p15、bcl2及PCNA在不同放射敏感性的鼻咽癌组织中的表达及其相关性研究

　　作者：朱小东 作者单位：530021 南宁，广西壮族自治区肿瘤医院广西医科大学附属肿瘤医院放疗科

　　【摘要】 目的 探讨p15、bcl2及PCNA的表达与鼻咽癌放射敏感性的关系及它们之间的相关性。方法 根据放疗结束时肿瘤消退与否将56例鼻咽癌病人分为肿瘤消退组(29例)及肿瘤残存组(27例)，采用免疫组织化学SP法测定癌组织中p15、bcl2及PCNA的表达。结果 p15、bcl2及PCNA蛋白阳性表达率在肿瘤残存组、消退组中差别无显著性意义(P>0.05)。肿瘤残存组中各指标间存在显著相关性(P<0.01)，而肿瘤消退组中除bcl2与PCNA蛋白表达显著相关(P<0.01)外，其余指标间无明显的相关性(P>0.05)。结论 鼻咽癌组织中p15、bcl2及PCNA的表达水平不能作为判断鼻咽癌放射敏感性的指标，但通过检测p15与bcl2、PCNA的相关性可能是预测鼻咽癌放射敏感性的重要手段。

　　【关键词】 鼻咽癌 p15 bcl2 PCNA 免疫组化

　　近年来， 关于p15、bcl2及增殖细胞核抗原(PCNA)在各种恶性肿瘤组织中的表达情况已引起有关学者的关注并陆续有文献报道[1]， 但这些指标联合应用于预测鼻咽癌放射敏感性目前尚未见报道。 因此， 我们检测了56例鼻咽癌组织中p15、bcl2及PCNA的表达情况并分析他们之间的相互关系及其与鼻咽癌放射敏感性的关系，以期为指导鼻咽癌放疗方案的设计提供有实用价值的生物学预测指标。

　　1 资料与方法

　　1.1 标本 收集1998年5月～2002年2月间经我院病理证实为鼻咽低分化鳞癌、 并经CT证实颈动脉鞘区受侵(92′分期均属T3)而接受首程放疗的56例患者的鼻咽活检存档蜡块。 其中男性39例， 女性17例， 年龄20～69岁， 中位年龄41岁， 颈淋巴结阴性13例， 颈淋巴结阳性43例。 全部患者放疗结束时鼻咽部肉眼检查均无肿瘤残留， 复查CT示颈动脉鞘区残留者27例(肿瘤残存组)， 消失者29例(肿瘤消退组)。 所有蜡块均作5μm连续切片， 先做HE染色核实诊断， 然后用免疫组化SP染色法检测p15、 bcl2及PCNA蛋白的表达情况。

　　1.2 试剂与方法 p15、bcl2及PCNA蛋白单抗(鼠抗人单抗)，SP试剂盒，DAB，PBS均购自福州迈新生物技术开发公司。根据该公司推荐的免疫组化SP法进行免疫组化染色，并设阴性和阳性对照。

　　1.3 结果判断 根据放疗结束时CT所示颈动脉鞘区肿瘤是否残留以及放疗前颈淋巴结有无转移分组。p15、bcl2及PCNA蛋白表达阳性信号为位于细胞浆内、呈棕黄色或棕色颗粒。低倍镜下寻找能代表着色情况的区域，再在高倍镜下连续观察三个视野内肿瘤细胞中的阳性细胞数，根据阳性细胞数占计数细胞的百分比计算阳性细胞百分率(阳性细胞数/计数细胞总数)。

　　1.4 统计学处理 应用SPSS10.0统计软件，组间差异采用t检验，用Spearman法行等级相关分析。

　　2 结果

　　2.1 鼻咽癌组织中p15、bcl2及PCNA蛋白表达情况

　　p15、bcl2及PCNA蛋白阳性率在肿瘤消失组与残瘤组中差别无统计学意义(P>0.05)， 见表1。表1 p15、bcl2及PCNA蛋白情况

　　2.2 鼻咽癌组织中p15、bcl2及PCNA蛋白表达的相关性

　　2.2.1 鼻咽癌组织中p15与bcl2表达的相关性 肿瘤残瘤组二指标间等级相关系数(rs)为0.61，P<0.01;消失组二指标间等级相关系数(rs)为0.35，P>0.05。

　　2.2.2 鼻咽癌组织中p15与PCNA蛋白表达的相关性 肿瘤残瘤组二指标间等级相关系数(rs)为0.62，P<0.01;消失组二指标间等级相关系数(rs)为0.34，P>0.05。

