依托咪酯的遗忘作用及其与GABAA受体的关系

　　作者：乔微1，周华1，裴美兰1，汤红芳1，唐 钢2，程 伟3 作者单位：(1江苏省南通市妇幼保健院麻醉科，南通226006;2淮安市第一人民医院麻醉科;3徐州医学院附属医院麻醉科)

　　【摘要】 目的：探讨依托咪酯(etomidiate，ET)的遗忘作用及其与GABAA受体的关系。方法：小鼠静脉注射(intravenous injection，iv)不同剂量的ET后，静脉注射不同剂量的GABAA受体阻断药一叶秋碱(securinine，Se)。在跳台和避暗实验中，分别观察跳台和避暗的潜伏期(latancy)及错误次数(number of errors)的变化。结果：ET能剂量依赖性地缩短跳台和避暗潜伏期、增加跳台和避暗错误次数;Se能部分拮抗以上作用。结论：ET可以产生遗忘作用，GABAA受体可能是ET遗忘作用的重要靶位

　　【关键词】 依托咪酯;GABAA受体;遗忘;一叶秋碱;麻醉;小鼠

　　Relationship between GABAA receptor and the amnesic effects which induced by etomidiate

　　QIAO Wei1，ZHOU Hua11，PEI MeiLan1，et al (1Department of Anesthesiology，Maternal and Child Health Hospital of Nantong，Nantong226006;2 Department of Anesthesiology，the First Hospital of Huai′an;3Department of Anesthesiology，Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College)

　　[Abstract] Objective:To investigate the effect of GABAA receptor on the amnesia induced by etomidiate in mice. Methods:Etomidiate was intravenously(iv) injected and securinine，a GABAA receptor antagonist，was intravenously (iv) injected after the etomidiate injection. Then two techniques including step-through test and step-down test were employed to evaluate the effects on the latency and the number of errors. Results:Etomidiate decreased the latency and increased the number of errors in conscious mice. Securinine can antagonize the effects stimulated by etomidiate. These effects above are all dose dependent.Conclusion:Etomidiate leads to amnesia. GABAA receptor may be an important target for the effect.

　　[Key words] Etomidiate;GABAA receptor;Amnesia;Securinine;Anesthesia;Mouse

　　全身麻醉包括遗忘(amnesia)、催眠(hypnosis)、肌松和抑制异常应激反应等方面的作用[1]，而遗忘作用是其诸多作用中的重要作用之一。依托咪酯(etomidiate，ET)是一种临床常用的静脉全麻药，具有起效快、时效短、对呼吸循环影响轻微等优点，但其作用机制尚不清楚[2]。研究表明ET的麻醉作用和GABAA受体有关[3-5]。本实验探讨了ET对于小鼠学习记忆的影响及其与GABAA受体的关系。

　　1 材料和方法

　　1.1 试剂及仪器 依托咪酯(江苏恩华药业集团有限公司，20071206)，用生理盐水(NS)稀释成所需浓度;硝酸一叶秋碱(securinine，Se，江苏鹏鹞药业有限公司，0704241)，用生理盐水(NS)稀释成所需浓度。

　　1.2 实验动物 昆明种小鼠，许可证号：SCXK(苏)2002-0022g;平均体重20~25 g，雌雄不拘，由徐州医学院实验动物中心提供;自由摄食饮水，实验前使动物熟悉实验室环境3天，每日8：00~12：00在隔音环境中实验。

　　1.3 分组及处理 小鼠先随机分为跳台和避暗2大组，每大组再分Se组、ET组和Se+ET组3小组。Se组分NS、Se1、2、4 mg/kg 4亚组;分别为N、A、B、组ET组分NS、ET 0.05、0.1、0.2 mg/kg 4亚组，分别为Na、b、c;ET+Se组分为ET+NS、ET+ Se1、2、4 mg/kg组4亚组，分别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，n=10。按分层随机区组设计，平衡各组小鼠平均体重比例。Se组静脉注射NS或不同剂量的Se;ET组静脉注射NS或不同剂量的ET;ET+Se组，首先静脉注射ET0.2 mg/kg，5 min后静脉注射NS或不同剂量的Se，以上注射容积均为0.01 ml/10 g体重，注射时间10 s。各组小鼠末次给药后5 min，行跳台和避暗实验。

