大肠腺癌中HSP27和MMP9的表达及意义

　　作者：黄炳臣,罗春英,陆海善,黄永秩　　作者单位：右江民族医学院附属医院病理科

　　【摘要】 目的观察大肠腺癌中HSP27和MMP9的表达情况。方法 选择手术切除结直肠腺癌标本62例，并取20例癌旁正常大肠黏膜组织标本作对照，采用SP免疫组化方法检测HSP27和MMP9的表达。观察大肠腺癌组和对照组中HSP27、MMP9的表达;大肠腺癌组中年龄、性别、肿瘤直径、组织学类型、淋巴结转移以及Dukes分期与HSP27、MMP9表达的关系。结果 大肠腺癌组的HSP27、MMP9表达均显著高于对照组(P<0.01)。在中低分化腺癌和存在淋巴结转移患者的HSP27、MMP9表达显著高于高分化和无淋巴结转者(P<0.05或0.01);HSP27与MMP9在大肠腺癌中的表达无显著性差异(P>0.05)。结论 HSP27和MMP9在大肠腺癌的发生、分化、浸润、转移中起协同作用。

　　【关键词】 大肠肿瘤;腺癌;HSP27;MMP9

　　Expression of HSP27 and MMP9 and their significance in colorectal adenocarcinoma

　　HUANG Bingchen,LUO Chunying,LU Haishan,HUANG Yongzhi

　　(Department of pathology,Affiliated Hospital of Youjiang Medical

　　College for Nationalities,Baise 533000)

　　【Abstract】 Objective To study the expression of HSP27 and MMP9 in colorectal adenocarcinoma. Methods 62 cases of Intestinal biopsy specimens of colorectal adenocarcinoma and 20 normal adjacent intestinal mucosal tissues were collected.The expression of HSP27 and MMP9 was detected by immunohistochemical staining(SP method).Results The positive rates of HSP27 and MMP9 protein was significantly higher in colorectal adenocarcinoma group than that in normal intestinal mucosa group(P<0.01). The positive rates of HSP27 and MMP9 protein was significantly higher in poorly differentiated colorectal adenocarcinoma and with lymph node metastasis than that in welldifferentiated colorectal adenocarcinoma and nonlymph node metastasis(P<0.05 or 0.01).Conclusion The expression of HSP27 and MMP9 has synergistic effect for the occurrence,differentiation,infiltration and transfer of colorectal adenocarcinoma.

　　【Key words】 colorect neoplasms;adenocarcinoma;HSP27;MMP9

　　大肠癌是消化道常见恶性肿瘤之一。肿瘤的复发和转移是大肠癌患者的主要死亡原因，而肿瘤的转移是多基因多因素参与的多步骤的复杂过程。研究显示，热休克蛋白27(heat shock protein 27，HSP27)，可能参与肿瘤的发生和转移[1]。我们应用免疫组化法在62例结直肠癌组织中分别检测HSP27和基质金属蛋白酶9 (matrix metalloproteinase 9，MMP9)的表达，探讨二者与结直肠癌的发生、发展和转移的关系，为临床诊断、治疗和预后判断提供依据。

　　材料与方法

　　1.标本来源

　　收集右江民族医学院附属医院2003年1月～2008年6月手术切除结直肠腺癌标本62例，其中男性38例，女性24例，年龄33～71岁，<50岁27例，≥50岁35例，中位年龄55.6岁;其中肿瘤直径<3 cm 22例，直径≥3 cm 40例;高分化管状腺癌和黏液腺癌39例，中低分化腺癌和黏液腺癌23例;有淋巴结转移33例，无淋巴结转移29例。Dukes分期A+B期25例，C+D期37例。取20例癌旁正常大肠黏膜组织作为对照，其中男性13例，女性7例，年龄43～65岁，中位年龄51岁。

　　2.试剂

　　HSP27鼠抗人单克隆抗体和MMP9鼠抗人单克隆抗体，SP染色试剂盒和DAB显色剂均购自福州迈新生物技术公司。

　　3.检测方法

　　采用SP法免疫组化染色。按试剂盒说明书进行，将4 μm厚的切片常规脱蜡至水，经0.3%过氧化氢10 min，枸橼酸盐缓冲液加热抗原修复20 min，正常羊血清封闭10 min，滴加第一抗体，4℃孵育过夜，清洗后滴加第二抗体，37℃下30 min，清洗后滴加第三抗体，37℃下30 min，DAB显色，苏木精复染，中性树胶封片。用PBS代替一抗作阴性对照，用已知的HSP27、MMP9染色阳性的乳腺癌组织切片分别作二者的阳性对照。

　　4.结果判断

　　HSP27以细胞质和胞核出现淡黄、棕黄、棕褐色颗粒者为染色阳性细胞，MMP9以细胞质出现淡黄、棕黄、棕褐色颗粒者为染色阳性，在400倍视野下随机计数500个细胞，半定量分析，根据镜下观察阳性细胞比例及阳性着色强度。阳性细胞数按无着色、阳性数<1/3、1/3～2/3和>2/3分别判为0、1、2、3分，每张切片阳性细胞的着色按无着色、黄色、棕黄色和棕褐色分别判为0、1、2、3分，根据两项积分之和判断其结果，≥3分为阳性。

