Survivin和VEGF在尖锐湿疣中的表达及其相互关系

　　作者：卢淑娇,李秉煦　　作者单位：温州医学院附属第一医院 皮肤科，浙江 温州 325000

　　【摘要】目的 ：探讨凋亡抑制基因生存素(Survivin)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在尖锐湿疣(CA)组织中的表达情况及其相互关系。方法 ：免疫组化法检测51例CA组织、15例正常皮肤组织中Survivin及VEGF蛋白的表达情况。结果：Survivin和VEGF在CA及正常皮肤组织中的阳性率分别为60%(34/51)、78.4%(40/51)和6.7%(1/15)、26.7%(4/15)。CA组织中Survivin和VEGF表达的阳性率与正常对照组比较差异均有显著性，且CA中两者的阳性率呈明显的正相关(P <0.01)。结论 ：Survivin和VEGF与CA的发生、发展密切相关，且两者在CA中的表达具有一定的协同性。

　　【关键词】 生存素;血管内皮生长因子;尖锐湿疣

　　Expression and correlation of Survivin and VEGF in condyloma acuminatum LU Shu-jiao，LI Bing-xu. Department of Dermatology，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College，Wenzhou， 325000

　　Abstract: Objective: To measure the expression and to determine the correlation of Survivin and vascular endothelial growth factor (VEGF) in the lesions of Condyloma Acuminatum (CA). Methods:Survivin and VEGF were measured with immunohistochemical technique in 51 cases of CA and 15 specimens of normal skin. Results: The expressions of Survivin and VEGF in CA were 60% (34/51) and 78.4% (40/51)，respectivly，in normal skin were 6.7% (1/15) and 26.7% (4/15)(both P <0.01). There was strong positive relation ship between Survivin and VEGF in CA (x2=17.5，P <0.01). Conclusion: Survivin and VEGF may play important roles in the development of CA，and their effect in CA is synergetic.

　　Key words: Survivin;vascular endothelial growth factor;condyloma acuminatum

　　尖锐湿疣(condyloma acuminata，CA)临床上增生快，治疗后常易复发，且部分病例有转化为恶性肿瘤的可能，因而日益受到人们重视。CA的发生机制至今尚未完全明了，细胞凋亡和增殖异常可能是其重要机制之一。生存素(Survivin)是近年研究发现的最强的凋亡抑制因子，并与细胞增殖和血管生呈正相关。血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前已知的最强有力的血管生成因子，在尖锐湿疣血管形成中起关键作用。本研究通过免疫组化法检测Survivin与VEGF蛋白在CA中的表达，探讨Survivin与VEGF表达在CA发生、发展中的作用及其相互关系。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 标本来源及处理：51例CA患者均来自我院皮肤科门诊，符合卫生疾病防疫司制订的诊断标准，所有患者就诊前1个月内均未接受抗病毒治疗，未用免疫调节剂。15例外科手术切除的生殖器部位正常皮肤作为对照组，所有标本离体后迅速经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片。

　　1.1.2 主要试剂：鼠抗人即用型VEGF单克隆抗体、兔抗人即用型Survivin多克隆抗体、DAB显色试剂盒、PBS(0.01 mol/L，pH7.4)磷酸盐缓冲液(粉剂)、柠檬酸抗原修复缓冲液(粉剂)。

　　1.2 方法 采用免疫组织化学二步法，柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复，分别检测标本中VEGF、Survivin蛋白的表达情况，实验过程严格按照说明书操作。阳性对照：以购买的阳性片免疫组化染色结果为阳性对照;阴性对照：以PBS替代第一抗体为阴性对照。

　　1.3 结果判定标准 免疫组化切片在光镜下按统一放大倍数(×400倍)进行观察，Survivin以胞浆内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性，VEGF以胞核染为棕黄色或棕褐色者为阳性，阳性细胞率 <5%者为阴性表达(-)，5%～25%者为低表达(+)，25%～50%之间者为中等表达(++)，≥50%者为高表达(+++) 。

　　1.4 统计学处理方法 采用x2检验。

　　2 结果

　　2.1 Survivin在CA及正常皮肤组织中的表达Survivin在CA组织中表达多为胞浆型，阳性细胞分布于表皮各层，为灶状或弥漫性分布(见图1);正常皮肤组织中为阴性或低表达(见图2);阳性率分别为60%(34/51)、6.7%(1/15)，两组表达率差异有显著性(x2=16.75，P<0.01，见表1)。

　　2.2 VEGF在CA及正常皮肤组织中的表达 VEGF在CA多为中、高强度表达 ++～+++，阳性颗粒位于细胞核，阳性细胞在增生上皮的基底层、棘层、颗粒层均有表达(见图3)。在正常皮肤组织中亦有部分表达，主要分布在表皮基底层(见图4)。VEGF在CA中的阳性率为78.4%(40/51)，正常皮肤组织为26.7%(4/15)，两组表达率差异有显著性(x2=13.98，P<0.01，见表1)。

