晚期神经母细胞瘤患者血清VEGF水平的临床意义

作者:王智辉,孙晓非,甄子俊

作者单位：华南肿瘤学国家重点实验室，中山大学肿瘤防治中心，广东 广州 510060        【摘要】  　　［目的］ 探讨晚期神经母细胞瘤（NB）患者血清血管内皮生长因子（VEGF）水平的意义。［方法］ 采用ELISA法检测晚期NB患者血清VEGF水平，并取健康儿童血清作为对照。［结果］ 初治/复发组患者血清VEGF水平[（548.66±295.22）ng/L]明显高于对照组[（300.46±169.14）ng/L]及完全缓解(CR)/良好部分缓解(PR)组[（280.22±179.38）ng/L]（P<0.05）。14例CR患者治疗前较治疗后VEGF水平明显降低[（242.67±214.42）ng/L vs（481.55±250.41）ng/L]（P<0.05）。［结论］ 晚期NB患者血清VEGF水平升高，经有效治疗后可显著降低，可作为监测治疗反应的一项重要指标。

【关键词】  神经母细胞瘤　血管内皮生长因子　血清

　　Clinical Significance of Serum Level of VEGF in Patients with Advanced Neuroblastoma

    WANG Zhi-hui, SUN Xiao-fei, ZHEN Zi-jun, et al.

    (State Key Laboratory of Oncology in Southern China, Cancer Center, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510060, China)

    Abstract: ［Purpose］ To investigate the clinical significance of serum vascular endothelial growth factor (VEGF) level in patients with advanced neuroblastoma(NB). ［Methods］ The serum VEGF level in advanced NB patients and healthy children’s as control were detected by ELISA assay. ［Results］ The serum level of VEGF in initiallytreated or relapsed patients [（548.66±295.22）ng/L] was remarkably higher than those in healthy children [（300.46±169.14）ng/L] and patients who achieved complete remission(CR) or partial remission(PR) [（280.22±179.38）ng/L]（P<0.05）. The serum level of VEGF from 14 patients who received CR in post-treatment was obviously lower than those in pre-treatment [（242.67±214.42）ng/L vs（481.55±250.41）ng/L]（P<0.05）. ［Conclusion］ The serum level of VEGF in patients with advanced neuroblastoma is elevated and decreases after effective treatment. So the serum level of VEGF may be used as an important tumor marker to monitor the response for treatment.

    Key words: neuroblastoma; VEGF; serum

    神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)是儿科常见的恶性肿瘤之一，其恶性程度高、进展快，晚期患者尽管采用放疗、化疗、手术，甚至骨髓移植等综合治疗后，仍有很高的复发率和死亡率。如果能找到一种比较敏感的指标可以监测治疗反应及判断预后，对临床治疗具有指导意义。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一种具有促进血管内皮细胞有丝分裂活性的血管形成因子。近年来的研究表明在NB的血管生成及NB细胞的增殖过程中，VEGF发挥着重要作用，与肿瘤的生长、侵袭、转移密切相关[1]。

    目前国内很多研究者采用免疫组织化学、RT-PCR等方法发现VEGF及其受体在NB患者肿瘤组织中表达明显增高，但对于血清中VEGF的表达研究较少。国外有研究证实NB患者组织及血清中VEGF及其受体的表达具有一致性[2]，经过有效治疗后sVEGF水平会下降，提示检测sVEGF可能可以作为一项简便易行的监测治疗反应的方法应用于临床。本研究对Ⅲ、Ⅳ期NB患者血清VEGF（sVEGF）进行检测，探讨检测晚期NB患者sVEGF水平的意义及其与治疗的相关性。

    1 材料与方法

    1.1 对 象

    中山大学肿瘤防治中心内科2004年1月～2005年7月收治NB患者25例，均经病理和（或）骨髓细胞学检查确诊，分期采用INSS分期标准。收集患者血清共39份，分为两组，一组为初治或复发患者的血清，共20份，年龄1岁～9岁，中位年龄5岁，男性16例，女性4例，Ⅲ期7例，Ⅳ期13例。另一组为经过化疗、放疗、手术等综合治疗后获得完全缓解（complete remission，CR）或良好的部分缓解（partial remission，PR）患者的血清，共19份，年龄2岁～19岁，中位年龄5岁，男性12例，女性7例，Ⅲ期7例，Ⅳ期12例。另取28例体检健康儿童血清作为对照组，男性17例，女性11例，年龄1岁～14岁，中位年龄7岁。并对14例治疗后获得完全缓解的患者治疗前后分别取血清进行检测。

