跨膜蛋白KAI1和FasL蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义

　　作者：郑立红 李玉兰 高莉莉 作者单位：齐齐哈尔医学院生物遗传教研室，黑龙江 齐齐哈尔 161006

　　【摘要】目的 探讨乳腺癌组织及其癌旁正常乳腺组织、纤维腺瘤组织中KAI1和FasL蛋白表达及与淋巴结转移的关系。方法 采用免疫组化检测25例伴淋巴结转移的乳腺癌、40例无淋巴结转移的乳腺癌、纤维腺瘤组及20例癌旁正常组织中KAI1和FasL蛋白的表达。结果 乳腺癌组织中KAI1蛋白表达阳性率显著低于纤维腺瘤组、癌旁正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)。且随着淋巴结转移的出现，KAI1 蛋白表达阳性率降低,各组间差异具有统计学意义(P<0.05)，与组织分级成正相关;乳腺癌组织中FasL蛋白表达阳性率显著高于纤维腺瘤组、癌旁正常乳腺组织，差异有统计学意义(P<0.05)，且与淋巴结转移、组织分级呈负相关。结论 KAI1 基因表达下调和FasL 基因表达上调在乳腺癌发展中起重要作用，且二者的表达阳性率与乳腺癌淋巴结转移有关。

　　【关键词】 乳腺癌;KAI1基因;FasL基因

　　KAI1 基因是一种与肿瘤转移抑制有关的基因〔1〕,属四跨膜超家族(transmembrane 4 superfamily,TM4SF)成员,其编码产物为细胞膜糖蛋白,具有4个高度保守的跨膜结构区,主要存在于细胞表面,参与细胞增殖、黏附和运动的调节。此外,KAI1蛋白对多种肿瘤的转移具有抑制作用,其表达下调与肿瘤进展和预后关系密切〔2〕。Fas配体(FasL)是肿瘤坏死因子受体/神经生长因子家族成员之一,当膜型FasL与膜型Fas交联后可激活Fas相关死亡结构域(FADD)或使线粒体释放细胞色素c〔3〕,进而激活在细胞凋亡中起关键作用的caspase3。可溶型Fas释放到肿瘤微环境中,中和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)表面的mFasL,阻断其对肿瘤细胞的凋亡诱导作用,导致肿瘤细胞的免疫逃逸〔4〕。本研究拟观察KAI1、FasL蛋白在乳腺癌组织中的表达水平,探讨其与肿瘤临床病理特征的关系,分析它们在乳腺癌中表达的相互关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本采集

　　收集浙江宁波妇女儿童医院2000～2006年乳腺癌实施根治手术标本65例，有淋巴结转移者25例,无淋巴结转移者40例,癌旁正常组织标本20例，术前均未接受化疗，患者平均年龄59岁(35～72岁)。纤维腺瘤组织标本17例，平均年龄57(28～70)岁。临床资料完整，随访确切，石蜡标本保存。

　　1.2 方法

　　1.2.1 免疫组化

　　每例标本切取3张4 μm厚切片，其中1张做HE染色，另外2张做免疫组化染色，染色采用SP法。试剂KAI1、FasL均为鼠单克隆抗体，二抗为生物素化兔抗鼠IgG，以上试剂均购自福州迈新生物技术公司，具体按常规SP法操作，用PBS代替一抗作空白对照。

　　1.2.2 免疫组化结果评定

　　免疫组化染色阳性反应为黄至棕黄色颗粒，KAI1、 FasL定位细胞浆，以细胞数>10%为阳性标准，阳性强度分级：细胞数10%～25%为(+)，25%～50%为()，>50%为()。

　　1.2.3 统计学处理统计学方法

　　应用SPSS10.0统计分析软件处理所有数据,χ2检验比较率的差异。

　　2 结 果

　　2.1 KAI1和FasL蛋白在乳腺癌中的表达

　　KAI1和FasL蛋白表达均定位在细胞浆。65例乳腺癌中24例(36.9%)KAI1蛋白阳性表达,其阳性率显著低于纤维腺瘤组(17/17，100%)和癌旁正常组织(85%，17/20);而FasL在乳腺癌中的阳性率为61.5%(40/65),显著高于纤维腺瘤组(2/17，11.8%)和癌旁正常组织(30%,6/20);以上差异均具有统计学意义(表1)。

　　2.2 KAI1和FasL蛋白表达与乳腺癌患者临床病理生理特征的关系

　　KAI1蛋白表达与患者的年龄和临床分期无关(P>0.05),与淋巴结转移、组织分级正相关(P<0.05);FasL蛋白表达与患者的年龄无关(P>0.05),与淋巴结转移和临床分期、组织分级呈负相关(P<0.05) (表1)。表1 乳腺癌中KAI1、FasL阳性表达与临床病理特征的关系(略)

