不同剂量四氧化二氮对大鼠多焦视网膜电图的影响
发表时间：2010-02-02 浏览次数：574次
不同剂量四氧化二氮对大鼠多焦视网膜电图的影响作者：仇长宇 作者单位：解放军306医院 眼科，北京100101 【摘要】 目的 研究大鼠在不同剂量的航天器推进剂四氧 化二氮（N2O4）染毒后的多焦视网膜电图（multifocal electroretinogram，mfERG）改变，从而为航天试验事故的中毒防治工作提供客观依据。方法 正常雄性Wistar大鼠，按不同的剂量，在相同的时刻将大鼠用不同剂量的N2O4溶液进行腹腔注射染毒，共分三组：实验1组（n=10），用7.5 mg N2O4染毒；实验2组（n=8），用15 mg N2O4染毒；对照组（n=6），用生理盐水行腹腔注射。在晚上固定的时间进行苯巴比妥钠溶液腹腔注射麻醉及多焦视网膜电图检查。用Microsoft Excel自带的统计软件对数据进行分析。结果 7.5 mg染毒后1 h组及15 mg染毒后1 h组的大鼠与正常大鼠的mfERG的总和波及各环b波的潜伏期的差异具有显著性；各组染毒大鼠与正常大鼠mfERG的总和波及各环b波的波幅值的差异均无显著性。7.5 mg组与15 mg组之间的mfERG的总和波及各环b波的潜伏期的差异具有显著性；而两组之间波幅值的差异无显著性。结论 N2O4能够导致大鼠多焦视网膜电图发生显著改变，而其对大鼠多焦视网膜电图潜伏期的影响更为明显。本研究为航天试验事故中N2O4中毒引起的视网膜功能损害的防治及进一步研究提供了客观的依据。 【关键词】 多焦视网膜电图 鼠 氧化二氮 四氧化二氮（N2O4）是军事及商业航天器使用的推进剂之一，N2O4中毒是航天试验事故救护的一个重要方面，有关N2O4中毒的全身救护的研究已经有很多报道，但是，有关N2O4中毒的视网膜及视神经功能损伤及预后估计方面的相关研究少见报道。多焦视网膜电图（multifocal electroretinogram，mfERG）是临床诊断和研究视网膜疾病的重要方法之一[1]。大鼠是比较常用的实验动物，为了科研及临床工作的需要，我们研究了N2O4中毒大鼠的mfERG改变情况，现将结果报告如下。1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 动物 Ⅱ级雄性Wistar大鼠(北京实验动物中心提供)，体重(200±20)ｇ，暴露于自然光明、暗交替照射及室温条件下，给予充足清洁饮水、摄食。实验组为两组：实验1组10只大鼠，用7.5 mg N2O4溶液进行腹腔注射染毒；实验2组8只大鼠，用15 mg的N2O4溶液进行腹腔注射染毒（其中有2只大鼠在注射后死亡，所以实际实验动物为8只）。所有实验组动物均在染毒后1 h行多焦视网膜电图检查。对照组6只大鼠，用同样体积的生理盐水行腹腔注射作对照，所有动物均在晚上固定的时间进行麻醉及视觉电生理检查。 1.1.2 仪器 重庆医疗设备有限公司生产的国特ＧＴ2000ＮＶ视觉电生理检测仪，配用21英寸彩色 显示器(SAMSUNG SyncMaster 1100P)，最大亮度140 cd/m2，分辨率640×480，对比度96%，刷新频率127 Ｈｚ。 1.2 方法 1.2.1 记录参数 刺激图形采用同心圆形刺激图形，刺激单元数63个，最大视角29.75°，第1环到第5环各面积比为1∶11∶20∶49∶105。各层的视角分别为4.09°，10.79°，15.57°，21.80°，29.75°，变形指数为1.0，刺激时亮度140 cd/m2，波形时间142 ms，采样频率1 ｋＨｚ，放大器放大倍数4万，通频带1～ 75 Ｈz，分16个循环记录mfERG一级反应，每个循环记录47 ｓ。刺激颜色光为白光。 1.2.2 记录方法[2-3] 取暗适应2 ｈ的大鼠(染毒后1 h检查的大鼠是在暗适应期间进行腹腔注射染毒)，苯巴比妥钠溶液0.8 ｍl/ｋｇ腹腔注射麻醉，麻醉后固定于一个可以三维移动的动物实验台上。5 ｇ/Ｌ托品酰胺散瞳，滴加10 ｇ/Ｌ甲基纤维素后安放电极，其中记录电极为自制环形银电极，电极固定于大鼠左眼角膜缘处，针灸针改制的参考电极和地极，分别置于被检眼同侧颊部和尾部皮下。使动物的角膜缘平面与荧光屏平行，角膜顶点位于刺激野中心正前方，并且保证与刺激野中心距离为20 ｃｍ，然后进行记录。 1.2.3 数据采集 总和反应数据：对ａ波和ｂ波的潜伏期(ms)、幅值(μＶ)数据进行分析。环形野分为以眼后极部为中心同心排列的5个环形，对ｂ波的潜伏期(ms)、幅值(μＶ)的数据进行分析。 