抑癌基因PTEN在宫颈癌变过程中的表达及意义

　　作者：魏永志 周琰 陈瑞敏 池云芳 张英 张冬会 王青 高彩霞 曾繁文 作者单位：050011 河北省石家庄市中心医院(魏永志、周琰、陈瑞敏、张英、高彩霞、曾繁文);河北医科大学第四医院(池云芳);河北省人民医院(张冬会、王青)

　　【摘要】 目的 探讨抑癌基因PTEN在人宫颈癌组织中的表达及其与宫颈癌发生、发展的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ)、宫颈癌组织中PTEN的表达情况。结果 PTEN蛋白在正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌组织中表达率逐渐下降，各组与宫颈癌组比较，差异均有统计学意义;正常宫颈和CINⅠ与CINⅢ组比较，差异均有统计学意义。PTEN蛋白表达与宫颈癌临床分期和淋巴结转移具有相关性，与宫颈癌病理学分级无关。结论 抑癌基因PTEN参与宫颈癌的发生发展。

　　【关键词】 宫颈癌;PTEN;免疫组织化学

　　PTEN是迄今发现的第一个具有双特异性磷酸源性的抑癌基因，在维持细胞的增殖分裂和凋亡的平衡中起重要作用，与人类多种肿瘤的发生发展有关[1，2]。在人类多种肿瘤中都能检测到它的失活或突变，与肿瘤的发生及预后密切相关。本研究通过观察抑癌基因PTEN在人宫颈癌变过程不同组织中的表达，探讨抑癌基因PTEN在宫颈癌的发生发展中的作用。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 2004～2007年在石家庄市中心医院妇产科和河北省人民医院妇科住院、手术确诊宫颈癌病例46例(宫颈癌组)，临床分期采用FIGO分期;低分化9例，中分化30例，高分化7例;淋巴结阳性7例，淋巴结阴性39 例;Ⅰ期32例，Ⅱ期14例。患者术前均未接受放疗和化疗。随机选择同期非宫颈疾病住院患者34例(正常宫颈组)，其宫颈正常，宫颈上皮内瘤样病变101例，其中CINⅠ组31例、CINⅡ组39例、CINⅢ组31例。5组年龄、孕产史均衡(P>0.05)。

　　1.2 主要试剂与方法 标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm 厚连续切片，每例标本取5张切片，1张行HE染色，由病理医生再次核对诊断，其余行免疫组化学染色。鼠抗人PTEN多克隆抗体购自北京中山生物技术公司，严格按免疫组化试剂盒说明书操作，PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.3 结果判断标准 PTEN蛋白定位于细胞核，呈棕黄色。每张切片在高倍镜下随机选择5个视野，每个视野计数100个肿瘤细胞中阳性细胞数，计算占肿瘤细胞总数的百分比，取其平均值。阳性细胞数<10%为阴性(-)，≥10%为阳性(+)。

　　1.4 统计学分析 采用SPSS 11.0统计学软件对结果进行分析，组间阳性率比较行χ2检验(或校正检验)或Fisher精确概率计算，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 PTEN蛋白在正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中的表达 PTEN蛋白表达于细胞核，呈棕黄色颗粒。正常宫颈组织和CINⅠ组织无表达，CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌组织中PTEN蛋白表达随病变升级逐渐减弱，各组与宫颈癌组比较，差异均有统计学意义(P<0.05);正常宫颈和CINⅠ与CINⅢ组比较，差异均有统计学意义(P<0.05);其余各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。表1 PTEN蛋白在各组中的表达例注：与宫颈癌组比较，*P<0.05;与CINⅢ组比较，#P<0.05

