未配型兔同种异体全眼球移植情况的探究

　　作者：覃瑞，马文豪，黄灵 作者单位：(右江民族医学院附属医院眼科，广西?百色?533000 E-mail：sjjgmd@yahoo.com.cn )

　　【摘要】 目的 通过建立兔眼异体移植的动物模型，观测兔眼移植成活的情况。探讨全眼球移植过程中同种异体全眼球移植成活情况，为以后人体全眼球移植的成活作初步的研究和准备。方法 随机选取兔24只共24眼(均选择右眼)，分A、B两组，每组各12只。将A组右眼摘除(记为A1眼)，同时另一术者摘除B组右眼(记为B1眼)，将A1、B1眼对换，暂不考虑组织学配型及血型配型。观察24只移植兔眼球的成活情况。结果 相关的观测结果表明，各观测参数差异具有显著性(P<0.05)。结论 未配型兔同种异体全眼球移植未能成活。

　　【关键词】 眼移植;移植物排斥;兔;动物，实验

　　全眼球移植(whole eyeball transplantation)是将整个眼球，包括眼球、血管，神经、肌肉移植到目标动物或人体上。移植成功的瓶颈是视神经的接合及其再生，同时眼球移植的成活也是移植成功的重要因素之一，本研究率先在国内开展兔眼的同种异体全眼球移植，以了解异体眼球移植的成活情况。

　　1 材料和方法

　　1.1 实验对象 24只健康大白兔(中国家兔)，随机分两组每组12眼，每一组均取右眼，共24眼，体重1.5～2.0kg(右江民族医学院动物实验中心代购提供)，健康无眼疾，实验期间由右江民族医学院动物实验中心代养。

　　1.2 实验器材及药品 ①手术显微镜：Leica M502。②眼科显微手术器械：苏州医疗器械厂生产。③盐酸氯胺酮注射液100mg/2ml。④盐酸氯丙嗪注射液50mg/2ml。⑤直径0.5mm硬硅胶管。⑥Schiotz眼压计。⑦托吡卡胺眼液

　　1.3 实验分组 术前分A、B两组，每组12只兔12眼，均为右眼，A组术前为A眼，术后移植到B组后为A1眼。同样，B组术前为B眼，术后移植到A组后为B1眼。术后比较A和A1的观察指标，B和B1的观察指标。

　　1.4 麻醉方式 盐酸氯胺酮和盐酸氯丙嗪等量混合，以50mg/kg作腹腔注射。

　　1.5 监测指标 麻醉成功后，固定兔四肢及头部，评价角膜的透明度，分为透明(4分)、轻度混浊(3分)、中度混浊(2分)、重度混浊(1分);Schiotz眼压计测量眼压;托吡卡胺眼液散开瞳孔，评价晶状体的透明度，分为透明(4分)、轻度混浊(3分)、中度混浊(2分)、重度混浊(1分);观察眼底情况，动、静脉大小与术前大致相同为好(4分)，术前动、静脉管径为4分，1/2原动、静脉直径<次好<原动、静脉直径(3分)，1/3原动、静脉直径<差<1/2原动、静脉直径(2分)，无供血为最差(1分)。

　　1.6 实验方法 麻醉成功后，固定兔四肢及头部，先取右眼球，沿角膜缘剪开结膜，钝性分离结膜和巩膜，暴露6条外直肌，距附着点10mm处剪断直肌，两断端3/0丝线结扎留用，结扎保留至少两条涡静脉，并于移植后吻合，向后分离至视神经，10mm处剪断，视神经两断端的中央动、静脉插入直径0.5mm硬硅胶管，3/0丝线结扎留用。眼球摘除完毕后。立即将A组右眼球随机植入B组右眼，视神经两断端的视网膜中央动、静脉插入直径0.5mm硬硅胶管后，显微镜下10-0角膜尼龙线吻合视网膜中央动、静脉，吻合视神经，吻合涡静脉至少两条，吻合4条眼外肌中的睫状前动脉，缝合角膜缘处结膜。术后每天静脉推注头孢噻肟钠0.25g/只。术后用环孢素A加硫唑嘌呤加强的松三联抗排斥方案，环孢素A起始量6～7mg/(kg·d)，硫唑嘌呤起始量2.0～3.0mg/(kg·d)，强的松起始量25～30mg，每日1次[1]。术后第7天观察眼球各实验指标。

　　1.7 移植成活判定标准 术后第7天，移植眼供血好，结膜色鲜红，角膜透明，眼压仍在兔的正常范围，本实验Schiotz眼压计测量眼压(2.05±0.48)kPa，未散瞳，8Am检测;有报道[2]兔眼压为(1.31±0.21)kPa～(2.74±0.83)kPa，晶状体透明，眼底视网膜无水肿，动脉、静脉管径及颜色较术前无明显改变。