　　2.2.3 鼻咽癌组织中bcl2与PCNA蛋白表达的相关性 肿瘤残瘤组二指标间等级相关系数(rs)为0.64，P<0.01;消失组二指标间等级相关系数(rs)为0.34，P<0.01。

　　2.3 鼻咽癌组织中p15、bcl2及PCNA蛋白表达水平与颈淋巴结转移的关系

　　p15、bcl2及PCNA蛋白阳性率在颈淋巴结转移阳性组与阴性组中差别无统计学意义(P>0.05)， 见表2。表2 鼻咽癌组织中p15、bcl2及PCNA蛋白表达水平与颈淋巴结转移的关系

　　3 讨论

　　研究证明p15为重要的抑癌基因与细胞周期调控关系密切[1]，bcl2为调亡抑制基因，PCNA与肿瘤的增殖相关。国内、外学者较广泛地研究了这些基因在多种恶性肿瘤中的表达及意义[2]，但在鼻咽癌中联合检测这些指标的研究报道较少，这些影响细胞周期的指标联合应用是否可作为判断鼻咽癌放射敏感性指标的研究报道则更为少见。因此，我们对不同放射敏感性的鼻咽癌标本进行了上述指标的检测，分析其是否与鼻咽癌的放射敏感性相关，以及各指标间的相互关系。

　　抑癌基因p15是细胞周期的一种负性调控因子，可阻止细胞从G1期进入S期，抑制细胞无限增殖，防止细胞增殖失控向肿瘤性增生转化[3]。p15蛋白丢失或功能下调必然影响这个重要增殖控制途径。PCNA是判断细胞增殖活性的有效标记物，其合成和表达与细胞增殖周期相关，在G1期合成增加，S期达到高峰，G2/M期减少[4]。有研究报道增殖细胞低指数者，其抗拒放射的G0期细胞多，对射线不敏感。在鼻咽癌中张少伟等[5]认为低PCNA表达者，由于肿瘤细胞处于较低的增殖状态，对放射治疗较为抗拒，高PCNA表达者较低PCNA表达者放射敏感性高。bcl2是凋亡抑制基因，抑制细胞死亡、延长细胞寿命，导致细胞数目增加。现已证实放疗能够诱导细胞凋亡[7]，并且明确了放疗诱导细胞凋亡可以作为判定肿瘤放射治疗敏感性的指标。因此bcl2的表达对肿瘤的治疗结果产生一定的影响。文献报道[6,7]在癌组织内过量发现bcl2基因表达，有可能阻碍由放疗引起的细胞凋亡，证实放射线引起的细胞凋亡受bcl2基因水平限制。

　　本研究结果证实， 肿瘤残存组与肿瘤消失组之间无论p15蛋白阳性表达、bcl2蛋白的表达还是PCNA蛋白阳性表达均无显著性差别(P>0.05)，提示上述指标可能仅与肿瘤的发生有关，而与其放射敏感性没有相关性，临床上尚不能以这些指标单独作为预测鼻咽癌放射敏感性的指标。本研究结果与上述一些报道[57]的结果不相吻合，其原因有待进一步研究。

　　肿瘤残存组中p15蛋白、bcl2蛋白及PCNA蛋白之间有明显的相关性，而肿瘤消失组中仅bcl2蛋白及PCNA蛋白之间有明显的相关性，而其他指标之间没有明显的相关性。提示放射敏感性差的鼻咽癌组织中p15蛋白与bcl2蛋白、PCNA蛋白显著相关，而bcl2蛋白与PCNA蛋白之间显著相关不能预测鼻咽癌的放射敏感性。研究的结果初步提示，临床上通过检测p15蛋白与bcl2蛋白、PCNA蛋白的相关性来预测鼻咽癌放疗的敏感性可能是判断鼻咽癌放射敏感性的重要手段。

　　有颈淋巴结转移组与无颈淋巴结转移组的鼻咽癌组织中p15蛋白阳性表达率、bcl2蛋白的表达及PCNA的表达水平均没有显著性差别，与周明琦等[8]报道相似，说明鼻咽癌发生过程中这些指标的表达从早期持续到晚期，提示上述指标可能仅与鼻咽癌的发生有关，而与其疾病的进展没有相关性。

　　【参考文献】

　　[1] Esteller M, Corn PG, Baylin SB, et al. A sene hypermethylation protile of human cancer[J]. Cancer Res, 2001,61(8): 32253229.

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　　[8] 周明琦，林尚泽. MTS2/p15和bcl2蛋白产物在鼻咽低分化鳞癌中的表达及意义[J]. 贵州医药，2001，25(9):774776.