肿瘤组织标本库的创建及意义

　　作者：党裔武 作者单位：广西医科大学，第一附属医院，广西 南宁 530021

　　【摘要】 目的:探讨肿瘤组织标本库的创建和管理方法。方法：通过文献综述及实地调查深入了解国内知名大型标本库的创建过程及其管理经验。结果：肿瘤组织标本库通过有效地收集和科学地保存人类肿瘤组织，避免研究资源浪费的同时，也为肿瘤研究提供了便利和丰富的资源。结论：标本库的建立在促进肿瘤研究进程中发挥着举足轻重的作用。

　　【关键词】 肿瘤 组织标本库

　　Establishing a Tumour Bank and Its Significance

　　DANG Yi-wu, CHEN Gang, LUO Dian-zhong,et al

　　(Guangxi Medical University, Nanning,Guangxi 530021, China)

　　Abstract: Objective To explore how to establish and manage a tumour tissue bank. Methods The experience of building and managing a tumour bank was obtained by literatures and field survey. Results By collecting and preserving human tumour tissues effectively and scientifically, tumour tissue banks could avoid the waste of research materials, as well as provide convenient and abundant research resource. Conclusion Tumour tissue banks play important roles in the process of tumour research.

　　Key words: Tumour; Tissue bank

　　恶性肿瘤作为人类杀手之一，其危害日趋上升，恶性肿瘤的研究也已成为医学研究的热点。虽然近年来恶性肿瘤研究已经取得了一定的进展，但是依然存在着一些不尽人意的现象，如研究的重现性较差，研究周期长，进程较慢等。肿瘤研究和服务的最终对象是人体，故肿瘤研究也必须从动物和细胞株的研究逐渐转向人体肿瘤组织标本的研究。作为恶性肿瘤研究材料的肿瘤组织标本在促进肿瘤研究进展过程中就扮演了重要的角色，成为了肿瘤研究工作的基础[1]。然而如何获取这宝贵而有限的人体肿瘤资源并将其充分利用于肿瘤的研究，这些都是尚待解决的问题。针对这些问题，自二十世纪末期以来国外兴起了标准化肿瘤标本库的创建，随之，国内也渐见少数这方面的报道。国外先后建立起了单病种和多病种的肿瘤组织库，并逐渐规范化，形成了标准化的操作体系[2]。如欧洲不少国家的医疗机构拥有了自己的标准化的冰冻肿瘤组织标本库[3～5]。近年国内某些研究机构也建立了肿瘤库，如河南省肿瘤医院、广东省肿瘤医院、天津省肿瘤医院等。我们做了一些相应的考察、研究和分析，现将报道如下。

　　1 资料与方法

　　1.1 文献综合 通过查阅下列国内外数据库的相关文献，获取相关的资讯和经验。PubMed (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/);OVID;美国PML;重庆维普.中文科技期刊数据库(VIP);清华同方.中国期刊全文数据库/ (CNKI);万方数据库;中文生物医学期刊数据库/解放军医学图书馆(CMCC);中国生物医学文献光盘数据库/中科院医学信息所(CBM) ;国家工程技术图书馆;中国重大科技成果数据库(STAC);中国科技成果数据库(CSTAD);中国科技论文统计数据库(CSTP)等。共获相关文献18篇。通过这些文献的学习，对标本库的建设和管理有了理论的认识。

　　1.2 实地考察 实地考察河南省肿瘤医院标本库，并与相关人员进行面对面的交流，学习他们建库的成功经验。河南省肿瘤医院标本库启动于2006年，是由中国与挪威双方共同建立的肿瘤专业性标本库，2007年初正式投入使用，目的是建立与国际接轨的标准化组织库。在国内享有相当的知名度，是国内标本库建设的典型，因此,选择对其进行参观学习。