　　1.8 统计方法 用SPSS 13.0作配对资料秩和检验，眼压统计用t检验。

　　2 结果

　　2.1 术后第7天各移植眼情况 无一眼成活，各移植眼均已坏死，萎缩。由于角膜已经混浊，其晶状体、眼底动、静脉情况通过解剖来了解。

　　2.2 术后第7天各眼相关指标统计分析 见表1，表2。表1 术后第7天A与A1比较 (共12眼)表2 术后第7天B 与 B1比较 (共12眼)

　　3 讨论

　　目前，国内外关于全眼球移植的文献非常少，已有研究在兔身上首次施行双眼互换研究，结果表明，兔自体全眼球移植能够有效的成活[3]。尚未见报道有异体兔全眼球移植的相关文献，究竟是不可行，还是前景不乐观，目前尚未明确，但相关研究说明自体眼球能移植成活，说明，血液供应不是问题，异体移植的最大障碍——排斥反应，才问题的根本。目前，排斥反应的临床常见原因，主要是组织相容性，血型的相容性，从而发生了宿主抗移植物反应及移植物抗宿主反应，在兔眼自体移植成活的基础上，我们进行的异体移植，首先不考虑其组织配型及相关配型，如人角膜移植一样，直接进行全眼球的移植。

　　研究的结果表明，术后第7天，A、B两组无一眼球成活，角膜已经混浊，眼球萎缩变小，眼压明显低，结膜暗黑色，巩膜血供几乎停滞。解剖发现，术眼晶状体混浊、水肿，眼底动、静脉血管明显变细，最终结果是眼球失去血供，不能成活。2009年10月份有报道，英国学者利用了血管细胞膜片箝制技术，成功保障了移植兔子子宫的血液供应，从而完成了兔子宫的移植，具体细节尚未公开，但血管细胞膜片箝制技术是我们在全眼球移植中非常值得了解的技术，在以后我们开展的兔全眼球异体移植中，意义非凡。另外，进一步的研究必需考虑到细胞的组织相容性、血液的配型，才能有更多机会取得全眼球移植同种异体的成活。

　　更进一步的研究目标，是眼球移植后，视神经及相关神经的接合和功能的恢复，才使得全眼球移植真正具有意义，国内已经有学者对视神经的夹伤作了初步的研究，研究表明，蛇毒神经生长因子能够促进视神经的修复及再生[4]。国外有学者研究表明，光感受器前体细胞移植后，在视网膜分化出了完整的光感受器细胞并能很好地整合到宿主，同时瞳孔出现了光反射[5]!还有，在自体移植中，国外在兔视网膜色素上皮细胞上作了研究，用于治疗年龄相关性黄斑变性，结果移植后的视网膜色素上皮生长良好，并出现了瞳孔光反射[6]。但可惜的是，在眼的相关支配的神经中、动眼神经、三叉神经、滑车神经，外展神经，它们的接合及再生尚未见可参考的报道。

　　因此，眼球自体及异体移植的成活，只是一小步，更多的难题，需要更深入的研究以及多样技术的进步，才有机会得到更大的突破。

　　【参考文献】

　　[1] Ai Qin Zhang, Guo Yi Wei. The Estimate in Clinical Application in Immune Depressant Utend Organ-graft Refection [J]. China Pharmacy,2008,19(2):140-141.

　　[2] QUAN Haiying, BO Xuefeng, LIU Jinghua, et al. In Vivo Monitoring the Intraocular Pressure of Anterior Chamber in Normal Rabbits [J]. JOURNAL OF BLOMEDICAL ENGLNEERLNG RESEARCH，2008,27(4)：251-253.

　　[3] 覃瑞，马文豪，黄灵.兔自体全眼球移植成活情况的研究[J].中国现代医学杂志，2010，20(5)：785-787.

　　[4] TANG Xiu-Wu, LIU Jin-Hua, WANG Ying, et al .Electron microscope observation of the neuroprotective effects of venom nerve growth factor on retinal ganglion cells after optic nerve crush in rat [J]. RECENT ADVANCES IN OPHTHALMOLOGY,2006,26(5)：328-330.

　　[5] MacLaren RE, Pearson RA. Retinal repair by transplantation of photoreceptor precursors [J]. Nature,2007，444(7116):203-207.

　　[6] Petersen J, Ritzau-Tondrow U, Hoerauf H, et al. Autologous translocation of large retinal pigment epithelium choroid patches in age-related macular degeneration [J]. Klin Monatsbl Augenheilkd,2008,225(4):286-291.