　　2.3 KAI1和FasL蛋白在乳腺癌中表达的关系

　　FasL表达阳性的乳腺癌组织中KAI1蛋白表达阳性率为45%(18/40),FasL蛋白表达阴性的乳腺癌中KAI1表达的阳性率为24%(6/25),两种蛋白表达密切相关(P=0.027)。

　　3 讨 论

　　KAI1基因作为一种肿瘤转移抑制基因,主要参与调节细胞与细胞、细胞与细胞外基质间的相互作用,使肿瘤细胞不易脱离原发灶,阻断了转移的黏附环节而抑制转移。KAI1蛋白可通过作用于Src激酶家族介导的胞内信号通路促进肿瘤细胞间的黏附,抑制肿瘤的转移〔5，6〕。

　　另外KAI1可与EGF受体相互作用,下调EGF与相应受体的结合,致使EGF诱导的信号传导迅速衰减,上皮细胞的板状伪足伸展和细胞的迁移明显受抑制,从而抑制血管的形成,最终抑制肿瘤的转移。研究显示KAI1基因缺失、突变和表达异常在妇科恶性肿瘤侵袭转移中起到十分重要的作用。Christopher等〔7〕观察到随着卵巢癌分化从I级到Ⅲ级,KAI1蛋白有从细胞膜向胞浆转移的现象,这提示细胞膜KAI1基因蛋白表达缺失使细胞之间黏附力的丧失可能是肿瘤发生转移的机制之一。本结果表明乳腺癌中KAI1蛋白的阳性率明显低于正常乳腺组织和纤维腺瘤组织,KAI1蛋白的表达随乳腺癌病理分期增高而下降，有淋巴结转移的组织中KAI1蛋白阳性率明显低于无转移组织，提示KAI1可能抑制乳腺癌侵袭和转移。

　　FasL是肿瘤坏死因子(TNF)家族的三聚体跨膜蛋白，FasL与其受体Fas结合而诱导携带Fas的细胞凋亡。FasL在乳腺癌组织中的表达率明显高于相对正常乳腺组织(P<0.01)。有研究表明，FasL表达于多种肿瘤细胞〔8〕，体内外的大量实验表明，各种癌细胞株表达的FasL均能诱导Fas表达的淋巴细胞凋亡，提示肿瘤也可能为免疫豁免区〔9〕，这种保护自身正常组织免受自身免疫破坏的机制同样被肿瘤组织用于清除企图攻击肿瘤细胞的淋巴细胞，从而减少淋巴细胞被杀伤的机会，进而导致肿瘤细胞的过渡增殖。FasL高表达使肿瘤细胞能识别杀伤性CTL，导致CTL凋亡增多和攻击力下降，所以FasL高表达在肿瘤免疫逃逸和对宿主免疫细胞的攻击有着重要作用。已证实肿瘤细胞FasL可诱导肿瘤浸润T淋巴细胞凋亡〔10〕。本实验显示FasL阳性表达与淋巴结转移有关，有淋巴结转移者FasL阳性表达率高于无淋巴结转移者。

　　Shinohara等〔11〕研究发现TNFα可以促进p53突变的肺腺癌细胞系PC14中KAI1的表达。FasL作为TNF家族成员之一,可能参与KAI1表达的调控,因此本研究比较了FasL和KAI1蛋白在乳腺癌中表达的关系。发现FasL和KAI1表达密切相关,提示FasL作为TNF家族成员可能上调KAI1表达。

　　总之,KAI1表达下调和FasL表达上调在乳腺癌发生发展中起重要作用。表达下调的KAI1可能通过降低细胞黏附和提高细胞运动性参与乳腺癌的转移、进展和分化,FasL可能通过调节肿瘤免疫逃逸而构成乳腺癌的转移、进展和分化的分子基础，它们有望作为反映乳腺癌进展的有效客观分子生物学指标。此外，在乳腺癌中FasL和KAI1表达密切相关,为FasL调节乳腺癌细胞中KAI1表达提供了新的实验依据。

　　【参考文献】

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　　5 Kauffman EC，Robinson VL，Stadler WM,et al.Metastasis suppression：the evolving role of metastasis suppressor genes for regulating cancer cell growth at the secondary

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　　9 李佳丽，赵丽纯.Fas/FasL系统与肿瘤的免疫逃逸〔J〕.国外医学·免疫学分册，2001;24(2)：657.

　　10 Gurevich P，BenHur H，Berman V，et al.Expression of apoptosis and apoptosisrelated proteins in microvessels of human ovarian epithelial tumors〔J〕.Anticancer Res,2001;21(2B)：13358.

　　11 Shinohara T，Miki T，Nishimura N,et al.Nuclear factorkappaBdependent expression of metastasis suppressor KAI1/CD82 gene in lungcancer cell lines expressing mutant p53〔J〕.Cancer Res,2001;61(2)∶6738.