金黄色葡萄球菌临床分布及耐药性检测分析

金黄色葡萄球菌是院内感染和社区获得性感染(CAI)的重要病原菌之一［1］,而MRSA其多药耐药性和交叉耐药性表现更为复杂,感染率、耐药性的比例逐年上升,在重症监护室(ICU)、呼吸科、外科等此问题显得更加严重，尤其是重症监护室(ICU)。因此了解金黄色葡萄球菌感染的临床分布、构成比和耐药状况,对指导临床治疗有着重要的意义。现报告如下。　　　　1材料与方法1.1材料1.1.1抗菌药物：头孢噻利、万古霉素、利奈唑胺、头孢西丁、呋喃妥因、利福平、复方新诺明、四环素、苯唑西林、克林霉素、庆大霉素、氨苄西林/舒巴坦、头呋辛钠、左旋氧氟沙星、莫西沙星、头孢唑林、氯洁霉素、红霉素、青霉素G等药敏纸片及MH琼脂均购自英国OXOID公司，β-内酰胺酶测定试剂均为biMe’rieux公司产品。1.1.2菌株：2010年1月~2010年12月期间确诊为医院感染，细菌学检查分离培养出金黄色葡萄球菌137株,MRSA 67株,均由VITEK-32系统鉴定，MRSA67株由头孢西丁纸片法鉴定。1.1.3培养基、鉴定卡片：均由法国生物梅里埃公司提供。1.1.4质控菌株：金黄色葡萄球菌株ATCC25923由中国药品生物制品鉴定所提供。1.2方法1.2.1菌株鉴定：接种、分离培养按照《全国临床检验操作规程》进行［2］,鉴定用法国生物梅里埃公司VITEK-32系统并按使用说明书进行鉴定。1.2.2MRSA检测：参照2004年美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐用头孢西丁纸片法进行检测MRSA［3］。挑取单个菌落,调整菌悬液的浊度为0.5麦氏单位,均匀涂布于M-H平板。贴上30 μg头孢西丁纸片,在37℃下培养24 h观察结果。头孢西丁纸片法的判定标准为:抑菌环直径≤19 mm判定为MRSA。1.2.3药敏试验：分离菌用VITEK-32系统进行鉴定和药物敏感试验分析检测,并行药敏纸片法。用M-H培养基,K-B琼脂扩散方法,结果判断按CLSI2006年版标准［4］。药敏试验及MRSA检测两项试验均使用同批试剂分别在同一时间完成。1.2.4β-内酰胺酶检测使用头孢哨噻吩滤纸片法（Ｎitrocefintest）：Nitrocefin为显色头孢菌素，用接种环挑取受试菌落于商品化头孢哨噻吩滤纸片上，在β-内酰胺酶存在时其β-内酰胺环被水解打开后，试验药用小纸片即于10 min内由黄色转为红色即为阳性，表示该受试菌产β-内酰胺酶［5］。1.3统计学分析：采用WHO细菌耐药性监测中心推荐的WHONET5. 3软件进行数据分析。2结果2.1临床分布及检出率：本组试验鉴定出137株金黄色葡萄球菌,其中检出MRSA 67株,总阳性率为48.9%,MRSA感染的分布以ICU检出率最高(73.1 %),其次是呼吸科(72.7%)及脑、胸外科(58.8%),其临床分布及其MRSA菌株检出率、构成比详见表1。2.2耐药性比较：金黄色葡萄球对常用18种抗菌药物的耐药性及产β-内酰胺酶比较,结果见表2。表1137株金黄色葡萄球菌临床分布及产MRSA菌株的检出率、构成比(%)项目总数MRSA株检出率MRSA菌株构成比科室　　　　ICU261973.128.4呼吸科221672.723.9脑、胸外科342058.829.8泌尿外科16743.710.4儿科1218.31.5血液科2000其他科104406标本　　　　痰、咽拭子674364.264.2脓液1596013.4分泌物351234.317.9胆汁51151.5尿液813.51.5血液10000胸、腹水2000其他科131151.5表2金黄色葡萄球对常用18种抗菌药物的耐药性分析［例(%)］抗生素137株金黄色葡萄球菌67株甲氧西林金黄色葡萄球菌RISRIS头孢噻利137(100)67(100)万古霉素137(100)67(100)利奈唑胺137(100)67(100)呋喃妥因18(13.13)1(0.73)118(86.13)10(14.92)57(85.08)利福平45(32.85)2(1.46)90(65.69)30(44.78)2(2.98)35(52.24)复方新诺明75(54.74)62(45.26)40(59.70)27(40.30)四环素45(32.85)92(67.15)31(46.27)3（4.48）33(49.25)苯唑西林135(98.54)2(1.46)67(100)克林霉素81(59.12)56(40.88)44(65.67)2(2.98)21(31.34)庆大霉素86(62.77)3（2.20）48(35.03)45(67.17)2(2.98)20(29.85)氨苄西林/舒巴坦85(62.04)52(37.96)67(100)头呋辛钠77(56.20)60(43.80)67(100)左旋氧氟沙星76(55.47)3（2.20）58(42.33)53(79.10)3(4.48)11(16.42)莫西沙星60(43.80)77(56.20)41(61.19)26(38.81)头孢唑林103(75.18)34(24.82)63(94.03)4(5.79)氯洁霉素59(43.07)78(56.93)40(59.70)27(40.30)红霉素114(83.20)2(1.46)21(15.30)61(91.04)6(8.96)青霉素G135(98.54)2(1.46)67(100)产β-内酰胺酶135(98.54)2(1.46)67(100)3讨论金黄色葡萄球菌是社区和医院感染的常见致病菌，可引起局部和全身性感染，而MRSA已成为医院感染中的严重问题,是手术切口感染、创面感染和导管相关感染的重要病原菌,MRSA引起的感染在全球范围内具有很高的发病率和病死率。年老体弱免疫力低下的患者,病情严重在急救监护病房的患者,昏迷的患者,接受侵入性检查治疗的患者或外科烧伤患者都是MRSA的易感人群。