两种酶联免疫法检测丙型肝炎病毒抗体结果分析
发表时间：2014-10-20 浏览次数：934次
丙型肝炎病毒(HCV)是输血后肝炎的重要病因，我国约有感染者4000万。为控制HCV经血液传播u:}，我国规定采用两家ELISA抗体诊断试剂筛选献血者丙型肝炎抗体。目前多使用第3代间接法检测试剂，包被的抗原包括HCV-Cme,NS3,NS4和NSS，大部分为基因工程表达抗原，特异性和灵敏度达99%}2}。但仍不能避免由于抗原的制备和试剂生产工艺而带来的少量假阳性及极少量漏检，尤其是间接法本身可引起少数假阳性’。随着试剂研发和原料制备技术提高，多种疾病的抗体检测已完成了从间接法到夹心法的升级。HCV抗体检测试剂也面临同样的问题。为了了解几种HCV抗体初筛试剂性能特点，及其与RIBA试剂的一致性，我们对部分两种间接法试剂检测结果均为抗一HCV阴性的标本和一种或两种试剂抗一HCV阳性的标本采用双抗原夹心法和RIBA平行检测。现将结果报道如下。 1材料与方法 1.1标本丽水市中心血站2011年1月至2012年6月共对42660名无偿献血者进行了两种间接法抗一HCV检测。共收集51份抗一HCV一种或两种试剂阳性标本，2500份抗一HCV两种试剂阴性标本(随机抽取)，存放于一70℃冰柜保存。 1.2酶联免疫法试剂间接法抗一HCV检测试剂采用英科新创(厦门)科技有限公司的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)，批准文号:国药准字510950055，批号:2010115823,2011055811,2012015801;美国强生公司的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)，注册证号:520090095，批号:EXE195,EXE199,EXE208。双抗原夹心法抗-HCV检测试剂采用北京万泰生物药业股份有限公司的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)，批号:CS20120301。全部免疫检测均严格按照厂家说明书进行操作。 1.3确证实验试剂免疫印迹法检测试剂采用美国强生公司的ChironOrthoHCVRIBA3.0SIA试剂盒，批号:1257420HCV-RNA检测仪器采用美国ABI-7500荧光扩增仪，试剂采用中山大学达安基因股份有限公司丙型肝炎病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光法)，批准文号:国药准字520100012，批号:2012005。全部检测均严格按照厂家说明书进行操作。 2结果及分析 2.1一种或两种间接ELISA阳性标本夹心ELISA检测情况对51份一种或两种间接法试剂检测阳性标本进行夹心法和RIBA试剂的平行检测，对RIBA检测阳性和可疑标本又进行了HCV-RNA检。具体数据见表1，由表1数据可见，51份标本中RIBA检测阳性7份，可疑3份，经RNA检测后7份阳性确证为阳性，3份可疑标本为阴性。三家酶免试剂7份阳性均能检出，但新创和强生的间接法试剂具有较高的假阳率(分别为40.9%和59.1%)，相较而言万泰的夹心法试剂的特异性较好，假阳率仅有2.2%。由此可见，在检测特异性上，万泰夹心法试剂要明显优于新创和强生的间接法试剂。而且，三家试剂和确证结果的符合率，万泰夹心法试剂显著高于另外两家间接法试剂。 此外，由表2中的数据可见，在新创间接法检出的25份阳性标本中，经确证后仅有7份为真阳性，仅占阳性标本量的28%;在强生间接法检出的33份标本中，经确证后仅有7份为真阳性，仅占阳性标本量的14.3%;在万泰夹心法检出的8份阳性标本中，经确证后有7份为真阳性，占阳性标本量的7/8。从这一角度分析可见，万泰夹心法试剂对阳性标本检测的准确度要远远高于新创和强生的间接法试剂。 2.2两种间接ELISA阴性标本夹心ELISA检测情况对2500份两种间接法试剂检测阴性性标本进行夹心法检测，结果均为阴性，特异性100%o2.3间接ELISA和夹心ELISA检测灵敏度比较在RIBA阳性反应的7份标本中，万泰夹心法试剂表现出了更高的灵敏度，S/CO值较强生酶免高2一6倍。具体数据见表302.4夹心ELISA检测BBI阳转血清盘灵敏度万泰夹心法试剂进行了4套BBI盘的检测，结果如表4所示。由表4数据可见，与间接法试剂相比，夹心法试剂具有更高的灵敏度，能多检出3份BBI血清盘标本，有效的缩短了抗一HCV检测的窗口期(平均检测时间分别为29d和33d)o3讨论在间接酶联免疫法中，由于受到非特异性抗体的影响较大，需要通过降低检测样本量或稀释样本的方式降低反应的本底值，而这种方式会在一定程度上损失试剂的检测灵敏度。即便如此，间接法仍然存在特异性较差的问题。 随着丙肝重组抗原技术的进步，采用双抗原夹心法检测丙肝抗体的理念也得以实现。近年来，国内外丙肝抗体诊断试剂也正在从间接法向夹心法过渡。由于丙肝重组抗原的活性依赖于空间构象，因此，抗原结构的稳定性以及酶标记过程对构象的影响成为了夹心法试剂研究的重点和难点. 在我国血液筛查规定采用两家酶免试剂做抗-HCV的初检，是为了避免不同厂家试剂间差异造成的漏检，但同时，不可避免的造成了假阳率的升高。 而在各种酶联免疫分析方法中，间接法本身就存在着假阳率高的劣势，因此，在血液筛查中采用间接法试剂无疑是提高了初检假阳率，增加了血液筛查工作的负担和成本。 由上述数据的对比分析可见，万泰夹心法试剂无论在灵敏度还是特异性上都要显著优于新创和强生两家间接法试剂。因此，在血液筛查中采用夹心法试剂可以有效的提高抗一HCV阳性标本的检出率，并降低假阳率，为血液筛查工作提供更高的准确度。 4参考文献 中华医学会肝病学分会,中华医学会传染病与寄生虫病学分会. 丙型肝炎防治指南[J].{H}实用肝脏病杂志,2004.369-375. Colin C,Lanoir D,Touzet S. Sensitivity and specificity of third-generation hepatitis C virus antibody detection assay:an analysis of the literature[J].J Hepatit,2001.87-95. Penin F. Structural biology of hepatitis C virus[J].{H}Hepatology,2004.5-19. Kato N. Molecular virology of hepatitis C virus[J].{H}ACTA MEDICA OKAYAMA,2001.133-159. 谢立,吴晓东. 丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义[J].{H}世界华人消化杂志,2005,(7):884-886.doi:10.3969/j.issn.1009-3079.2005.07.016.