　　2 结果

　　肿瘤组织标本库创建和管理的经验总结如下：

　　2.1 标本库的建立

　　2.1.1 设施与仪器设备 设置专门的库房， 50 m2 以上，带空调，放置用于存放标本的液氮罐，超低温冰箱等冷冻设备;另外设分子实验室，免疫室等，内配备离心机，PCR仪，微量加样器等设备，用于标本的核酸提取和蛋白免疫检测等研究;配置收集标本所需的取材台，取材器具，照相机等;资料管理使用的电脑，打印机等。

　　2.1.2 实施方案与技术路线

　　肿瘤库建立的基本路线是收集、保存、利用。标本的收集关键在于标本取材的准确性，操作过程避免外界污染以及标本之间的交叉污染，严格控制标本离体时间，从而确保标本的质量;标本的保存要根据标本的用途采取最优的保存方法，保存过程中要定期进行质量控制，同时对标本的相关资料要保存完整;标本的利用要严格把关，申请者必须满足利用条件，并且办理相关手续，从而使得宝贵资源能物尽其用，避免浪费(见图1)。

　　图1 样本采集的流程规范(略)

　　标本收集的准备工作：术前办理相关手续，标本收集者首先对病人家属或病人行知情说明，并签署术中标本留取活检协议书，同时与临床科室、手术室密切联系，并由临床医生填写标本入库登记表，事先跟病理科医生协商，在组织标本足够大，能确保病理检查的前提下，切取少许组织进库保存，遇到小组织标本要果断放弃收集。取材器材方面的准备，供存放标本的液氮罐，经灭菌的取材器材，照相机，已编号的灭菌储藏管，资料登记本，橡胶手套等。

　　冰冻组织标本的收集，标本的选取：在组织标本足够大，手术切下肿瘤组织后，主刀医生在无菌条件下将肿瘤组织用生理盐水冲洗两次后一分为二，3/4用于病理检查，1/4用于肿瘤库冻存。选取的标本包括肿瘤组织(避免取坏死组织并尽量冲洗尽血液)、 瘤旁组织和远端正常组织。标本的切取方法与时间控制：首先对大体标本进行观察和拍照，确认肿瘤的部位、范围，并与周围异己组织鉴别，进行相应的描述登记。在标本离体后应在最短时间内(<30 min) 更换器具切取包括肿瘤、瘤旁、正常组织组织标本，成直径约0.2 cm～0.5 cm的组织块，各取2块～4块，分别装入已编号的带有橡皮垫圈的灭菌冻存管中，旋紧盖子后放入液氮转移罐，防止冷冻后爆管。标本的保存：将液氮转移罐中的标本储藏管按次序转移入超低温冰箱相应位置保存。标本实行分类分组保存，每一病种的每一例标本的肿瘤、瘤旁以及正常组织配组放同一位置。

　　常规石蜡标本的收集：在病理科查找相对应的，经确诊的石蜡包埋组织切染HE对应编号保存。

　　血液标本的收集：术前在病人或病人家属知情同意前提下，抽取外周血10 ml，离心后收集血清、血浆各10支，作相应标记后，于-80℃冰箱保存。

　　标本信息资料的记录，主要包括以下内容：病人的一般资料(姓名、性别、年龄、民族、职业、联系方式、随访、住院号、临床诊断、病理诊断等);标本资料(入库编号、入库时间、病变部位、标本描述、附上相片等);病理资料(肿瘤体积、组织类型、分级、浸润深度、切缘情况、免疫表型等);存放位置资料(入库编号、存放位置、标本数量、存放坐标等);标本使用(出库编号、出库时间、使用单位、使用人、审批单位、审批人等);标本质控信息(入库编号、实验内容、实验结果、实验人、实验日期等);标本废除信息(废除序号、入库编号、标本原始位置、废除日期、废除原因、经手人等)。

