种生理与免疫过程，在抗肿瘤、抗病毒及免疫调节中发挥重要作用［4］。TNF－α具有免疫应答、促进细胞生长分化等多种生物学功能，适量的TNF－α对机体产生保护反应，但过量的TNF－α则对机体产生损伤反应。近年来的研究发现,TNF－α不仅可以引起实体肿瘤发生出血和缺血性坏死,还具有促进某些细胞生长的作用［5］。有研究认为，测定血清TNF水平有助于恶性肿瘤的诊断和病情变化的判断［6］。本研究发现喉癌患者血清TNF－α含量明显升高,肿瘤切除手术两周后明显下降,可能与肿瘤的自身分泌或肿瘤浸润淋巴细胞受肿瘤抗原刺激有关，术后由于肿瘤被切除,TNF－α释放减少,血清中TNF－α水平下降,机体抗肿瘤免疫功能有所增强，提示TNF－α可能在喉癌患者的肿瘤免疫中起重要作用。          　　血清TNF－α水平与恶性肿瘤临床分期的关系文献报道不一。有人报道不同分期的喉癌病人血清TNF－α水平不同，也有人报道血清TNF－α水平与临床分期无相关性［7］。本研究结果表明，Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期喉癌病人血清TNF－α水平无统计学差异,提示血清TNF－α水平对喉癌病人的病程估计可能无重要价值。TNF－α作为恶性肿瘤治疗的新手段,还需要进行深入的研究，测定血清TNF－α有助于了解机体的抗癌机制,为开展免疫治疗提供参考。          　　总之，检测喉癌患者血清中IL－6、TNF－α水平对了解其发病机理、观察病情进展及疗效均具有十分重要的价值。

【参考文献】  　 ［1］ 孙昕,段力,单丽丽.乳癌患者血清TNF2A和IL26水平观察及临床意义［J］.安徽医药,2001,5(2):118-119.

　　［2］ 吴家明.肺癌患者血清IL-6,IL-8和TNF活性测定的临床意义［J］.放射免疫学杂志,2004,17(5):354-355.

　　［3］ 匡玉庭,张志德,张学光等.乳腺癌患者白介素－6及其受体的测定和临床意义［J］.中华肿瘤杂志,1998,20(4):305-307.

　　［4］ Burger RA, Grosen EA, Ioli GR, et al. Spontaneous release of interleukin-6 by primary cultures of lymphoid and tumor cell populations purified from human over riancarvinoma［J］． Interferon cytokine Research, 1995,15(3): 255-２60.

　　［5］ 王强,冯艳梅,张欣等.喉癌患者手术前后细胞因子的动态观察［J］.临床耳鼻咽喉科杂志,2001,15(6):255-257.

　　［6］ 成丽兰,黄迪南,陈向阳,等.喉癌患者血清肿瘤坏死因子水平的动态观察及其意义［Ｊ］．实用癌症杂志,2002,17(2):202.

　　［7］ 孙彦,于秀英,刘云超，等.喉癌病人血清肿瘤坏死因子的测定［J］.青岛医学院学报,1997,33(1):38-39