P16和PTEN蛋白在食管鳞癌组织中的表达及临床意义
发表时间：2011-12-08 浏览次数：392次
作者：马雪芹,丁艳丽 作者单位：1.青海大学附属医院,2.青海大学医学院
【摘要】目的 探讨抑癌基因p16、PTEN蛋白的表达与食管鳞癌的关系,为食管鳞癌预后判断提供依据。方法 采用免疫组织化学法检测67例食管鳞癌标本中p16、PTEN蛋白的表达。结果 p16蛋白阳性表达率为47.8% ,PTEN 蛋白阳性表达率为58.2%。p16、PTEN 蛋白表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移情况显著相关，且p16与PTEN蛋白的表达具有正相关(r=0.782,P<0.005)。结论 p16、PTEN蛋白联合检测可提高对食管鳞癌预后预测的敏感性。
【关键词】 食管鳞癌 p16 PTEN 免疫组织化学
EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF TUMOR
SUPRESSOR GENE P16 AND PTEN PROTEIN IN
ESOPHAGEAL SQUAMOUS CELL CARCINOMA TISSUE
Ma Xueqin1， Ding Yanli2
(1. Qinghai University Affilicated Hospital; 2.Qinghai university Medical College)
Abstract Objective To investigate the relationship between the exp- ression of tumor suppressor gene p16 and PTEN protein and the biological behaviors of esophageal squamous cell carcinoma tissue. Methods The expression of p16 and PTEN proteins in 67 esophageal squamous cell cancer specimens was investigated with immunohistochemical technique using p16 and PTEN antibodies. The relationship between the expression of p16 and PTEN proteins and the clinicopathological parameters of esophageal squamous cell cancer was analyzed. Results The frequency of expression of p16 and PTEN proteins was 47.8% and 58.2% in esophageal squamous cell cancer, respectively. The expression of p16 and PTEN proteins was positively correlated with the imbibitions and metastasis of esophageal squamous cell cancer (P <0.05 respectively). Moreover, there was a positive correlation between the p16 and PTEN protein expression in colorectal cancer (r =0.782, P <0.005). Conclusion Expression of tumor suppressor gene p16 and PTEN might be helpful in predicting the biological behavior and prognosis of esophageal squamous cell cancer.
Key words Esophageal squamous cell cancer P16 PTEN Immunohistochemistry
在食管癌变过程中, 多种癌基因的激活和抑癌基因的失活发挥着极其重要的作用[1]。p16 基因又名多瘤抑制基因(multiple tumour suppressor1 ,MTS1),位于染色体9q21 ,是直接参与细胞周期调控的新型抑癌基因。PTEN 基因(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 10 ) 是目前发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因。本文应用SP免疫组化技术, 检测了抑癌基因p16、PTEN在67例食管鳞癌组织中的表达情况。