    1.2 方 法

    1.2.1 ELISA法检测sVEGF水平

    采集全血2ml，分离血清后置-20℃冰箱保存待测。sVEGF浓度采用双抗体夹心ELISA法测定，试剂盒购自美国R&D公司。实验步骤按说明书操作，先将冻存标本室温融化，依次加样、孵育、洗涤，置于光密度仪在450nm波长处读出光密度值(OD)，并计算出测定值。

    1.2.2 统计分析方法

    采用SPSS13.0统计软件包进行统计分析，不同组别sVEGF浓度测定值用均数±标准差表示，连续型变量的比较采用两个独立样本的t检验或配对样本的t检验，P<0.05定义为有统计学意义。

    2 结 果

    2.1 sVEGF检测结果及比较

    各组sVEGF测定值结果见表1，经统计分析发现，初治/复发组sVEGF水平明显高于CR/PR组，亦明显高于健康对照组，差异有显著性(t=3.45，P=0.02)。而治疗后CR/PR组与健康对照组相比，sVEGF浓度并无显著性差异(t=0.388，P=0.70)（见表2）。

    2.2 Ⅲ、Ⅳ期患者sVEGF水平比较

    初治/复发组中Ⅲ期患者sVEGF浓度为（576.59±305.87）ng/L，Ⅳ期患者sVEGF浓度为（533.62±300.86）ng/L；CR/PR组中Ⅲ期患者sVEGF浓度为(329.92±179.23)ng/L，Ⅳ期患者sVEGF浓度为(251.23±180.68)ng/L。统计分析发现两组中Ⅲ、Ⅳ期患者sVEGF水平均无显著性差异（t值分别为0.30及0.92，P值分别为0.77及0.37）。

    2.3 治疗后CR患者治疗前后sVEGF水平对比

  本研究中14例初诊患者接受了平均4～6个周期的化疗，化疗后行手术及原发灶放疗获得CR，其CR时sVEGF水平[（242.67±214.42）ng/L]明显低于治疗前[（481.55±250.41）ng/L](t=7.726，P=0.000)，见表3。

    3 讨 论

    血管生成在恶性肿瘤的发生、发展及转移过程中起着不容忽视的作用，其机制复杂，受多种血管生成调节因子的严密调控，是调节血管生成的正性因子和负性因子之间力量对比的结果。其中VEGF是目前已知活性最强、专属性最高的血管生成因子[3]，它是由两个分子量为23 000的亚基以二硫键结合在一起的二聚体糖蛋白，它选择性作用于血管内皮细胞，诱导内皮细胞增殖，促进组织因子表达及活化，诱导新生毛细血管网的形成，并能提高血管通透性。近来国内外的研究证明VEGF在NB的血管生成及肿瘤细胞的增殖过程中发挥重要作用，VEGF的表达高低与肿瘤分期及组织学类型有关，从而与预后密切相关[2，4]，但其表达与病人性别、年龄、原发部位、N-MYC基因扩增情况、淋巴结转移区域等无关[5~7]。

    国内外许多研究者发现无论NB细胞株体外培养还是原发NB患者肿瘤组织的VEGF表达均增高。Langer等[8]用RT-PCR的方法研究了5例NB细胞株和25例NB患者肿瘤组织的VEGF表达情况，发现所有的细胞株均表达VEGF mRNA，肿瘤组织表达VEGF的高低与肿瘤分级有关，高分化肿瘤组织表达VEGF高，可能的机制是高分化的肿瘤具有高度血管依赖性，从而上调VEGF的表达，提示VEGF可能通过上调血管新生及促进肿瘤细胞的生长等机制在肿瘤预后中直接发挥作用。

