直肠癌标本切缘翻译启动因子4E蛋白表达与预后的关系

　　作者：盛红光,梁荔,姜言明,张敏　　作者单位：山东大学附属省立医院　胃肠外科　(山东　济南　250021)

　　【摘要】目的：研究直肠癌患者手术标本切缘翻译启动因子4E(eIF4E)蛋白表达与预后的相关性。方法：选择随访5年以上、临床资料齐全并经常规病理学检查切缘阴性的直肠癌标本共53例，采用LSAB免疫组织化学方法检测切缘和原发灶中eIF4E蛋白的表达，按切缘eIF4E蛋白阳性或阴性表达分为切缘eIF4E阳性组和切缘eIF4E阴性组，比较2组患者的随访结果。结果：直肠癌切缘和原发灶eIF4E表达阳性率分别为30.2%(16/53)和100%(53/53)。切缘eIF4E阳性表达患者复发转移和死亡10 例(10/16，62.5%)，切缘eIF4E阴性表达患者复发转移和死亡11例(11/37，29.7%)，切缘eIF4E阳性组局部复发率高于阴性组(37.5% vs 16.2% ，P<0.05);远处转移率(18.7% vs 10.8%)和死于肿瘤者2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 37例切缘eIF4E阴性者生存5年以上32例，16例切缘eIF4E阳性者生存5年以上12例，5年累积存活率分别为69.8%、37.3%(P=0.007)，平均生存时间分别是(112±7)个月和(43±9)个月 。结论：直肠癌标本切缘常规病理检查癌细胞阴性，而eIF4E蛋白表达阳性患者复发率较高，预后较差。

　　【关键词】 直肠肿瘤·真核细胞起始因子4E·预后

　　【ABSTRACT】 Objective: To study the relationship of the expression of translation startup factor 4E(eIF4E)protein of the operation specimen incisal margin to prognosis in rectal carcinoma. Methods: Using LASB immunohistochemical technique to test the expression of eIF4E protein in the incisal margin and original focus from 53 negative cases in the conventional pathologic examination of the operation specimen incisal margin of the rectal carcinoma, and compared the survival rate between the positive group and the negative group. Results: The positive rate of the incisal margin and the original focus was respectively 30.2%(16/53) and 100%(53/53). There were 10 cases(10/16, 62.5%) with recurrence, metastasis and death in the positive group. And 11 cases(11/37, 　　直肠癌手术后局部复发是治疗失败的重要原因，而手术标本切缘病理组织学检查可见癌细胞患者的复发率较切缘未发现癌细胞者高[1]。随着分子生物学的发展，病理组织学检查癌细胞阴性的切缘中仍能检测到一些与预后有关的基因或蛋白的改变如p53、p16、Ras等，但其在直肠癌中作为判断预后的指标尚不理想。翻译启动因子4E(eIF4E)是新近发现的原癌基因，免疫组织化学研究发现eIF4E在多种肿瘤组织中的阳性表达率为100%，而在正常组织中不易检测到，有较高的特异性和敏感性[2-5]。本研究对53例直肠癌标本切缘病理检查阴性的患者进行eIF4E蛋白检测，评价其与预后的关系。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料

　　2005年1—12月我院普外科手术治疗直肠癌患者253例，其中Miles手术141例，保肛手术112例。本研究从保肛手术中选择合适病例进行直肠癌切缘的研究。入选条件：至少随访5年，临床与病理资料齐全，术中留取了切缘标本，且切缘常规病理组织学检查为阴性(本组术前均未进行放化疗)。符合条件的共计53例，其中男29例，女24例;年龄32～75岁，中位年龄53. 5岁。病灶下缘距肛缘：高位13例(10 cm~)，中位33 例(7 cm～)，低位7 例(5 cm～)。临床Dukes分期：A期9 例，B期32 例，C期10 例，D期2 例。将以上病例手术标本切缘进行eIF4E蛋白检测，按切缘eIF4E蛋白阳性或阴性表达分为切缘eIF4E阳性组和切缘eIF4E阴性组。2组患者年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结阴阳性、手术方式及术后治疗史等差异均无统计学意义(P>0.05，表1)。同时取10例正常直肠黏膜标本作为阴性对照。

　　1.2　主要试剂

　　eIF4E鼠抗人单克隆抗体IgG1，cat sc-9976，抗体稀释比为1∶50，购于Santa-Cruz公司。免疫组织化学LSAB试剂盒(K0681通用型)购于丹麦Dako公司 。

　　1.3　结果判定

　　53例直肠癌患者的原发灶和切缘标本均行HE染色和eIF4E免疫组织化学染色，由两位对临床资料不知晓的病理学医师进行双盲法阅片。原发灶eIF4E蛋白表达阳性标准：≥10%的癌细胞胞质有明显的淡黄色。切缘eIF4E蛋白表达阳性标准：切缘黏膜细胞中可以看到≥5%的细胞有相应的eIF4E蛋白特征的染色。