　　2.3 Survivin与VEGF在CA中表达的关系 CA组中Survivin与VEGF蛋白阳性率之间呈明显正相关(x2=17.75，P <0.01，见表2)。

　　3 讨论

　　CA临床上生长快，易复发，部分有恶变倾向，可能与CA存在细胞凋亡异常有关，一些与凋亡有关的基因在CA中有异常表达。Survivin是近年研究发现的IAP家族新成员，位于染色体17q25，编码142个氨基酸序列，是迄今发现最强的凋亡抑制因子[1]。Survivin在成人正常的子宫内膜、肾上腺髓质及睾丸、甲状腺、胎盘中有部分表达或低表达，在多种恶性肿瘤中高表达，伴随明显的凋亡抑制，并与bcl-2、P53等凋亡调控基因密切相关[2-3]。也有研究表明Survivin与CA中HPV E6 mRNA的表达水平呈显著正相关关系。而HPV的肿瘤原性蛋白E6和E7是引起上皮细胞增生，导致CA发生的关键[4]。本研究显示Survivin在CA和正常皮肤组织中的阳性率分别为60%(34/51)和6.7%(1/15)，两组表达率差异有显著性(x2=16.75，P <0.01)。与国内林云等[5]报道一致，提示Survivin与CA的发生发展密切相关，其作用可能通过抑制角质形成细胞凋亡，促进其上皮细胞增殖来实现。

　　VEGF是Senger等在1983年发现，是目前已知的最强有力的血管生成因子。VEGF是内皮细胞的有丝分裂原，由某些肿瘤细胞分泌，并与血管内皮细胞受体结合，诱导内皮细胞的生长，对增加血管的通透性及促进新生血管的形成有重要作用，是目前发现的促进肿瘤血管形成的最重要的促进因子，与肿瘤生长、浸润、转移的发展过程有着极其密切的联系[6]。表皮细胞的过度增殖、真皮毛细血管增多并伴有管腔扩张是CA显著的病理学特征。本研究显示VEGF在CA和正常皮肤组织中的阳性率分别78.4%(40/51)，和26.7%(4/15)，两组表达率差异有显著性(x2=13.98，P <0.01)，提示VEGF可能和CA的增殖复发有关，并且VEGF可能进一步加剧皮损区局部免疫抑制，并促进皮损组织增生、增殖或皮损范围扩大[7]。

　　Survivin和VEGF的表达存在着一定的相互联系，同时已被证实在多种肿瘤的发生、发展中起到了协同作用[3]。Mesri等[8]研究发现Suvivin和VEGF一起参与调节肿瘤血管形成。VEGF的抗凋亡活性由内皮细胞表达的Surivin介导，而VEGF存在是Surivin的作用的必需条件。本实验中CA组织中Survivin和VEGF表达的阳性率两者之间呈明显的正相关(P <0.01)。与国内外研究发现相一致。推测CA的发生和发展与抑制角质形成细胞凋亡的Survivin和促进血管生成的VEGF均密切相关。在临床上进一步开发诱导细胞凋亡及抑制细胞增殖和血管增生的药物，为CA的治疗提供了一条新思路。

　　【参考文献】

　　[1] Ambrosini G, Adida C, Altieri DC,et al. A novel anti-apoptosisgene Survivin,expressed in cancer and lymphoma [J].NatureMed,1997,3(8):917-921.

　　[2] 褚文炎,黄冠成,李伟华. Survivin在食管鳞状细胞癌中的表达及其与bcl-2,bax表达的相关性[J]. 温州医学院学报,2007,37(4):369-371.

　　[3] 宋和存,金丽, 李慧. 卵巢原发癌和转移癌组织中VEGF上调对Bcl-2和Survivin表达影响的相关性研究[J]. 中华肿瘤防治杂志,2008,15(5):371-373.

　　[4] 刘凤英,徐晓明,刘毅智,等. 子宫颈癌组织中人乳头状瘤病16 E6mRNA表达与 survivin蛋白表达的相关性[J]. 中华妇产科杂志, 2005,40(9):627-630.

　　[5] 林云,涂亚庭,张丽霞,等. Survivin、PCNA在尖锐湿疣中的表达及其相互关系[J].皮肤病与性病,2006,28(1):7-9.

　　[6] Maeda K,Chung YS,Ogawa Y,et al.Prognostic value of vascularendothelial growth factor expression in gastric carcinoma[J].Cancer,1996,77:858-863.

　　[7] 刘雯蓓,马小玲 ,季必华,等.血管内皮细胞生长因子在尖锐湿疣皮损中的表达[J].中国皮肤性病学杂志,2004 ,18( 6):331-335.

　　[8] Mesri M,Morales-Ruiz M,Ackermann EJ,et al. Suppression of vascular endothelial growthfactor-mediated endothelialcell proteition by Survivin targeting[J].Am J Patho1,2001,158(5):1752-1765.