    NB患者初诊时肿瘤组织标本获取较困难，相对而言血清标本获取则简便易行，且通过血清学检查便于对无法评价病灶的患者进行密切随访及监测。Fakhari等[2]分别采用Western Blotting法及ELISA法测定NB患者组织及血清中VEGF及其受体的表达，结果表明两种测定方法结果一致。本实验中我们测定NB患者sVEGF浓度，结果显示：初治/复发组sVEGF水平不仅明显高于健康对照组，亦明显高于CR/PR组（P<0.05），推测sVEGF可能与NB的生长、增殖密切相关，是否作为NB患者治疗后随访指标值得探讨。

    El-Houseini等[7]采用ELISA法测定几种儿童常见恶性肿瘤（其中包括NB）患者sVEGF水平，发现有远处转移者sVEGF明显高于无转移者，表明sVEGF水平可作为提示是否存在潜在转移可能的指标。很多研究表明晚期患者VEGF表达高于早期患者，特别是诊断时即有远处转移者远高于病灶局限者[9]，由于我们收集的血标本多为晚期患者，无法分析Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期患者sVEGF表达是否有差异，但发现Ⅲ期与Ⅳ期患者sVEGF并无显著性差异，表明NB局部晚期患者和有远处转移患者sVEGF水平均有明显的升高，提示sVEGF水平可能与预后密切相关。

    Pavlakovic等[6]报道化疗可使儿童实体瘤患者（包括NB）sVEGF浓度明显下降，并认为sVEGF水平高低与肿瘤进展密切相关，可用于监测治疗反应，其他学者也得出过相同的结论[7]。本研究结果显示：健康对照组与CR/PR组比较sVEGF水平并无统计学差异（P>0.05），推测可能的原因是经过有效治疗后肿瘤负荷减小，有活性的肿瘤细胞数目减少，致使肿瘤细胞分泌VEGF减少。初治的14例NB患者经有效化疗及手术后sVEGF水平可有不同程度降低，CR后的患者sVEGF浓度可降至健康对照组均值以下，治疗前后sVEGF水平差异有显著性（P<0.05），提示sVEGF可能作为监测治疗反应的一项重要指标，这与文献报道结果相一致。

    我们收集的病例由于随访时间较短，缺乏长期生存资料，故未分析sVEGF水平与生存期的关系，有待于今后进一步深入研究。

【参考文献】  [1] Meister B,Grunebach F, Bautz F, et al. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors in human neuroblastoma[J]. Eur J Cancer, 1999, 35(3):445-449.

[2] Fakhari M,Pullirsch D, Paya K, et al. Upregulation of vascular endothelial growth factor receptors is associated with advanced neuroblastoma[J]. J Pediatr Surg, 2002, 37(4):582-587.

[3] Dvorak HF. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor: A critical cytokine in tumor angiogenesis and a potential target for diagnosis and therapy[J]. J Clin Oncol, 2002,20(21):4368-4380.

[4] Eggert A, Ikegaki N, Kwiatkowski J, et al. High-level expression of angiogenic factors is associated with advanced tumor stage in human neuroblastomas[J]. Clin Cancer Res, 2000, 6(5):1900-1908.

[5] Fukuzawa M, Sugiura H, Koshinaga T, et al. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptor flk-1 in human neuroblastoma using in situ hybridization[J].J Pediatr Surg, 2002,37(12):1747-1750.

[6] Pavlakovic H, Von Schutz V, Rossler J, et al. Quantification of angiogenesis stimulators in children with solid malignancies[J]. Int J Cancer, 2001, 92(5):756-760.

[7] El-Houseini ME, Abdel-Azim SA, El-Desouky GI, et al. Clinical significance of vascular endothelial growth factor(VEGF) in sera of patients with pediatric malignancies[J]. J Egypt Natl Canc Inst, 2004, 16(1): 57-61.

[8] Langer I, Vertongen P, Perret J, et al. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and VEGF receptors in human neuroblastomas[J]. Med Pediatr Oncol, 2000, 34(6):386-393.

[9] Tabone MD, Landman-Parker J, Arcil B, et al. Are basic fibroblast growth factor and vascular endothelial growth factor prognostic indicators in pediatric patients with malignant solid tumors?[J]. Clin Cancer Res, 2001,7(3): 538-543.