　　1.4　统计学处理

　　应用SPSS10.0统计软件包进行分析，分别采用χ2检验、寿命表法和Kaplan-Meier法。以P≤0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　切缘和原发灶eIF4E蛋白阳性表达

　　53例患者中，切缘eIF4E蛋白阳性16例，阴性37例，阳性率为30.2%(16/53);原发灶中eIF4E蛋白均阳性，阳性率100%(53/53)。10例正常直肠黏膜均为阴性染色。

　　2.2　随访情况

　　随访结果分为无瘤生存、局部复发(包括吻合口、淋巴结和盆腔复发)、远处转移、死于肿瘤、非瘤死亡。本组肿瘤复发、转移或死亡21例，其中，切缘eIF4E阳性组10 例(10/16，62.5%)，切缘eIF4E阴性组11例(11/37，29.7%)。切缘eIF4E阳性组局部复发率高于阴性组(37.5% vs 16.2%，P<0.05);远处转移率(18.7% vs 10.8%)和死于肿瘤者2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

　　2.3　生存时间

　　切缘eIF4E阴性组37例生存5年以上32例，切缘eIF4E阳性组16例生存5年以上13例，5年累积存活率分别为69.8%，37.3%(P=0.007) ，平均生存时间分别是(112±7)个月和(43±9)个月 。

　　3　讨论

　　依据HE染色病理组织学检查判断手术切缘是否残留癌细胞是目前临床上的常规方法，但阴性切缘仍有一定的复发率。大量的临床病理资料证实直肠癌的逆向壁内扩散是有限度的。Willams等[6]报道90%扩散限于1 cm内，10%扩散超过1 cm，仅6%扩散>2 cm。Lazorthes等[7]发现21%扩散在0.5 cm以内，仅5%扩散超过0.5 cm。

　　国内外许多学者将p53蛋白的表达或突变用于肿瘤切缘的检测，但直肠癌患者中p53突变发生率低，限制了以p53的突变与否来判断直肠癌手术切缘阴阳性的应用，需要进一步寻找敏感性更高的分子生物学指标。eIF4E是新近发现的原癌基因，在某些实体瘤中表达为100%，而在良性肿瘤和正常组织中均无表达[8-11]。因此，本研究对病理组织学检查癌细胞阴性切缘的eIF4E蛋白进行了检测，结果显示：eIF4E蛋白在原发灶和阴性切缘中阳性率分别是100%和30.2%，进一步比较切缘eIF4E表达阳性和阴性2组的复发率和5年存活率，发现切缘eIF4E蛋白阳性组的复发率高，存活率低，与其他学者的研究结果相一致[3，5-6]。Franklin等[12]对31例常规病理组织学检查切缘阴性的喉癌患者的eIF4E表达研究发现，eIF4E阳性组67%(12/18)的患者局部复发，明显高于eIF4E阴性组(7.7%，1/13)，eIF4E阳性组的无瘤存活率也低。这提示eIF4E蛋白可能是常规病理组织学检查切缘癌细胞阴性患者的复发和预后判断的一种敏感的分子生物学指标。本研究未发现eIF4E的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移等的相关性。

　　对直肠癌切缘病理组织学检测癌细胞阴性患者进行eIF4E蛋白检查，目的不仅仅是筛选出预后差的患者，更重要的对这些患者进行及时的干预，提高患者的存活率。eIF4E可作为肿瘤恶性改变的分子标志和预后指标，并有可能作为基因治疗的靶目标。抑制eIF4E表达不仅可以减少相关肿瘤基因的表达，还可增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。eIF4E过度表达与组织恶变的因果关系尚未确定，确切的翻译起始因子的作用机制亦不明确。根据eIF4E在恶性肿瘤中的超常表达进而推测， eIF4E可能接受多种肿瘤转移因子的共同调节， 其表达量的变化是多种因子通过多条信号传递通路的激活而共同作用于eIF4E基因的结果。

　　但手术切缘病理组织学检查癌细胞阳性与切缘中仅有分子生物学变化者不同，后者只有基因变化而没有形态学改变，可能是肿瘤发生的早期阶段，也有可能成为肿瘤复发的根源。微转移的出现虽然并不意味着一定形成明显的临床病灶，即转移的无效性，但一旦条件许可(癌细胞的生物学特性、机体的免疫状态及宿主器官微环境，血循环中至少104个肿瘤细胞)，即能进入增殖状态而发展为临床显性转移。直肠癌行根治术后，其复发和转移率高达30%~50%，特别是切缘阴性和无淋巴结转移的TNMⅠ期和Ⅱ期患者，5年内死于局部复发或转移的近30%，这提示直肠癌患者存在微转移[13]。微转移概念的出现将使传统TNM分期得到补充，微转移的检测可正确的评价患者的预后，早期发现微转移并及时治疗，有望将微转移扼杀在转移灶形成的摇篮中，这对减少直肠癌术后转移和复发、争取良好的预后、提高直肠癌以手术为主的综合治疗的疗效具有重要的意义。

　　【参考文献】

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