阿维A联合窄谱中波紫外线对寻常型银屑病皮损中Bcl-2、Caspase-3、Survivin的调节作用

　　作者：秦兰英,邢卫斌,叶文静,赵子申　　作者单位：河北省沧州市人民医院皮肤科

　　【摘要】 目的：探讨阿维A联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)在寻常型银屑病角质形成细胞凋亡中的可能作用。方法　20例正常皮肤组织，30例寻常型银屑病患者给予阿维A联合NB-UVB治疗，疗程8周，取治疗前后标本，用免疫组化方法检测正常皮肤及治疗前后皮损的Bcl-2、 Caspase-3、 Survivin的表达情况，并进行统计学分析。结果　和正常皮肤比较，寻常型银屑病皮损中Bcl-2低表达，Caspase-3、 Survivin高表达(P<0.01)，治疗后Bcl-2表达上调，Caspase-3、Survivin表达下调(P<0.01)，三者均有向其在正常组织表达状况转化的趋势。结论　阿维A联合NB-UVB可能通过调节Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达而调节角质形成细胞的凋亡达到治疗目的。

　　【关键词】 寻常型银屑病;阿维A;窄谱中波紫外线;Bcl-2;Caspase-3;Survivin

　　银屑病是一种多基因遗传性皮肤病，具体发病机制不明，治疗困难，易复发。临床中阿维A联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)是治疗银屑病的常用方法，且疗效显著。本研究应用免疫组化方法检测寻常型银屑病经阿维A联合NB-UVB治疗前后皮损中Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达，以期探讨上述治疗方法在寻常型银屑病角质形成细胞凋亡调节中的可能作用。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料

　　30例寻常型银屑病患者，男18例，女12例;病程1个月～10年，均来自我科门诊及病房，均经病理证实诊断且无治疗禁忌症。治疗前取标本并固定、包埋。给予阿维A (方希，重庆华邦制药股份有限公司)联合NB-UVB治疗，口服阿维A 30 mg/d，病情好转后改为10～20 mg/d，同时患者接受311 nm NB-UVB治疗(SS-03B型紫外线光疗仪，上海希格玛高技术有限公司)，皮损处照射，初始剂量为0.15 J/cm2，每周2次，每次剂量递增0.03 J/cm2，最大剂量达0.8 J/cm2。8周后环钻取治疗后皮损标本，甲醛固定，石蜡包埋。对照组20例皆取自我院整形外科手术切除的正常人皮肤。

　　1.2　试验试剂

　　鼠抗人多克隆抗体Bcl-2、Caspase-3 ，兔抗人多克隆抗体Survivin，SP免疫组化染色试剂盒(即用型)及DAB显色剂等。

　　1.3　检测方法

　　采用SP免疫组化法进行检测，按产品使用说明书操作，二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素复染，脱水，透明，封片后光镜下观察并摄片。用乳腺癌组织做阳性对照，阴性对照滴加PBS液代替一抗。

　　1.4　结果判定

　　切片标本中可见胞浆或胞核内出现棕黄或棕褐色均匀分布的颗粒状沉积物为阳性细胞，Bcl-2蛋白阳性反应均定位在细胞核;Caspase-3阳性反应定位在细胞浆及细胞核内;Survivin蛋白阳性反应均定位在细胞浆及细胞核内。阳性细胞计数以在40×10倍显微镜下，每一切片取5个不同视野，计数平均每一高倍视野中的阳性细胞数列入分析[1]。

　　1.5　统计学分析

　　应用SPSS 11.5统计软件，计量资料以x-±s表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　与正常组织比较，寻常型银屑病治疗前皮损中Bcl-2低表达(t=39.884，P=0.000)，Caspase-3(t=50.225，P=0.000)、Survivin(t=21.434，P=0.000)呈高表达;阿维A联合NB-UVB治疗后寻常型银屑病皮损中Bcl-2表达由治疗前(6.20±1.63)上调至治疗后(12.23±2.06)(t=14.39，P=0.000)，Caspase-3表达由治疗前(21.07±3.14)下调至治疗后(10.07±2.13)(t=22.83，P=0.000)，Survivin表达由治疗前(22.97±3.03)下调至治疗后(12.63±2.61)(t=16.76，P=0.000)。治疗前后3种蛋白的表达情况。经治疗PASI评分由治疗前(14.26±3.48)降至治疗后(4.12±1.53)，差异有统计学意义(t=14.628，P=0.000)。　阿维A治疗前后皮损中3种蛋白表达比较　　治疗前Bcl-2低表达 (SP×400),　治疗后Bcl-2表达上调(SP×400)   治疗前Caspase-3高表达(SP×400),　治疗后Caspase-3表达下调(SP×400)