1 材料与方法
1.1 材料
67例食管癌标本取自青海大学附属医院2006年11月至2008年3月手术切除标本，其中男性48例，女性19例，年龄在40～72，平均(58.04±4.76)岁。所有病例就诊前均未经任何放疗、化疗。67例均经病理组织学确诊为鳞状细胞癌,其中Ⅰ级27例, Ⅱ级21例, Ⅲ级19例; 20例(浅层组)肿瘤浸润黏膜层、黏膜下层或浅肌层, 47例(深层组)肿瘤浸润深肌层或外膜层;有淋巴结转移者27例,无淋巴结转移者40例。
1.2 主要试剂
鼠抗人p16单克隆抗体,美国Santa Cruz公司产品,鼠抗人PTEN单克隆抗体, Santa Cruz公司产品, SP免疫组织化学试剂盒,美国ZYMED公司产品。以上试剂均购自北京中杉公司。
1.3 方法
1.3.1 实验方法
按试剂盒说明书规定方法进行免疫组化染色及食管癌组织中p16和PTEN蛋白表达的检测。肿瘤标本切成4 μm厚连续切片, 常规脱蜡、水化、DAB显色, 用透明中性胶封片。用已知的食管癌病例作为阳性对照, 采用PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3.2 结果判定方法
p16基因的表达产物定位于细胞核,凡细胞核呈棕黄色者则被认为是阳性细胞; PTEN阳性显色为棕色,定位于细胞质或胞核。随机选择10个高倍视野，计数100个肿瘤细胞，计算阳性细胞百分率，p16、PTEN阳性细胞占肿瘤细胞≥25%者为阳性，<25%者为阴性。
1.4 统计学处理方法
应用SPSS11.5软件对实验数据行χ2检验,方差分析及Spearman相关分析。检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 食管鳞癌组织中p16蛋白和PTEN蛋白的表达情况
67例食管鳞癌组织中p16蛋白表达的阳性率为47.8%(32/67);PTEN蛋白表达的阳性率为58.2%(39/67)。
2.2 p16和PTEN蛋白表达与食管鳞癌临床病理特征的关系p16和PTEN蛋白表达与食管鳞癌各临床病理特征间的关系
2.3 p16和PTEN蛋白在食管鳞癌中表达的相关性 p16和PTEN表达的相关性
3 讨论
正常细胞内的p16蛋白是CDKs的抑制蛋白，能特异性地在G1卡点中与cyclinD1竞争结合CDK4/6，抑制cyclinD1/CDK4/6复合物的蛋白激酶活性，阻止细胞通过G1/S期限制点进入S期，细胞停滞在G1期，从而使细胞的生长受到抑制。p16蛋白表达缺失可出现于多种恶性肿瘤组织中，因此p16基因又称多瘤抑制基因[2]。在肿瘤细胞内，p16基因出现突变、缺失或启动子区异常甲基化后可导致p16蛋白的非正常表达，出现cyclinD1与CDK4/6结合增加，使细胞增殖失控,从而导致肿瘤发生[3]。在本研究中, 有淋巴结转移组及浸润程度深层组p16蛋白的阳性表达率明显低于无淋巴结转移组及浸润程度浅层组, 与Takeuchi 的研究结果相似[4] , 即p16蛋白对食管癌的浸润和转移有抑制作用。研究发现,在肺癌、垂体腺瘤[5]、胆管癌[6]等中存在p16基因缺失、突变及启动子区甲基化,表明在肿瘤形成过程中p16基因起着相当重要的作用。Yoo等[7]用组织微阵列的方法分析发现,在非小细胞肺癌中p16阳性病例5年生存率显著高于阴性病例,表明p16表达与患者的预后密切相关。
PTEN可通过抑制肿瘤血管生成而抑制肿瘤生长、侵袭和转移。[8]研究表明PTEN基因在维持细胞的增殖、分化和凋亡平衡中起重要作用,并可能参与调节细胞生长,肿瘤浸润、转移和血管形成。[9]本实验结果证实PTEN蛋白阳性表达率均随癌组织浸润深度的加深而明显降低(P < 0.05) ,且在有淋巴结转移的癌组织中的表达明显低于无淋巴结转移的癌组织(P<0.05),此结果提示PTEN蛋白的异常表达与食管鳞状细胞癌的浸润及淋巴结转移密切相关。本研究结果还显示, PTEN蛋白表达阳性率随食管鳞状细胞癌分化程度的降低而明显下降( P <0.05) ,提示PTEN基因在诱导肿瘤细胞分化过程中起重要作用。
分析临床病理资料发现，p16、PTEN蛋白表达水平在食管鳞癌的深层浸润、有淋巴结转移者表达水平降低(见表1)，提示上述蛋白检测可作为预测肿瘤转移潜能和预后的参考指标。我们研究发现, 在食管鳞癌中p16的表达与PTEN表达呈正相关(r=0.782,P<0.005), 表明两种基因在食管鳞癌的发生和转移过程中具有协同作用, 其作用机理尚需进一步研究。
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