　　1.4 跳台实验[6] 将小鼠放入反应箱内适应环境3 min，然后以36 V、50 Hz交流电给予电击。小鼠受电击，正常反应是跳回平台以躲避伤害性刺激。多数小鼠可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击后又迅速跳回平台。记录小鼠第1次跳下平台的潜伏期(Latancy)和5 min内的错误次数(number of errors)，24 h后重作测验。小鼠5 min未跳下平台，错误次数记为0次，潜伏期记为300 s。

　　1.5 避暗实验[6] 将小鼠放入反应箱中适应环境3 min，然后暗室底部铜栅通40 V、50 Hz交流电，将小鼠背对洞口放入明室，小鼠进入暗室则受到电击，记录小鼠第1次进入暗室的时间(潜伏期)和5 min内受到的电击次数，24 h后重复实验。小鼠5 min未进入暗室，错误次数记为0次，潜伏期记为300 s。

　　1.6 统计学方法 所有数据均采用■±s表示，用SPSS13.0软件进行统计学处理，采用方差分析和q检验，药物剂量与其效应做直线相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 一叶秋碱对清醒小鼠跳台、避暗潜伏期和错误次数的影响 见表1。NS组，Se1、2、4 mg/kg组的跳台、避暗的潜伏期和错误次数均相似(P>0.05)。

　　2.2 依托咪酯对小鼠跳台、避暗潜伏期和错误次数的影响 见表2。ET组，ET剂量依赖性地缩短小鼠跳台、避暗的潜伏期，增加错误次数(P<0.05，P<0.01);用药后24 h后，各组跳台、避暗的潜伏期和错误次数的差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

　　2.3 一叶秋碱对依托咪酯遗忘模型小鼠跳台、避暗潜伏期和错误次数的影响 见表4。ET+ Se组，Se剂量依赖性增加ET记忆障碍小鼠的跳台、避暗的潜伏期，减少错误次数(P<0.05，P<0.01)。用药后24 后各组跳台、避暗的潜伏期和错误次数的差异无统计学意义(P>0.05)，见表5。

　　3 讨 论

　　研究认为依托咪酯对GABAA受体的作用非常敏感。依托咪酯以浓度依赖方式增强GABA诱发电流的作用，且这种作用具有Cl-依赖性，另外依托咪酯可使微小突触后抑制电流幅度增加、时程延长，并使通道开放频率增加[7-10]。依托咪酯除了具有增强GABA的作用外，亦可直接激活GABAA受体 [11]。另有研究发现依托咪酯可以通过减少突触前膜GABA的重摄取，使突触间隙GABA含量升高，从而增强抑制性突触后电位，而对去极化诱发的GABA的释放无影响[12]。 Murugaiah等通过离体实验发现，依托咪酯以浓度依赖方式增强小鼠皮质突触体的3H-GABA 释放，说明依托咪酯除了已知的突触后作用外，还具有突触前作用[13]。

　　实验中，我们选用亚麻醉剂量的ET静脉注射，建立遗忘模型。此剂量的ET不仅有遗忘作用，且用药后动物自主活动正常，无明显的影响呼吸和循环功能，也未见动物的翻正反射消失，能够基本上排除镇静作用对本实验的干扰，使实验结果更为可靠。为了更全面地揭示静脉麻醉药的遗忘机制，我们选用了跳台和避暗二种实验方法进行研究。一叶秋碱为 GABAA受体的竞争性拮抗剂，一叶秋碱能够透过血-脑脊液屏障，故采用静脉给药。预实验显示：Se的惊厥ED50为5.1 mg/kg(3.8~6.8 mg/kg)，LD50为7.2 mg/kg (5.2~10.2 mg/kg)。单纯给予Se，小鼠的跳台、避暗潜伏期和错误次数均与NS组相似，提示Se本身对学习记忆并无影响。给予ET后，小鼠跳台、避暗潜伏期明显缩短，错误次数增多，提示ET产生了遗忘作用;Se虽可改善之，但与aCSF+NS组相比仍有差别，我们的结果与Cheng等[14] 的离体实验结果一致，提示GABAA受体是ET引起遗忘作用的的重要靶位。

　　本研究进一步提示GABAA受体是ET遗忘作用作用的重要靶位，除GABAA受体外可能还有其它作用位点，尚待进一步研究。

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