　　5.观察项目

　　观察大肠腺癌组和对照组中HSP27、MMP9的表达;大肠癌组中年龄、性别、肿瘤直径、组织学类型、淋巴结转移以及Dukes分期与HSP27、MMP9表达的关系。

　　6.统计学处理

　　应用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，计数资料行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　结 果

　　1.大肠腺癌与对照组HSP27、MMP9的表达

　　大肠腺癌组的HSP27、MMP9表达均显著高于对照组(P<0.01)。大肠腺癌与对照组HSP27、MMP9的表达比较

　　2.不同年龄大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达 不同年龄之间大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达无显著性差异(P>0.05)。见表2。表2 不同年龄大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达

　　3.不同性别大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达

　　不同性别之间大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达无显著性差异(P>0.05)。不同性别大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达

　　4.不同肿瘤直径大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达

　　不同肿瘤直径之间大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达无显著性差异(P>0.05)。 不同肿瘤直径大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达

　　5.不同组织学类型大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达

　　中低分化大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达显著性高于高分化者(P<0.05或0.01)。不同组织学类型大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达

　　6.不同淋巴结转移情况大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达

　　有淋巴结转移的大肠腺癌患者的HSP27、MMP9表达显著性高于无淋巴结转移者(P<0.05或0.01)。不同淋巴结转移情况大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达

　　7.不同Dukes分期大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达

　　不同Dukes分期之间大肠腺癌患者的HSP27、MMP9表达无显著性差异(P>0.05)。不同Dukes分期大肠腺癌者的HSP27、MMP9表达

　　8.大肠腺癌中HSP27与MMP9表达的比较

　　HSP27与MMP9在大肠腺癌中的表达无显著性差异(P>0.05)。 大肠腺癌中HSP27与MMP9的表达情况注：χ2=1.087，P>0.05

　　讨论

　　热休克蛋白(Heat shock proteins,HSPs),是细胞在生理应激或在病理因素刺激下，细胞内合成的一组高度保守的蛋白质，具有保护细胞免受各种应激损伤的作用。热休克蛋白27(HSP27)是热休克基因(HSG)编码的低分子量蛋白质之一。研究表明，HSP27在多种肿瘤中呈现高表达，参与调节细胞的增殖、分化和细胞凋亡信号转导[2～4]。本研究结果显示，HSP27在大肠癌组织的表达阳性率显著高于正常组织(P<0.01)，提示HSP27与大肠腺癌的发生有关。在中低分化腺癌和存在淋巴结转移患者的HSP27表达显著高于高分化和无淋巴结转者(P<0.05);提示其表达可能与大肠腺癌的分化、淋巴转移相关，而与年龄、性别、肿瘤直径及Dukes分期之间无显著相关性(P>0.05)。

　　MMP9是一个Zn2+依赖性内太酶超家族MMPs中分子量最大的酶，主要由结缔组织细胞、内皮细胞、巨噬细胞、粒细胞及肿瘤细胞等合成和分泌[5]。其主要功能是降解细胞外基质中的Ⅳ型胶原，MMP9通过降解基底膜中Ⅳ型胶原，参与肿瘤的浸润与转移。现已发现，MMP9的表达与多种肿瘤的侵袭、浸润和转移能力有关[6，7]。本研究结果显示，MMP9在大肠腺癌组织的表达阳性率显著高于正常组织(P<0.01)，提示MMP9参与大肠癌的发生。在中低分化腺癌和存在淋巴结转移患者的MMP9表达显著高于高分化和无淋巴结转者(P<0.01);提示其表达可能与大肠腺癌的分化、淋巴转移相关，而与年龄、性别、肿瘤直径及Dukes分期之间无显著相关性(P>0.05)。

　　随着研究的不断深入，HSP27与肿瘤的关系日益受到重视。研究发现，HSP27 在肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌等多种腺癌组织中高表达，认为其是影响患者预后的不良因素[8]。本研究发现，HSP27与MMP9在大肠腺癌中的表达无显著性差异(P>0.05)。但均与大肠腺癌的分化、淋巴转移相关，而与年龄、性别、肿瘤直径及Dukes分期之间无显著相关性(P>0.05)。表明HSP27和MMP9在大肠腺癌的分化、浸润转移中起协同作用。因此，我们认为，联合检测HSP27和MMP9可作为判断大肠腺癌患者预后的指标。

　　【参考文献】

　　[1]赵勇刚，谢 伟，冯茂辉，等.热休克蛋白 27 在肺癌中的表达及其临床意义[J].中国现代医学杂志，2009,19(8):1192-1194.

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　　[3]Doshi BM,Hightower LE,Lee J.The role of HSP27 and ac tin in the regulation of movement in human cancer cells responding to heat shock[J].Cell Streee konstantinopoulos PA,Chaperones,2009,14(5):445-457.

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