　　3　讨论

　　目前认为，Caspase家族、Bcl-2基因家族是凋亡信号调控图5　治疗前Survivin高表达(SP×400),图6　治疗后Survivin表达下调(SP×400)中的2个关键因素，Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员。有研究表明Bcl-2蛋白抑制细胞凋亡，延长细胞的生存时间，而不能促进细胞增殖;Caspase-3是细胞凋亡过程中的主要效应因子; Survivin具有抑制凋亡和促进细胞有丝分裂的作用。

　　维甲酸能够诱导多种肿瘤细胞凋亡，调节肿瘤细胞的生长、分化，具有显著抗肿瘤作用[2,3]。阿维A主要基于对细胞增殖和分化的调控作用，能影响核苷酸转录过程，抑制DNA合成和细胞增殖[4]。文献报道，全反式维甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)作用于人食管癌及胰腺癌细胞株后，细胞株的生长被抑制的同时，Survivin的表达均下调[5,6]。近年来， NB-UVB被广泛地应用于临床治疗白癜风、银屑病、特应性皮炎及其它皮肤病，并取得了较好的疗效。表皮的黑素细胞、角质形成细胞均是NB-UVB辐射的主要靶细胞。NB-UVB照射后可使正常皮肤发生角化不良、棘层肥厚、海绵形成、炎症细胞浸润，这些表明NB-UVB照射可影响角质形成细胞的增殖和分化[7]。

　　本研究发现，寻常型银屑病经阿维A联合NB-UVB治疗后Bcl-2表达上调，Caspase-3、Survivin表达下调。治疗后Bcl-2表达增高，延长了角质形成细胞的生存期，Caspase-3表达下调，抑制了角质形成细胞的凋亡，从而使寻常型银屑病皮损的表皮通过时间延长，达到治疗效果;经治疗Survivin表达的下调，抑制了角质形成细胞异常的有丝分裂，减少角质形成细胞增殖。

　　由此推测Bcl-2、Caspase-3、Survivin在寻常型银屑病的发病中可能起一定作用，阿维A联合NB-UVB可能通过调节Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达来调节角质形成细胞的凋亡而达到治疗目的，由于病例数有限，其机制有待进一步研究。

　　【参考文献】

　　1　周利平，杨木兰，江涛，等.银屑病患者Fas及Bcl-2的表达及中药的作用.中华皮肤科杂志，2002,35：146-147.

　　2　Li M， Song S，Lippman SM，et al.Induction of retinoic acid receptor-beta suppresses cyclooxygenase-2 expression in esophageal cancer cells.Oncogene,2002,21：411-418.

　　3　Barna G， Sebestyén A， Weischede S，et al.Different ways to induce apoptosis by fenretinide and all-trans-retinoic acid in human B lymphoma cells.Anticancer Res,2005,25：4179-4185.

　　4　王广进，张迪展，王成山.芳维甲酸乙酯联合雷公藤治疗严重银屑12病例疗效观察.皮肤病与性病，2003,25：1.

　　5　路太英，杨成梁，卢红，等.全反式维甲酸对人食管癌细胞生长及Survivin基因表达的影响.山东医药，2007,47：30-32.

　　6　骆霞岗，苗毅.全反式维甲酸对人胰腺癌细胞生长及Survivin基因表达的影响.南京医科大学学报(自然科学版),2006,26：389-392.

　　7　Sitailo LA，Tibudan SS，Denning MF.Activation of Caspase-9 is required for UV-induced apoptosis of human keratinocytes.J Biol Chem,2002,31：277：19346-19352.