1.2.4 统计学方法 使用Microsoft Excel自带的统计软件对数据的均值进行t检验，P值均取0.05为界。2 结果 2.1 染毒大鼠与正常大鼠mfERG的总和波及各环b波的潜伏期的差异 将不同剂量的N2O4染毒的大鼠的mfERG的总和波及各环b波的潜伏期与正常大鼠mfERG的总和波及各环b波的潜伏期的差异用t检验方法进行比较，结果发现：每只大鼠腹腔注射7.5 mg N2O4染毒后1 h及每只大鼠腹腔注射15 mg N2O4染毒后1 h的大鼠与正常大鼠mfERG的总和波及各环b波的潜伏期的差异具有显著性（见表1）。 2.2 染毒大鼠与正常大鼠mfERG的波幅值的差异 将不同剂量的N2O4染毒的大鼠的总和波及各环b波的波幅值与正常大鼠mfERG的总和波及各环b波的波幅值的差异用t检验方法进行比较，结果发现：每只大鼠腹腔注射7.5 mg N2O4染毒后1 h及每只大鼠腹腔注射15 mg N2O4染毒后1 h的大鼠与正常大鼠mfERG的总和波及各环b波的波幅值的差异均无显著性（见表2）。 2.3 不同剂量的N2O4染毒大鼠的mfERG差异的比较 将每只大鼠腹腔注射7.5 mg N2O4染毒后1 h及每只大鼠腹腔注射15 mg N2O4染毒后1 h的大鼠的mfERG的总和波及各环b波的潜伏期及波幅值的差异用组间差异的t检验方法进行比较，结果发现：7.5 mg组与15 mg之间的mfERG的总和波及各环b波的潜伏期的差异具有显著性；两组之间波幅值的差异无显著性（见表1和见表2）。3 讨论 mfERG是 1990年前后由Sutter等[4]提出的一种新的电生理检查技术 ，它是评价后极部视网膜以及黄斑区视功能的比较理想的工具[1]。 该实验发现腹腔注射7.5 mg N2O4染毒后1 h组及腹腔注射15 mg N2O4染毒后1 h组的大鼠与正常大鼠的mfERG的总和波及各环b波的潜伏期的差异具有显著性；表明7.5 mg及15 mg N2O4染毒均对大鼠mfERG总和波及各环b波的潜伏期具有明显的影响[5]。 而染毒大鼠与正常大鼠mfERG波幅值差异的检验显示：各组染毒大鼠与正常大鼠mfERG的总和波及各环b波的波幅值的差异均无显著性。这表明N2O4对大鼠mfERG的波幅值的影响相对不明显。 不同剂量的N2O4染毒大鼠的mfERG差异的比较显示：7.5 mg组与15 mg组之间的mfERG的总和波及各环b波的潜伏期的差异具有显著性；而两组之间波幅值的差异无显著性。表明不同剂量的N2O4对大鼠mfERG的影响程度亦不同，而且其差异主要表现在对mfERG的总和波及各环b波的潜伏期的影响方面[2-4，6-7]。 通过实验发现，N2O4腹腔注射染毒可导致大鼠多焦视网膜电图发生显著改变，而其对大鼠多焦视网膜电图的潜伏期的影响更为明显。表明N2O4腹腔注射染毒主要引起实验动物的视觉电活动的传导时间的延长，而且其影响是与染毒N2O4的剂量有关，当然也明显受到染毒后恢复时间的影响[8]。本研究为航天试验事故中N2O4中毒引起的视网膜功能损害情况提供了客观的实验数据，希望能够对其中毒的防治及进一步研究提供实验支持。【参考文献】 [1] 余敏忠. 多焦视网膜电图的研究进展及其临床应用[J]. 眼视光学杂志，2001，3（3）：189-192. [2] 石力，张作明，李莉，等. 正常昆明小鼠不同颜色光多焦点视网膜电图特点[J]. 第四军医大学学报，2003，24(18)：1717-1719. [3] 顾永昊，张作明，龙潭，等. 正常SD大鼠多焦闪光视网膜电图特性[J]. 眼科研究，2003，21（2）：166-168. [4] Sutter EE， Vaegan. Lateral interaction component and local luminance nonlinearities in the human pattern reversal ERG[J]. Vision Res，1990，30(5):659-671. [5] 丁振强，张作明，顾永昊，等. 体温变化对正常大鼠视网膜电图的影响[J]. 眼视光学杂志，2006，8（1）：29-31. [6] 陈长征，吴乐正，吴德正. 视杆细胞多焦视网膜电图记录条件及其敏感性研究[J]. 眼视光学杂志，2004，6（3）：185-188. [7] 郑海华，李瑾，韩晓晖，等. 正常眼多焦视网膜电图特征的初步探讨[J]. 眼视光学杂志，2002，4（2）：72-74. [8] 仇长宇，胡莲娜，李建中,等. 大鼠四氧化二氮中毒后多焦视网膜电图改变[J]. 国际眼科杂志，2007，7（2）：409-410.