住院时间长短与MRSA感染几率呈正相关。金黄色葡萄球菌临床分布：MRSA菌株检出率较高的科室分别为：ICU73.1%、呼吸科72.7%、脑、胸外科58.8%；标本为：痰、咽拭子64.2%、脓液60.0%、分泌物34.3%，其构成比科室分别为：脑、胸外科29.8%、ICU28.4%、呼吸科23.9%。标本为：痰、咽拭子64.2%、分泌物17.9%、脓液13.4%，以痰、咽拭子为高64.2%。科室、标本的构成比高同样是因为标本来源于以上三个科室。这与年老体弱、免疫缺陷及低下、住院时间长、抗生素(尤其是静脉用药)的使用等有关（我院呼吸科老年患者较多），与病情严重入ICU的患者,昏迷的患者,接受侵入性检查治疗的患者或外科烧伤患者有关。　　耐药性比较：随着抗生素的广泛应用,出现了严重的耐药问题。98%以上的金黄色葡萄球菌可产生β-内酰胺酶,使青霉素水解失活,表现为耐药。当β-内酰胺类抗生素存在的条件下,其他PBPs被抑制(他与β-内酰胺类抗生素亲和力极低),不能发挥效能,而PBP2a仍可发挥作用,完成细菌细胞壁的合成,使细菌得以生存［6］。PBP2a只存在于MRSA细菌表面,而不存在于敏感金黄色葡萄球菌,同时MRSA已不单纯是对甲氧西林耐药,已发展到对β-内酰胺类、氨基糖甙类、大环内酯类等抗生素多重耐药。其对β-内酰胺类抗生素的耐药主要是由于产β-内酰胺酶及染色体介导的金黄色葡萄球菌表面青霉素结合蛋白（Penicillin-bindingproteins，PBP）发生了变化所致［7-8］。本组资料显示MRSA对β内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、克林霉素、红霉素、利福平等抗菌药物的耐药率均明显高于金黄色葡萄球菌（甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（Meticillin-sensitivestaphy-lococcus aureus，MSSA），亦表现为多重耐药。青霉素G、头呋辛钠、苯唑西林耐药率均为100%、头孢唑林为94.03%、红霉素为91.04%；万古霉素、头孢噻利、利奈唑胺137株金黄色葡萄球菌均为100%敏感，呋喃妥因为85.08%敏感。因此，除万古霉素、头孢噻利、利奈唑胺药物外，呋喃妥因可作为治疗金黄色葡萄球菌、MRSA感染的药物。检出产β-内酰胺酶，金黄色葡萄球菌为98.54%，MRSA为100%.     如何正确使用抗菌药物,有效控制感染，降低病原菌耐药性是临床上迫切需要解决的重要问题。而病原菌耐药性监测,对准确掌握病原菌对抗菌药物的耐药现状和变迁,指导临床合理用药具有重要意义。因此,快速、准确地检测MRSA,不仅可以指导临床合理选用抗生素,还有利于控制MRSA的产生。总之,快速、准确地检测MRSA,及时监测耐药谱,对MRSA暴发流行的控制,指导临床实践具有重要意义［9］。4参考文献［1］Steinberg JP,ClarkCC,Hackman BO.Nasocomial and community-acquired Staphylococcus aureus bacteriemias from 1980 to1993·Impact of intravascular devices and methicillinresistance［J］.Clin InfectDis, 1996,23(2): 255.［2］叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程［M］.第2版.南京:东南大学出版社,1997:452.［3］NCCLS.Performance standardfor antimicrobial susceptibilitytes-ting. fourteenth InformationalSuspplement(M-100-S14)［S］. 2004.［4］Clinical and LaboratorySandards Institute(CLSI). Perform-ance standards for antimicrobial susceptibility testing［S］.Sixteenthinformational supplement. M100-S16. CLSI,2006: 44-52.［5］张群智，张红英，忽胜和，等.产β-内酰胺酶金黄色葡萄球菌的耐药性监测［J］．大理学院学报，2010，9（2）：16.［6］Vasilieva E,LabischinskiH,Berger-Bachi B. Identification and mapping of new chromosomal sites affecting response to beta-lactams in Staphylococcus aureus ［J］. Antimirob Agents,1997,8(1):13.［7］KareivienE V, Pavilonis A,Sinkute G.Staphylococcusaureus resistance to antibiotics and spread of phage types ［J］.Medicina(Kaunas),2006,42(4):332.［8］Li HX,Liu J, Wang FL, et al.A study on the development ofmechanism of drug resistance in Staphylococcus aureus［J］.Journalof Misdiagnostics, 2008, 8(33)：8076.［9］房强.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析［J］.吉林医学2008， 29(11):883.