　　2.2 PTEN蛋白表达与临床病理特征的关系 PTEN表达与宫颈癌临床分期和淋巴结转移呈相关性(P<0.05);与宫颈癌的病理学分级无关(P>0.05)，见表2。表2 宫颈癌组PTEN蛋白表达与临床病理特征分析例注：Fisher精确概率

　　3 讨论

　　PTEN是1977年美国三家实验室几乎同时发现并克隆的，定位于人类染色体10q23.3，全长200 kb，有9个外显子，8个内显子，RNA大小为5.5 kb和2.5 kb。PTEN是迄今发现的第一个具有特异性磷酸酶活性的抑癌基因。该基因突变、失活与人类多种恶性肿瘤的发生发展密切相关，在细胞的生长发育、信号传导和细胞凋亡中起重要作用。目前发现它的抑癌作用主要有[3]：(1)抑制细胞周期：PTEN能特异性的诱导三个周期素依赖性激酶(CDK)抑制剂：p21、p27、p57，同时也抑制细胞周期素的聚集，抑制细胞周期进程，诱导其停止在G1期，从而抑制细胞过渡生长繁殖，维持细胞在正常生长周期中的生长。(2)诱导细胞凋亡：PTEN诱导细胞凋亡与其磷酸酯酶的特性有关。PTEN通过信号转导通路PI3K/AKT脱磷酸，降低AKT水平，AKT能降低凋亡因子，增强抗凋亡蛋白的活性。(3)抑制肿瘤细胞侵袭和转移：FAK是一种酪氨酸激酶，磷酸化活性的FAK在衔接蛋白的偶联下可调节Ras有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路，从而介导细胞的黏附及转移。PTEN可以降低FAK的磷酸化水平，从而抑制细胞的迁移与扩散。(4)抑制肿瘤血管形成：PTEN降低AKT的磷酸化水平，抑制缺氧诱导因子(HIF1)的活性和表达,并降低其稳定性，而HIF1能在转录水平增加VEGF的表达。PTEN缺失可能上调血管内皮生长因子(VEGF)介导的血管内皮细胞增殖、迁移，延长血管出芽的长度。

　　研究表明PTEN蛋白在多种肿瘤中表达下调，且表达水平与肿瘤的恶性程度呈负相关[4]。本研究中发现正常宫颈和CINⅠ组织中PTEN蛋白表达阳性率均为100%，从正常宫颈CIN宫颈癌的演变过程中PTEN蛋白表达阳性率逐渐下调，宫颈癌组织降至43.48%，且差异有统计学意义(P<0.05)，与张培荣等[5]在宫颈鳞癌中的研究结果一致。提示PTEN基因随着病变升级逐渐失活，或者发生了突变，在宫颈癌的发生中起了重要作用。PTEN表达与宫颈癌临床分期和淋巴结转移呈相关性，与宫颈癌的病理学分级无关，提示PTEN的表达缺失与宫颈癌的侵袭有关，可能与宫颈癌的预后有关，此结果支持Harima 等[6，7]的结论。

　　宫颈癌发生发展以及对其预后的影响是多种因素相互作用的结果，今后应从不同角度，利用多个指标进行研究。我们的研究结果提示PTEN在宫颈癌发生发展中发挥重要作用，可能与宫颈癌预后有关，为临床宫颈癌治疗提供了新的领域，比如宫颈癌高危患者在癌前病变期给予一些基因干预或疫苗注射。

　　【参考文献】

　　1 连利娟，林巧稚主编.妇科肿瘤学.第3版.北京：人民卫生出版社，2000.209.

　　2 周隽.肿瘤抑制基因PTEN的研究进展.癌变·畸变·突变，2002，14：131134.

　　3 Goel A,Arnold CN,Niedzwicki D,et al.Frequent inactivation of PTEN by promoter hypermethylation in microsatellite instabilityhigh sporadic colorectal cancers.Cancer Res,2004,64:30143021.

　　4 张伟峰.PTEN基因的研究进展.国外医学外科分册，2003，30：294296.

　　5 张培荣，郑锦花，王艳萍，等.Survivin和PTEN蛋白在宫颈鳞癌细胞中的表达及意义.临床肿瘤学杂志，2007，12：271275.

　　6 Harima Y,Sawada S,Nagata K,et al.Mutation of the PTEN gene in advanced cervical cancer correlated with tumor progression and poor outcome after radiotherapy.Int J Oncol，2001,18:493498.

　　7 周琦，叶学正，唐郢，等.抑癌基因PTEN在宫颈癌中的表达及与预后的关系.肿瘤学杂志，2007，13：121122.