　　2.2 标本的质量控制

　　2.2.1 取材部位必须准确，明确肿瘤组织和瘤旁组织分界。严格控制组织血流阻断至组织放入液氮中冻存所耗的时间或血液标本离体至冻存所耗的时间。

　　2.2.2 为了保证标本的质量和完整性，满足研究的需要，还要避免基因组DNA、RNA和蛋白的降解。

　　2.2.3对库存标本定期随机抽样进行总RNA提取鉴定[6～7]，对RNA样品经紫外分光光度计分析，若得出A260/A280>1.6;1%琼脂糖凝胶电泳后，可见明显的28 s和18 s条带，而且28 s的亮度大约是18 s的1倍～2倍，表明RNA保存比较完整 。有研究发现样本取材时间对样本RNA质量存在着关键影响，时间越短RNA保存越完整，众多文献推荐在样本切除后30 min内取材 [4,6～8] 。

　　2.3 标本库的规范管理 标本库从建设开始就应有统一的管理规范，从标本的入库到出库都必须做到有章可循。标本库人员编制相对固定，实现专人负责，增强对标本库维护的责任感，避免标本信息在标本保存的过程中丢失，从根本上保证标本质量。同时标本库的维护人员需具备有一定的技术水平和实验室管理能力，从而保证标本从收集、保存到利用整个过程能有条不紊的进行。

　　3 讨论

　　科学研究是严谨的，标本库的建设也必须标准化，首先从其库房建设开始，要有其独立的储存空间，此外，从标本的取材、保存以及标本资料的保存都应该有专用的仪器设备，并且设立相应实验室。完整的设备设施保证了标本收集的顺利进行，设施的专项专用可以有效避免其他混杂因素对肿瘤组织库有序运转的影响，也避免了外界因素对标本质量的影响。

　　肿瘤标本库的建立具有巨大的现实意义。标本库的建立能有效地避免离体肿瘤组织因缺血在短期内失去其相应的生物学活性，如基因的降解、蛋白的变性等，利用同一标本库的标本进行相关研究能有效地提高研究结果的重现性。标本库资源除了能满足自身的研究需要，同时可向医院，科研机构和高等院校的研究者提供经确诊的，合乎科研设计要求的各种肿瘤标本和正常对照标本。同时依靠高质量的肿瘤组织标本保存体系，规范和高效使用肿瘤组织标本，可以建立相关技术平台，包括常规和特殊组织的组化实验，制作组织芯片，进行激光显微切割和基因筛选、蛋白分析等，不仅能有效地利用有限的人类肿瘤组织标本，为人类直接探究肿瘤发生、发展和迁移机制提供具体研究对象，直接利用肿瘤库资源，可以节省工作时间，缩短研究周期，加快研究进程，可早出成果，快出人才。同时肿瘤库的建立能有效加强研究部门，研究者之间的相互合作，有效提高肿瘤研究水平，将更为有利于肿瘤研究的发展。

　　标本库的建设，首先要考虑的是建库条件，如组织标本的来源，设施设备等。同时，在建库过程中还应该做好以下几个方面的工作：伦理方面是前提，收集病人的标本务必在经得病人或家属同意前提并签署知情同意书，与临床科室和病理科协商，在绝对保证病理检查之须前提下才进行标本收集，避免不必要的纠纷;标本质量保证方面是关键，组织的收集应严格按照规范由专人执行，收集者应当具备相当的专业知识，富有责任心。标本的保存过程中还应该对标本的相关资料完整保存，并定期对标本进行质量检查;标本的使用是目的，妥善处理好标本的使用，从而做到物尽其用，减少不必要的浪费，申请者在申请时务必填写申请书，说明其用途去向，使用者必须有一定的资历，有一定的科研成果。

　　随着医学研究的发展，肿瘤研究已经成为热点，人体肿瘤组织作为研究的对象，需求量也大大上升。为了有效地利用医院的标本资源，服务到肿瘤研究的发展中，标本库将在其中扮演着重要的角色，随着肿瘤标本库的兴建，攻破恶性肿瘤的时日有望提前到来。

　　致谢：感谢河南省肿瘤医院给我们提供了参观学习的机会!

　　【参考文献】

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