乳腺癌患者外周血T淋巴细胞和NK细胞水平分析

近年来我国乳腺癌发病率在逐年增高[1],早期诊断、治疗、术后定期检查、早期发现复发转移,对改善乳腺癌预后有重要意义。笔者应用流式细胞术检测s9例乳腺癌患者外周血淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞(NK)水平,以了解细胞免疫状态和预后的关系,为临床诊治提供参考。

1资料与方法

1.1临床资料2010年8月至2011年4月在我院住院的初治乳腺癌(无淋巴结转移)女性患者59例,年龄36~69岁,平均52.4岁,均行乳腺癌切除术加腋下淋巴结清扫术,并经病理检查证实。浸润性乳腺癌婀例,非浸润性乳腺癌19例。临床分期根据珂CC分期标准,I、Ⅱ期硐例,Ⅲ、Ⅳ期19例。

1.2仪器与试剂Epics XL型流式细胞仪,COULmR Q-PREP型自动溶血仪,鼠抗人单克隆抗体CMs/CD0/CD8/CD3、CD眸5/CD(16+56)/CD19/CD3,ABC溶血素,上述仪器与试剂均为美国Beckmm codter公司生产。

1.3方法乳腺癌切除术前2d及术后5d清晨空腹分别抽取患者肘静脉血2血,置于含乙二胺四乙酸二钠(EDTA-N砣)的试管中,从试管中吸取100液体分别与荧光素标记的鼠抗人单克隆抗体CⅢ5/CD0/CD8/CD3、CDZI5/CD(16+56)/CD1CD320淤混匀,室温避光反应30血n,1h内上机检测,根据前向和侧向散射光双参数点图,设“门”于白细胞共同抗原(CM5)阳性细胞,计数5OtXl个淋巴细胞,双参数分析淋巴细胞表面标记,计算出CD3+、CM`CD8+、NK、CD19+。对所有患者随访1年,观察患者有无复发,并测定上述指标。

1.4统计学分析采用SPSs13.0软件进行统计分析,计量资料以跖±s表示,采用J检验,以P<0.O5为差异有统计学意义。

2结果

2.1乳腺癌患者手术前后外周血淋巴细胞水平比较乳腺癌患者手术后CD19+细胞水平较手术前明显下降(P(0.05),CⅢ+、CD8+、CD3+、NK细胞,K平手术前后比较无明显变化,差异无统计学意义(P)0.Os),见表1。

2.2术后复发及未复发的乳腺癌患者外周血淋巴细胞水平对⒆例患者随访1年,复发10例,未复发翎例。术后复发组,其术前、术后外周血CM+细胞水平明显低于未复发组(P<0.05),CD8NK和CD19+细胞水平明显高于未复发组(P<0.O5),但两组CD3+细胞水平比较,差异无统计学意义(P)0.O5)。见表2。

3讨论

在乳腺癌患者体内针对肿瘤细胞的获得性免疫应答中,CD8+T细胞起着重要作用,通过过继转输抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),可有效消除肿瘤[3-5]。NK细胞是天然免疫的重要成分,现已证明,NK细胞可以抑制某些类型的肿瘤在动物和人类体内的进展[6-7]。T淋巴细胞是机体免疫系统内最重要的细胞群。CD19+是B淋巴细胞表面的糖基化I型跨膜蛋白,在骨髓B细胞即开始表达,持续整个B细胞成熟期,直至分化为浆细胞时消失,它是最早发现的B细胞系表面标志,在B细胞活化以及信号转导中起协同受体的作用,调节B细胞活化及增殖,参与B细胞的信号转导功能[9]。鉴于T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞在肿瘤免疫中的重要作用,本文以此为切人点,探索术后及随访1年后乳腺癌患者细胞免疫功能的动态变化。有研究表明,肿瘤患者外周血中T淋巴细胞亚群数值的特征是CM+T细胞明显减少,而CD8+T细胞明显增加,Cy+/CD8+比值显著降低[10],提示肿瘤患者的细胞免疫功能处于免疫抑制状态[11]。本研究中乳腺癌患者手术后CD19+细胞水平较手术前明显下降(P(0.05),CD4+、CD8+、CD3+、NK细胞外OF手△术前后比较无明显变化(P>0.O5),提示手术对乳腺癌患者T淋巴细胞功能无显著影响。本组患者在术后随访I年,复发10例,未复发⒆例。术后复发组,其术前、术后外周血Cy+细胞水平明显低于未复发组(P<0.O5),CD8+、NK和CD19+细胞水平明显高于未复发组(P<0.O5),但两组CD3+细胞水平比较差异无统计学意义(P>0.O5),提示Cy+细胞水平减低伴CD8+、CD19+细胞水平显著升高可能是乳腺癌术后复发或者迅速恶化的标志。

综上所述,对乳腺癌患者手术前后外周血中的CD3+、CM+、cD8+、NK、CD19+细胞亚群水平进行监测,能较客观地反映患者机体的细胞免疫功能状态、宿主的免疫细胞数量与功能异常,同时对判断乳腺癌患者术后复发及预后也有重要的参考价值。

参考文献

[1]Wishart GC,Bajdik CD,Azzato EM.A population-based validation of the prognostic model PREDICT for early breast cancer[J].European Journal of Surgical Oncology,2011,(05):411-417.

[2]Edge DR,Compton CC,Fritz AG.AJCC Cancer Staging Manual[M].New York:Springer-Verlag,2010.347-349.

[3]冯勤梅,狄文,吴霞.卵巢癌患者一线化疗后CD8+T细胞和NK细胞数量及功能动态变化的研究[J].中国免疫学杂志,2010,(01):23-28.

[4]Yorty JL,Tevethia SS,Schell TD.Rapid accumulation of adoptively transferred CD8+T cells at the tumor sit e is associated with long-term control of SV40 T antigen-induced tumors[J].Cancer Immunology Immunotherapy,2008,(06):883-895.

[5]Hanson HL,Donermeyer DL,Ikeda H.Eradication of established tumors by CD8+T cell adoptive immunotherapy[J].Immunity,2000,(02):265-276.

[6]Ben-Eliyahu S,Page GG,Yirmiya R.Evidence that stress and surgical interventions promote tumor development by suppressing natural killer cell activity[J].International Journal of Cancer,1999,(06):880-888.

[7]Kiecolt-Glaser JK,Garner W,Speicher C.Psychosocial modifiers of immunocompetence in medical students[J].Psychosomatic Medicine,1984,(01):7-14.

[8]王亚娟,王爱芬.肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群检测的临床研究[J].中华肿瘤防治杂志,2004,(07):726-728.

[9]钱印榕,王福龙,王君.42例胃肠道肿瘤患者手术前后细胞免疫功能的动态检测[J].临床肿瘤学杂志,2007,(09):666-668.

[10]Otero DC,Anzelon AN,Rickert RC.CD19 function in early and late B cell development:I.Maintenance of follicular and marginal zone B cells requires CD19-dependent survival signals[J].Journal of Immunology,2003,(01):73-83.